【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及酶检测，尤其涉及用于检测qprt活性的组合物、qprt活性的检测方法与应用。
技术介绍
1、喹啉酸磷酸核糖基转移酶（qprt）作为一种关键的酶，在吡啶核苷酸合成途径中起着至关重要的作用。目前主流的qprt活性的检测方法为质谱法。其中，通过对qprt催化反应产物进行质谱分析，可以准确、快速地测定其活性，从而为相关疾病的药物研发提供有效的技术手段。具体地，选取适合质谱分析的qprt底物，通过质谱法对qprt催化反应的不同时间点进行取样分析，得到酶反应产物的质谱图谱。通过对质谱图谱的解析，能够准确测定底物和产物的相对含量，从而计算出qprt的活性。质谱法作为一种检测qprt活性的方法虽然具有许多优点，但也存在一些缺点。例如，质谱法需要复杂的设备和专业技能进行操作，对操作者的技术要求较高，且需要专门的培训。质谱法设备价格昂贵，运行和维护成本也较高，限制其在一些实验室中的广泛应用。对于质谱分析，需要对样品进行适当的制备处理，包括提取、纯化和预处理，这会增加测试的复杂性和时间。某些情况下，质谱法可能对酶活性的检测灵敏度不足，尤其是针对低活性酶或低丰度的样品。质谱数据的处理和分析通常需要专业软件和技能，可能需要专门的数据分析人员来解释和理解结果。
2、因此，现有技术还有待于改进和发展。
技术实现思路
1、基于上述现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供用于检测qprt活性的组合物、qprt活性的检测方法与应用，旨在解决现有检测qprt活性的方法存在操作复杂、需要昂贵仪器
2、本专利技术的技术方案如下：
3、本专利技术的第一方面，提供一种用于检测qprt活性的组合物，其中，所述用于检测qprt酶活性的组合物包括喹啉酸、5-磷酸核糖-1-焦磷酸、腺嘌呤核苷三磷酸、ftnade*、谷氨酰胺、nmn生物发光探针和nmn生物发光探针底物；
4、所述nmn生物发光探针的氨基酸序列如seq id no：1所示；
5、其中，qprt为喹啉酸磷酸核糖基转移酶，nmn为尼古丁酰胺腺嘌呤核苷酸，ftnade*为nmn合成酶。
6、可选地，所述用于检测qprt活性的组合物还包括镁盐。
7、本专利技术的第二方面，提供一种本专利技术如上所述的用于检测qprt活性的组合物在检测qprt活性中的应用，所述检测qprt活性为非疾病诊断的目的。
8、本专利技术的第三方面，提供一种本专利技术如上所述的用于检测qprt活性的组合物在筛选qprt靶点药物中的应用。
9、可选地，所述qprt靶点药物为qprt激活剂或qprt抑制剂。
10、本专利技术的第四方面，提供一种qprt活性的检测方法，其中，所述qprt活性的检测为非疾病诊断的目的，所述qprt活性的检测方法采用本专利技术如上所述的用于检测qprt活性的组合物，所述qprt活性的检测方法包括如下步骤：
11、s11、将nmn生物发光探针、nmn生物发光探针底物与含有不同nmn浓度的溶液进行混合，得到混合液；检测440nm和590nm波长处混合液的发光强度，计算两处波长处混合液的发光强度比，利用发光强度比与混合液的nmn浓度绘制得到标准曲线；
12、s12、提供含有不同浓度喹啉酸的反应液，所述反应液包括待测qprt、喹啉酸、5-磷酸核糖-1-焦磷酸、腺嘌呤核苷三磷酸、ftnade*、谷氨酰胺和第一缓冲液；
13、s13、将所述含有不同浓度喹啉酸的反应液反应第一预设时间后，取一定量反应液用高氯酸终止反应后，与nmn生物发光探针和nmn生物发光探针底物混合，检测440nm和590nm波长处的发光强度，计算两处波长处的发光强度比；
14、s14、根据所述发光强度比和所述标准曲线，得到含有不同浓度喹啉酸的反应液反应第一预设时间后nmn的浓度，从而获得含有不同浓度喹啉酸的反应液中nmn的生成速率；
15、s15、将nmn的生成速率对喹啉酸浓度作图，根据米氏方程进行拟合，得到nmn生成速率的最大值，记作vmax，用vmax表征qprt的活性。
16、可选地，所述反应液具体包括0~1mm的喹啉酸、1mm的5-磷酸核糖-1-焦磷酸、1mm的腺嘌呤核苷三磷酸、5ng/μl的ftnade*和1mm的谷氨酰胺。
17、可选地，所述第一缓冲液包括50mm的4-羟乙基哌嗪乙磺酸、150mm的nacl和2mm的mgcl2，所述第一缓冲液的ph为7.4。
18、本专利技术的第五方面，提供一种qprt靶点药物的筛选方法，其中，所述qprt靶点药物的筛选方法采用本专利技术如上所述的用于检测qprt活性的组合物，所述qprt靶点药物的筛选方法包括如下步骤：
19、s21、将nmn生物发光探针、nmn生物发光探针底物与含有不同nmn浓度的溶液进行混合，得到混合液；检测440nm和590nm波长处混合液的发光强度，计算两处波长处混合液的发光强度比，利用发光强度比与混合液的nmn浓度绘制得到标准曲线；
20、s22、分别提供对照组反应液和实验组反应液，所述对照组反应液包括二甲基亚砜、qprt、喹啉酸、5-磷酸核糖-1-焦磷酸、腺嘌呤核苷三磷酸、ftnade*、谷氨酰胺和第二缓冲液，所述实验组反应液包括待测药物、qprt、喹啉酸、5-磷酸核糖-1-焦磷酸、腺嘌呤核苷三磷酸、ftnade*、谷氨酰胺和第二缓冲液；
21、s23、将所述对照组反应液和实验组反应液分别反应第二预设时间后，检测440nm和590nm波长处的发光强度，计算两处波长处的发光强度比，并根据所述标准曲线，得到对照组反应液反应第二预设时间后nmn的浓度和实验组反应液反应第二预设时间后nmn的浓度；
22、s24、计算实验组反应液反应第二预设时间后nmn的浓度与对照组反应液反应第二预设时间后nmn的浓度的比值，记作r；或，根据实验组反应液反应第二预设时间后nmn的浓度与对照组反应液反应第二预设时间后nmn的浓度，计算实验组反应液反应第二预设时间后生成的nmn的物质的量与对照组反应液反应第二预设时间后生成的nmn的物质的量的比值，记作r；
23、s25、根据r的大小，筛选qprt靶点药物：
24、当r大于1时，待测药物为qprt激活剂；
25、当r小于1时，待测药物为qprt抑制剂；
26、若r等于1时，待测药物不影响qprt活性。
27、可选地，所述对照组反应液具体包括二甲基亚砜、0.5ng/μl的qprt、5ng/μl的ftnade*、1mm的喹啉酸、1mm的5-磷酸核糖-1-焦磷酸、1mm的腺嘌呤核苷三磷酸和1mm的谷氨酰胺；
28、所述实验组反应液具体包括10μm的待测药物、0.5ng/μl的qprt、5ng/μl的ftnade*、1mm的喹啉酸、1mm的5-磷酸核糖-1-焦磷酸、1mm的腺嘌呤核苷三磷酸和1mm的谷氨酰胺；
29、所述第二缓冲液包括50mm的4-羟乙基本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于检测QPRT活性的组合物，其特征在于，所述用于检测QPRT酶活性的组合物包括喹啉酸、5-磷酸核糖-1-焦磷酸、腺嘌呤核苷三磷酸、FtnadE*、谷氨酰胺、NMN生物发光探针和NMN生物发光探针底物；
2.根据权利要求1所述的用于检测QPRT活性的组合物，其特征在于，所述用于检测QPRT活性的组合物还包括镁盐。
3.一种如权利要求1-2任一项所述的用于检测QPRT活性的组合物在检测QPRT活性中的应用，所述检测QPRT活性为非疾病诊断的目的。
4.一种如权利要求1-2任一项所述的用于检测QPRT活性的组合物在筛选QPRT靶点药物中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述QPRT靶点药物为QPRT激活剂或QPRT抑制剂。
6.一种QPRT活性的检测方法，其特征在于，所述QPRT活性的检测为非疾病诊断的目的，所述QPRT活性的检测方法采用权利要求1所述的用于检测QPRT活性的组合物，所述QPRT活性的检测方法包括如下步骤：
7.根据权利要求6所述的QPRT活性的检测方法，其特征在于，所述
8.根据权利要求7所述的QPRT活性的检测方法，其特征在于，所述第一缓冲液包括50mM的4-羟乙基哌嗪乙磺酸、150mM的NaCl和2mM的MgCl2，所述第一缓冲液的pH为7.4。
9.一种QPRT靶点药物的筛选方法，其特征在于，所述QPRT靶点药物的筛选方法采用权利要求1所述的用于检测QPRT活性的组合物，所述QPRT靶点药物的筛选方法包括如下步骤：
10.根据权利要求9所述的QPRT靶点药物的筛选方法，其特征在于，所述对照组反应液具体包括二甲基亚砜、0.5ng/μL的QPRT、5ng/μL的FtnadE*、1mM的喹啉酸、1mM的5-磷酸核糖-1-焦磷酸、1mM的腺嘌呤核苷三磷酸和1mM的谷氨酰胺；
...【技术特征摘要】
1.一种用于检测qprt活性的组合物，其特征在于，所述用于检测qprt酶活性的组合物包括喹啉酸、5-磷酸核糖-1-焦磷酸、腺嘌呤核苷三磷酸、ftnade*、谷氨酰胺、nmn生物发光探针和nmn生物发光探针底物；
2.根据权利要求1所述的用于检测qprt活性的组合物，其特征在于，所述用于检测qprt活性的组合物还包括镁盐。
3.一种如权利要求1-2任一项所述的用于检测qprt活性的组合物在检测qprt活性中的应用，所述检测qprt活性为非疾病诊断的目的。
4.一种如权利要求1-2任一项所述的用于检测qprt活性的组合物在筛选qprt靶点药物中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述qprt靶点药物为qprt激活剂或qprt抑制剂。
6.一种qprt活性的检测方法，其特征在于，所述qprt活性的检测为非疾病诊断的目的，所述qprt活性的检测方法采用权利要求1所述的用于检测qprt活性的组合物，所述qprt活性的...
【专利技术属性】
技术研发人员：段若晨，於邱黎阳，
申请(专利权)人：中国科学院深圳先进技术研究院，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。