【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
技术实现思路
【技术保护点】
1.一种用于监测扩增反应的方法，包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述可猝灭标记是荧光团。
3.根据权利要求1-2中任一项所述的方法，其中所述可猝灭标记位于所述第一质量控制引物的3’重叠区之外。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述可猝灭标记位于所述第一质量控制引物的5’末端处。
5.根据权利要求1-2中任一项所述的方法，其中所述可猝灭标记位于所述第一质量控制引物的3’重叠区中。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述第二质量控制引物包含猝灭剂。
7.根据权利要求6所述的方法，其中所述猝灭剂位于所述第二质量控制引物的3’重叠区之外。
8.根据权利要求7所述的方法，其中所述猝灭剂位于所述第二质量控制引物的5’末端处。
9.根据权利要求6所述的方法，其中所述猝灭剂位于所述第二质量控制引物的3’重叠区中。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述第一质量控制引物、所述第二质量控制引物或两者包含一个或更多个修饰的核苷酸。
11.根据权利
12.根据权利要求10-11中任一项所述的方法，其中所述一个或更多个修饰的核苷酸包括间隔物、无碱基位点、未甲基化RNA碱基、2’-O-甲基化核苷酸及其任何组合。
13.根据权利要求10-12中任一项所述的方法，其中所述一个或更多个修饰的核苷酸中的至少一个是2’-O-甲基化核苷酸。
14.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述第一质量控制引物、所述第二质量控制引物或两者包含一个或更多个聚合酶终止子。
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述第一质量控制引物和所述第二质量控制引物的3’重叠区的每一个包含一个或更多个聚合酶终止子。
16.根据权利要求14-15中任一项所述的方法，其中所述一个或更多个聚合酶终止子中的至少一个是2’-O-甲基化核苷酸。
17.根据权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述第一质量控制引物的3’重叠区与所述第二质量控制引物的3’重叠区互补。
18.根据权利要求17所述的方法，其中所述第一质量控制引物的3’重叠区与所述第二质量控制引物的3’重叠区完全互补。
19.根据权利要求1-18中任一项所述的方法，其中所述第一质量控制引物的3’重叠区和所述第二质量控制引物的3’重叠区具有相同的长度。
20.根据权利要求1-19中任一项所述的方法，其中所述第一质量控制引物的3’重叠区和所述第二质量控制引物的3’重叠区中的一个或更多个的长度是约2个至约10个核苷酸。
21.根据权利要求1-20中任一项所述的方法，其中所述第一质量控制引物和所述第二质量控制引物的3’重叠区的长度是4个或5个核苷酸。
22.根据权利要求1-21中任一项所述的方法，其中(b)使所述第一质量控制引物和所述第二质量控制引物接触在所述扩增条件下进行。
23.根据权利要求1-22中任一项所述的方法，其中(d)在所述扩增反应期间检测从所述第一质量控制引物的所述可猝灭标记产生的所述信号包括在所述扩增反应期间在两个或更多个不同时间点检测所述信号。
24.根据权利要求1-23中任一项所述的方法，其中在所述扩增反应期间所述信号的降低包括在所述扩增反应期间随时间推移的降低。
25.根据权利要求24所述的方法，其中在所述扩增反应期间所述信号的降低包括在所述扩增反应期间在约10分钟的时间段内的降低。
26.根据权利要求24所述的方法，其中所述时间段在从所述扩增反应开始起约3分钟至约12分钟之间。
27.根据权利要求1-26中任一项所述的方法，包括在所述扩增反应之前、在所述扩增反应之后或两者检测所述第一质量控制引物的所述可猝灭标记的所述信号。
28.根据权利要求1-27中任一项所述的方法，其中所述扩增反应是实时扩增反应。
29.根据权利要求1-28中任一项所述的方法，其中所述扩增反应是PCR反应。
30.根据权利要求1-28中任一项所述的方法，其中所述扩增反应包括以下中的一种或更多种：古细菌聚合酶扩增(APA)、环介导的等温扩增(LAMP)、解旋酶依赖性扩增(HDA)、重组酶聚合酶扩增(RPA)、链置换扩增(SDA)、基于核酸序列的扩增(NASBA)、转录介导的扩增(TMA)、切口酶扩增反应(NEAR)、滚环扩增(RCA)、多重置换扩增(M...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种用于监测扩增反应的方法，包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述可猝灭标记是荧光团。
3.根据权利要求1-2中任一项所述的方法，其中所述可猝灭标记位于所述第一质量控制引物的3’重叠区之外。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述可猝灭标记位于所述第一质量控制引物的5’末端处。
5.根据权利要求1-2中任一项所述的方法，其中所述可猝灭标记位于所述第一质量控制引物的3’重叠区中。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述第二质量控制引物包含猝灭剂。
7.根据权利要求6所述的方法，其中所述猝灭剂位于所述第二质量控制引物的3’重叠区之外。
8.根据权利要求7所述的方法，其中所述猝灭剂位于所述第二质量控制引物的5’末端处。
9.根据权利要求6所述的方法，其中所述猝灭剂位于所述第二质量控制引物的3’重叠区中。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述第一质量控制引物、所述第二质量控制引物或两者包含一个或更多个修饰的核苷酸。
11.根据权利要求10所述的方法，其中所述第一质量控制引物和所述第二质量控制引物的3’重叠区的每一个包含一个或更多个修饰的核苷酸。
12.根据权利要求10-11中任一项所述的方法，其中所述一个或更多个修饰的核苷酸包括间隔物、无碱基位点、未甲基化rna碱基、2’-o-甲基化核苷酸及其任何组合。
13.根据权利要求10-12中任一项所述的方法，其中所述一个或更多个修饰的核苷酸中的至少一个是2’-o-甲基化核苷酸。
14.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述第一质量控制引物、所述第二质量控制引物或两者包含一个或更多个聚合酶终止子。
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述第一质量控制引物和所述第二质量控制引物的3’重叠区的每一个包含一个或更多个聚合酶终止子。
16.根据权利要求14-15中任一项所述的方法，其中所述一个或更多个聚合酶终止子中的至少一个是2’-o-甲基化核苷酸。
17.根据权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述第一质量控制引物的3’重叠区与所述第二质量控制引物的3’重叠区互补。
18.根据权利要求17所述的方法，其中所述第一质量控制引物的3’重叠区与所述第二质量控制引物的3’重叠区完全互补。
19.根据权利要求1-18中任一项所述的方法，其中所述第一质量控制引物的3’重叠区和所述第二质量控制引物的3’重叠区具有相同的长度。
20.根据权利要求1-19中任一项所述的方法，其中所述第一质量控制引物的3’重叠区和所述第二质量控制引物的3’重叠区中的一个或更多个的长度是约2个至约10个核苷酸。
21.根据权利要求1-20中任一项所述的方法，其中所述第一质量控制引物和所述第二质量控制引物的3’重叠区的长度是4个或5个核苷酸。
22.根据权利要求1-21中任一项所述的方法，其中(b)使所述第一质量控制引物和所述第二质量控制引物接触在所述扩增条件下进行。
23.根据权利要求1-22中任一项所述的方法，其中(d)在所述扩增反应期间检测从所述第一质量控制引物的所述可猝灭标记产生的所述信号包括在所述扩增反应期间在两个或更多个不同时间点检测所述信号。
24.根据权利要求1-23中任一项所述的方法，其中在所述扩增反应期间所述信号的降低包括在所述扩增反应期间随时间推移的降低。
25.根据权利要求24所述的方法，其中在所述扩增反应期间所述信号的降低包括在所述扩增反应期间在约10分钟的时间段内的降低。
26.根据权利要求24所述的方法，其中所述时间段在从所述扩增反应开始起约3分钟至约12分钟之间。
27.根据权利要求1-26中任一项所述的方法，包括在所述扩增反应之前、在所述扩增反应之后或两者检测所述第一质量控制引物的所述可猝灭标记的所述信号。
28.根据权利要求1-27中任一项所述的方法，其中所述扩增反应是实时扩增反应。
29.根据权利要求1-28中任一项所述的方法，其中所述扩增反应是pcr反应。
30.根据权利要求1-28中任一项所述的方法，其中所述扩增反应包括以下中的一种或更多种：古细菌聚合酶扩增(apa)、环介导的等温扩增(lamp)、解旋酶依赖性扩增(hda)、重组酶聚合酶扩增(rpa)、链置换扩增(sda)、基于核酸序列的扩增(nasba)、转录介导的扩增(tma)、切口酶扩增反应(near)、滚环扩增(rca)、多重置换扩增(mda)、分支扩增(ram)、环状解旋酶依赖性扩增(chda)、单引物等温扩增(spia)、信号介导的rna扩增技术(smart)、自持序列复制(3sr)、基因组指数扩增反应(gear)和等温多重置换扩增(imda)。
31.根据权利要求1-28中任一项所述的方法，其中所述扩增反应是等温扩增反应。
32.根据权利要求31所述的方法，其中所述扩增条件包括具有超嗜热生物聚合酶活性的酶、dntp和缓冲剂中的一种或更多种。
33.根据权利要求32所述的方法，其中所述具有超嗜热生物聚合酶活性的酶具有与seqid no:1的氨基酸序列或其功能片段至少约90％相同的氨基酸序列，并且任选地所述具有超嗜热生物聚合酶活性的酶包含seq id no:1的氨基酸序列。
34.根据权利要求31-33中任一项所述的方法，其中所述等温扩增反应包括约30℃至约72℃的恒定温度，并且任选地所述等温扩增反应包括约67℃的恒定温度。
35.根据权利要求31-34中任一项所述的方法，其中所述等温扩增反应进行持续约5分钟至约60分钟的时间段。
36.根据权利要求31-35中任一项所述的方法，其中所述等温扩增反应在无解旋酶、无单链结合蛋白、无裂解剂和无重组酶的等温...
【专利技术属性】
技术研发人员：G·A·理查特，雪莉·布赖斯·图拉，伊扬·玛丽·泰勒，张红华，
申请(专利权)人：贝克顿迪金森公司，
类型：发明
国别省市：
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