【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及组织培养，更具体地说，它涉及一种大桥虎耳草高效再生的方法。
技术介绍
1、虎耳草属(saxi fraga tourn.ex l.)植物全球分布广泛，有440-500种，为虎耳草科(saxifragaceae)最大的属，我国南北均有分布，主要分布在西南、青海和甘肃等地，多生长在海拔3000m高山岩石上或石缝间。目前国际登录的虎耳草品种有1600多种，而我国只有3种，在虎耳草属品种选育和开发利用方面有较大的研究空间。虎耳草植物喜阴湿，耐贫瘠，耐寒，耐旱，适应能力强。虎耳草花色艳丽，花型小巧，叶形别致，叶背具有斑点，较高的观赏价值，已经应用于园林绿化中，可作为盆栽，垂直绿化及园林造景点缀等。
2、另外，因虎耳草植物含有多元酚类、黄酮类、有机酸类等多种次生代谢产物，虎耳草植物还具有较多的药用价值，有消炎、抗病毒、护肝、抗癌、抗氧化等作用。但目前虎耳草属植物研究主要集中在药效和药理上，繁育技术的研究报道较少，有关组织培养方面的研究鲜有报道，没有建立成熟和完善的再生体系。
3、目前，虎耳草一般采用播种繁殖和利用匍匐茎进行分株繁殖，繁殖系数少，限制了其开发利用的途径。研究虎耳草属植物的繁殖途径对其种质资源的合理利用具有重要的现实意义。
技术实现思路
1、针对现有技术存在的不足，本专利技术的目的在于提供一种大桥虎耳草高效再生的方法，采用大桥虎耳草组培苗的叶片为外植体，建立了大桥虎耳草叶片高效的再生体系，确定了适宜诱导愈伤诱导培养基、增殖培养基、生根培养基及合适
2、本专利技术的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：
3、一种大桥虎耳草高效再生的方法，步骤如下：
4、(1)材料处理：选取约0.5cm*0.5cm大小的大桥虎耳草组培苗的叶片作为外植体；
5、(2)愈伤组织和不定芽的诱导：将外植体接种到愈伤诱导培养基上进行培养，诱导出不定芽，其中，所述愈伤诱导培养基包括1/2ms培养基和第一生长调节剂组；
6、所述第一生长调节剂组是6-ba和的naa；或所述第一生长调节剂组是kt和naa；或所述第一生长调节剂组是tdz和naa；
7、(3)不定芽的增殖：将步骤(2)获得的不定芽接入增殖培养基中，使不定芽增殖，其中，所述增殖培养基包括1/2ms培养基和第二生长调节剂组；
8、所述第二生长调节剂组是6-ba和naa；或所述第二生长调节剂组是kt和naa；或所述第二生长调节剂组是tdz和naa；
9、(4)瓶内生根培养：将步骤(3)获得的增殖的不定芽分成丛芽后转入生根培养基中进行培养，获得生根的丛芽，其中，所述生根培养基包括1/2ms培养基和iba；
10、(5)炼苗移栽：将增殖的无根芽炼苗后移栽到基质中，培养形成新植株。
11、在其中一个实施例中，在步骤(2)中，所述第一生长调节剂组是1～3mg·l-1的6-ba和0.2mg·l-1的naa；或所述第一生长调节剂组是1～4mg·l-1的kt和0.2mg·l-1的naa；或所述第一生长调节剂组是0.05～0.4mg·l-1的tdz和0.2mg·l-1的naa。
12、在其中一个实施例中，在步骤(2)中，培养温度为25±1℃，将外植体在暗处培养15d后移到光照下继续培养，直至诱导出不定芽，其中，在光照条件下培养时，光照为27～36μmo l·m-2·s-1，光照时间为12h·d-1。
13、在其中一个实施例中，在步骤(3)中，所述第二生长调节剂组是0.5～1mg·l-1的6-ba和0.2mg·l-1的naa；或所述第二生长调节剂组是1～2mg·l-1的kt和0.2mg·l-1的naa；或所述第二生长调节剂组是0.1～0.2mg·l-1的tdz和0.2mg·l-1的naa。
14、在其中一个实施例中，在步骤(3)中，不定芽的增殖培养在光照条件下进行，光照为27～36μmo l·m-2·s-1，光照时间为12h·d-1。
15、在其中一个实施例中，在步骤(4)中，iba的浓度为0～0.5mg·l-1。
16、在其中一个实施例中，在步骤(4)中，在暗处进行瓶内生根培养。
17、在其中一个实施例中，在步骤(5)中，基质是泥炭土、珍珠岩和蛭石形成的混合物，其中，泥炭土、珍珠岩和蛭石的体积比为2:1:1。
18、在其中一个实施例中，在步骤(5)中，基质是珍珠岩+蛭石形成的混合物，其中，珍珠岩和蛭石的体积比为1:2。
19、在其中一个实施例中，在步骤(5)中，培养条件是：培养温度为25±1℃，光照为27～36μmo l·m-2·s-1，光照时间为12h·d-1。
20、综上所述，本专利技术具有以下有益效果：
21、本专利技术采用大桥虎耳草组培苗的叶片为外植体，建立了大桥虎耳草叶片高效的再生体系，确定了适宜诱导愈伤诱导培养基、增殖培养基、生根培养基及合适的组培苗移栽的基质，生根的丛芽移栽后生长良好，为大桥虎耳草的种苗繁育，遗传育种及虎耳草属植物开发利用提供新的思路。
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1.一种大桥虎耳草高效再生的方法，其特征在于，步骤如下：
2.如权利要求1所述的大桥虎耳草高效再生的方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述第一生长调节剂组是1～3mg·L-1的6-BA和0.2mg·L-1的NAA；或所述第一生长调节剂组是1～4mg·L-1的KT和0.2mg·L-1的NAA；或所述第一生长调节剂组是0.05～0.4mg·L-1的TDZ和0.2mg·L-1的NAA。
3.如权利要求1所述的大桥虎耳草高效再生的方法，其特征在于，在步骤(2)中，培养温度为25±1℃，将外植体在暗处培养15d后移到光照下继续培养，直至诱导出不定芽，其中，在光照条件下培养时，光照为27～36μmol·m-2·s-1，光照时间为12h·d-1。
4.如权利要求1所述的大桥虎耳草高效再生的方法，其特征在于，在步骤(3)中，所述第二生长调节剂组是0.5～1mg·L-1的6-BA和0.2mg·L-1的NAA；或所述第二生长调节剂组是1～2mg·L-1的KT和0.2mg·L-1的NAA；或所述第二生长调节剂组是0.1～0.2mg·L-1的TDZ和0.2mg·L-1
5.如权利要求1所述的大桥虎耳草高效再生的方法，其特征在于，在步骤(3)中，不定芽的增殖培养在光照条件下进行，光照为27～36μmol·m-2·s-1，光照时间为12h·d-1。
6.如权利要求1所述的大桥虎耳草高效再生的方法，其特征在于，在步骤(4)中，IBA的浓度为0～0.5mg·L-1。
7.如权利要求1所述的大桥虎耳草高效再生的方法，其特征在于，在步骤(4)中，在暗处进行瓶内生根培养。
8.如权利要求1所述的大桥虎耳草高效再生的方法，其特征在于，在步骤(5)中，基质是泥炭土、珍珠岩和蛭石形成的混合物，其中，泥炭土、珍珠岩和蛭石的体积比为2:1:1。
9.如权利要求1所述的大桥虎耳草高效再生的方法，其特征在于，在步骤(5)中，基质是珍珠岩+蛭石形成的混合物，其中，珍珠岩和蛭石的体积比为1:2。
10.如权利要求1所述的大桥虎耳草高效再生的方法，其特征在于，在步骤(5)中，培养条件是：培养温度为25±1℃，光照为27～36μmol·m-2·s-1，光照时间为12h·d-1。
...【技术特征摘要】
1.一种大桥虎耳草高效再生的方法，其特征在于，步骤如下：
2.如权利要求1所述的大桥虎耳草高效再生的方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述第一生长调节剂组是1～3mg·l-1的6-ba和0.2mg·l-1的naa；或所述第一生长调节剂组是1～4mg·l-1的kt和0.2mg·l-1的naa；或所述第一生长调节剂组是0.05～0.4mg·l-1的tdz和0.2mg·l-1的naa。
3.如权利要求1所述的大桥虎耳草高效再生的方法，其特征在于，在步骤(2)中，培养温度为25±1℃，将外植体在暗处培养15d后移到光照下继续培养，直至诱导出不定芽，其中，在光照条件下培养时，光照为27～36μmol·m-2·s-1，光照时间为12h·d-1。
4.如权利要求1所述的大桥虎耳草高效再生的方法，其特征在于，在步骤(3)中，所述第二生长调节剂组是0.5～1mg·l-1的6-ba和0.2mg·l-1的naa；或所述第二生长调节剂组是1～2mg·l-1的kt和0.2mg·l-1的naa；或所述第二生长调节剂组是0.1～0.2mg·l-1的tdz和0.2m...
【专利技术属性】
技术研发人员：韩伟，于白音，麦广威，张金樾，梁泳欣，黄倩，谢冬玉，
申请(专利权)人：韶关学院，
类型：发明
国别省市：
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