【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医学，具体涉及一种用于鉴别痰湿型及非痰湿型多囊卵巢综合征的生物标志物及其应用。
技术介绍
1、多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome，pcos)是女性常见的内分泌及代谢紊乱性疾病，是生殖与代谢并存的慢性非传染性疾病，排卵异常、高雄激素血症、胰岛素抵抗、肥胖等是pcos主要的临床表现，根据不同的诊断标准，发病率在6-20％。随着现代生活习惯变化、食物摄取增多、运动量减少，现代研究逐渐从pcos引起的生殖异常过渡至生殖与代谢异常。研究报道，pcos患者机体脂肪和肌肉量的比例异常增加，并发肥胖的概率达60％，并发脂代谢异常的概率高达70％，并发胰岛素抵抗及高胰岛素血症的概率高达50-70％，肥胖、胰岛素抵抗、高雄激素血症之间得恶性循环又可加重pcos代谢紊乱，随着年龄的增长，罹患高血压、冠心病、糖尿病的风险逐渐增高，远期可并发恶性肿瘤。分析pcos流行病学数据，可以发现pcos流行特征可概括为“三高一低”：发病率高、高雄激素血症患者比例高、继发代谢综合征比例高、重视程度低。
2、近年来，关于多囊卵巢综合征的治疗引发诸多关注，但有效的干预策略仍然有限。许多中药经典方剂在调节女性内分泌功能、激素水平、月经等方面具有一定优势，中医治疗多囊卵巢综合征的疗效越来越受到重视。pcos属中医学“月经后期”、“闭经”、“崩漏”、“不孕”、“癥瘕”的范畴。pcos病机复杂，常涉及气血、阴阳、脏腑多个方面。2012年版中华中医药学会中医妇科常见病诊疗指南将pcos辨证分为肾阴虚证、肾阳虚证、痰
3、中医证候是反映疾病发展过程中某一阶段病理变化的本质，相比临床症状能更全面、更深刻、更正确揭示疾病的本质。现代中医学家认为，证并非单一的特异性的物质，而是一组相关物质，这些物质是在证发生发展过程中产生的特殊物质群，决定着证发生发展的动态变化过程。上世纪80年代，沈自尹院士首次提出了“微观辨证”的概念，发展至今日，“微观辨证”现在被定义为应用现代科学技术检测生物体内的微观指标，达到利用微观指标认识和辨别“证”的过程。它是中医临床诊治、循证医学发展和中医证候学发展的需要，也是中医药临床发展的重要出路之一。
4、组学技术建立在分子生物学基础上，结合了大规模信息提取技术和多元变量处理技术，可以被作为重要的方法学平台去揭示疾病内部各组分的物质基础及它们之间的相互作用和运行规律，通过组学技术确定易感个体的特征，将有助于对易患某些综合征及并发症的女性进行个体化治疗。蛋白质组学的概念是1994年由澳大利亚麦考瑞大学的wilkins等首次提出的，其目的是通过各种技术手段对蛋白质在生物体内的表达进行多层次评估，从而更加熟悉复杂的生理病理过程。
5、基于质谱的蛋白质组学方法可以同时测量数千种蛋白质的绝对或相对丰度，在通量及灵敏度方面超过其他方法。此外，它还提供了一种几乎通用的检测方法，没有特异性或灵敏度限制。目前蛋白质组学在pcos中的应用主要集中在探索发病机制、寻找生物标志物和药物治疗靶点、预防远期并发症等方面。中医诊疗疾病往往通过整体的方式，经常同时处理多个目标，这给治疗的成分和效果带来了复杂性，这种整体论在快速发展的组学技术中遇到了对应。在微观水平上利用蛋白质组学检测机体疾病状表达态下的蛋白，可以直接反映机体当下阶段的病理生理机制，从而在微观层面认识“证”的发生。近年来，它在中医研究中的地位越来越高，在中医研究中的作用也越来越重要。
6、而在中医药研究中，蛋白质组学的应用主要集中于中医证候和中药药理研究。高金金等应用临床及蛋白质组学结合的方法观察补肾化痰方治疗多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome，pcos)痰湿证的疗效，发现补肾化痰方治疗pcos痰湿证的作用机制可能与调控炎症反应、糖脂代谢、抗氧化反应、补体活化调节等病理环节相关。张丽华等采用基于双向电泳的蛋白质组学技术分析pcos大鼠卵巢的差异蛋白表达谱，成功鉴定8个蛋白点，并得出了丹栀逍遥散通过增加β-arr2表达，调控β-arr2介导的信号通路防治pcos的结论，并且后续用免疫组化、蛋白免疫印迹和荧光定量pcr验证了结果的准确性。总体上蛋白质组学在pcos中的研究还处在起步阶段，但随着生物信息学等相关技术的进步，蛋白质组学及相关技术将在pcos中有更多的、更深入的应用。
7、目前，关于多囊卵巢综合征生物学标志物的蛋白质组学研究如li等采用2-de技术和质谱分析对10例pcos患者及10例正常人的卵巢样本进行蛋白质组学研究，结果在两组卵巢中共发现了18种差异表达的蛋白，其中13个蛋白质在pcos患者的卵巢中表达上调，另外5个蛋白质表达下调，并采用蛋白印记(western blot，wb)法和免疫组化(immunohistochemistry，ihc)的方法进行验证，结果显示孕激素膜受体1、视黄醇结合蛋白1、热休克蛋白90b1、钙调蛋白1、膜联蛋白a6和原肌球蛋白2在pcos患者的卵巢中显著升高。杭晨等采用抗体蛋白质芯片检测pcos患者与正常女性的血清，结果发现7种生长因子和6种炎性反应因子、白细胞介素1受体ⅱ(il－1rⅱ)、胰岛素样生长因子结合蛋白1(igfbp-1)、igfbp4、血管内皮生长因子受体2、细胞间黏附分子1和泌乳素等23种因子在pcos组升高，生长调节癌基因、il-8和siglec-5这3种因子在pcos组降低，并选择血小板源性生长因子bb及脂联素acrp30进行elisa验证，结果显示差异有统计学意义。choi等采用2-de联合lc-ms/ms技术对11例pcos患者和14例正常女性的卵巢颗粒细胞进行蛋白质组学研究，结果共鉴定出20个差异蛋白，并通过免疫印迹分析，发现载脂蛋白ai(apolipoprotein，apoa-i)可作为pcos患者卵巢颗粒细胞的生物标志物。国内的研究也发现，pcos患者与正常女性血清中的apoa-i和热休克蛋白(heat shock protein，hsp)70表达存在差异，有可能是pcos的生物标志物。这些蛋白质的发现不仅提供了诊断pcos的潜在生物学标志物，而且有助于我们认识pcos的分子机制及寻找药物的治疗靶点。
8、但是，尚未有pcos中医分型的蛋白组学生物标志物研究，仅有部分关于pcos中医痰湿型代谢组学的研究。目前研究针对pcos痰湿证的临床诊断过多地依赖于该疾病的临床表现而忽视对病理及机制的深入探讨，缺乏统一客观的、标准的本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于鉴别痰湿型及非痰湿型多囊卵巢综合征的生物标志物，其特征在于，所述生物标志物包括以下23个蛋白中任意一种或至少两种的组合。
2.根据权利要求1所述的用于鉴别痰湿型及非痰湿型多囊卵巢综合征的生物标志物，其特征在于，所述生物标志物包括至少5种的组合。
3.权利要求1或2所述的用于鉴别痰湿型及非痰湿型多囊卵巢综合征的生物标志物在制备痰湿型及非痰湿型多囊卵巢综合征辅助诊断产品中的应用。
4.一种用于鉴别痰湿型及非痰湿型多囊卵巢综合征的模型，其特征在于，所述模型采用包括如下步骤的方法构建得到：
5.根据权利要求4所述的用于鉴别痰湿型及非痰湿型多囊卵巢综合征的模型，其特征在于，步骤(1)中，所述生物标志物包括如下31个组合中任意一种。
6.根据权利要求4所述的用于鉴别痰湿型及非痰湿型多囊卵巢综合征的模型，其特征在于，步骤(2)中，使用10次重复*10折交叉验证方法将数据分为训练集和测试集；
7.根据权利要求6所述的用于鉴别痰湿型及非痰湿型多囊卵巢综合征的模型，其特征在于，所述逻辑回归算法的公式如下所示：
...【技术特征摘要】
1.一种用于鉴别痰湿型及非痰湿型多囊卵巢综合征的生物标志物，其特征在于，所述生物标志物包括以下23个蛋白中任意一种或至少两种的组合。
2.根据权利要求1所述的用于鉴别痰湿型及非痰湿型多囊卵巢综合征的生物标志物，其特征在于，所述生物标志物包括至少5种的组合。
3.权利要求1或2所述的用于鉴别痰湿型及非痰湿型多囊卵巢综合征的生物标志物在制备痰湿型及非痰湿型多囊卵巢综合征辅助诊断产品中的应用。
4.一种用于鉴别痰湿型及非痰湿型多囊卵巢综合征的模型，其特征在于，所述模型采用包括如下步骤的方法构建得到：
5.根据权利要求4所述的用于鉴别痰湿型及非痰湿型多囊卵巢综合征的模型，其特征在于，步骤(1)中，所述生物标志物包括如下31个组合中任意一种。
6.根据权利要求4所述的用于鉴别痰湿型及非痰湿型多囊卵巢综合征的模型，其特征在于，步骤(2)中，使用10次重复*10折交叉...
【专利技术属性】
技术研发人员：曹正，辛明蔚，翟燕红，韩倩，许正文，成晓亮，张磊，张伟，
申请(专利权)人：首都医科大学附属北京妇产医院，
类型：发明
国别省市：
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