【技术实现步骤摘要】
本专利技术生物医学或生物制药，更具体涉及一种抗her2纳米抗体及其制备方法和应用。
技术介绍
1、人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,her2,erbb2)是一种由erbb基因编码的酪氨酸激酶受体膜糖蛋白，属于表皮生长因子受体家族成员。her2表达异常时，正常细胞和组织易于发生癌变，导致肿瘤形成。已知在人类多种肿瘤中，包括乳腺癌、胃癌、结肠癌、卵巢癌、肺癌、前列腺癌等，都发现有her2原癌基因扩增或者蛋白过表达现象。
2、her2包括三个结构域：胞外配体结合域(ecd)、短跨膜区和胞内酪氨酸激酶结构域，其ecd共630个氨基酸，包含4个domain(domain i–iv)。抗体与her2不同的domain结合后，发挥作用的机理和生物学功能不完全相同，这也给了her2靶点新的开发思路。例如her2靶点经典的曲妥珠和帕妥珠单抗所结合的domain就不同，曲妥珠单抗通过与her2的细胞外近膜的ecd4结合，导致her2信号传导抑制；帕妥珠单抗与her2的ecd2结合，阻止与her2和her3的同源二聚化和异源二聚化，成为成功的治疗肿瘤的方法，使得患者生存率及生存期显著提高，但抗体治疗仍存在用药受限和毒副作用等问题，her2仍是目前非常重要的肿瘤治疗靶点。
3、相较于传统单克隆抗体，纳米抗体分子质量小、穿透力强、灵敏度高、特异性强、稳定性好；当它进入体内后，可高效穿透细胞来快速捕获抗原以达到治疗目的。在疾病诊断方面，单克隆抗体虽然也被用于肿瘤成
4、因此，本领域迫切需要开发用于特异性靶向her2的基于纳米抗体的各类型药物。
技术实现思路
1、本专利技术的目的就是提供一种抗her2纳米抗体及其制备方法和应用。
2、本专利技术的另一目的在于提供基于抗her2纳米抗体的抗体、嵌合抗原受体、融合蛋白、重组蛋白及其编码核酸、表达载体、宿主细胞、免疫偶联物等，并提供包括以上活性成分的药物组合物。
3、本专利技术的又一目的在于提供预防和/或治疗her2高表达疾病的方法，以及抗her2高表达疾病的诊断方法。
4、在本专利技术的第一方面，提供了一种抗her2纳米抗体，所述抗her2纳米抗体具有选自下组的一种或多种互补决定区cdr：
5、(1)seq id no:27所示的cdr1、seq id no:28所示的cdr2和seq id no:29所示的cdr3；
6、(2)seq id no:34所示的cdr1、seq id no:35所示的cdr2和seq id no:36所示的cdr3；
7、(3)seq id no:40所示的cdr1、seq id no:41所示的cdr2和seq id no:42所示的cdr3；
8、(4)seq id no:46所示的cdr1、seq id no:47所示的cdr2和seq id no:48所示的cdr3；
9、(5)seq id no:52所示的cdr1、seq id no:53所示的cdr2和seq id no:54所示的cdr3；
10、(6)seq id no:57所示的cdr1、seq id no:58所示的cdr2和seq id no:59所示的cdr3；
11、(7)seq id no:63所示的cdr1、seq id no:64所示的cdr2和seq id no:65所示的cdr3；
12、(8)seq id no:69所示的cdr1、seq id no:70所示的cdr2和seq id no:71所示的cdr3；
13、(9)seq id no:74所示的cdr1、seq id no:75所示的cdr2和seq id no:76所示的cdr3；
14、(10)seq id no:27所示的cdr1、seq id no:28所示的cdr2和seq id no:80所示的cdr3；
15、(11)seq id no:83所示的cdr1、seq id no:84所示的cdr2和seq id no:85所示的cdr3；
16、(12)seq id no:57所示的cdr1、seq id no:58所示的cdr2和seq id no:89所示的cdr3；
17、(13)seq id no:91所示的cdr1、seq id no:92所示的cdr2和seq id no:93所示的cdr3；
18、(14)seq id no:97所示的cdr1、seq id no:98所示的cdr2和seq id no:99所示的cdr3。
19、在另一优选例中，上述氨基酸序列中任意一种氨基酸序列还包括任选地经过添加、缺失、修饰和/或取代至少一个(如1-3个，较佳地1-2个，更佳地1个)氨基酸并能保留与her2特异性结合能力的衍生序列。
20、在另一优选例中，所述的经过添加、缺失、修饰和/或取代至少一个氨基酸的，并能够保留与her2特异性结合能力的衍生序列为同源性或序列相同性为至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的氨基酸序列。
21、在另一优选例中，所述的cdr1、cdr2和cdr3分别由vhh链的骨架区fr1、fr2、fr3和fr4依次所隔开。
22、在另一优选例中，所述抗her2纳米抗体具有式(i)所示的结构：
23、fr1-cdr1-fr2-cdr2-fr3-cdr3-fr4式(i)
24、其中，所述“-”各自独立地为连接肽或肽键。
25、在另一优选例中，所述抗her2纳米抗体的cdr1区和cdr3区之间存在环间二硫键。
26、在另一优选例中，所述抗her2纳米抗体还包括骨架区fr。
27、在另一优选例中，所述骨架区fr为选自下组的一种或多种：
28、(1)seq id no:30所示的fr1、seq id no:31所示的fr2、seq id no:32所示的fr3和seq id no:33所示的fr4；
29、(2)seq id no:37所示的fr1、seq id no:38所示的fr2、seq id no:39所示的fr3和seq id no:33所示的fr4；
30、(3)seq id no:43所示的fr1、seq id no:44所示的fr2、seq id no:45所示的fr3和seq id no:33所示的fr4；
【技术保护点】
1.一种抗HER2纳米抗体，其特征在于，所述抗HER2纳米抗体具有选自下组的一种或多种互补决定区CDR：
2.如权利要求1所述的抗HER2纳米抗体，其特征在于，所述抗HER2纳米抗体还包括骨架区FR，所述骨架区FR为选自下组的一种或多种：
3.如权利要求1所述的抗HER2纳米抗体，其特征在于，所述抗HER2纳米抗体的VHH链的氨基酸序列选自SEQ ID NO:6-20中的一种或多种。
4.一种抗HER2抗体，其特征在于，所述抗HER2抗体包括一个或多个如权利要求1-3中任一项所述的抗HER2纳米抗体的VHH链。
5.如权利要求4所述的抗HER2抗体，其特征在于，所述抗HER2抗体包括单体、二价抗体，和/或多价抗体。
6.一种嵌合抗原受体(CAR)，其特征在于，所述CAR含有一胞外结构域，所述胞外结构域包含如权利要求1-3中任一项所述的抗HER2纳米抗体，或如权利要求4-5中任一项所述的抗HER2抗体。
7.一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白具有：
8.一种重组蛋白，其特征在于，所述重组蛋白具有
9.一种多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码选自下组的蛋白：如权利要求1-3中任一项所述的抗HER2纳米抗体、如权利要求4-5中任一项所述的抗HER2抗体、如权利要求6所述的嵌合抗原受体、如权利要求7所述的融合蛋白、如权利要求8所述的重组蛋白，或其组合。
10.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体含有如权利要求9所述的多核苷酸。
...【技术特征摘要】
1.一种抗her2纳米抗体，其特征在于，所述抗her2纳米抗体具有选自下组的一种或多种互补决定区cdr：
2.如权利要求1所述的抗her2纳米抗体，其特征在于，所述抗her2纳米抗体还包括骨架区fr，所述骨架区fr为选自下组的一种或多种：
3.如权利要求1所述的抗her2纳米抗体，其特征在于，所述抗her2纳米抗体的vhh链的氨基酸序列选自seq id no:6-20中的一种或多种。
4.一种抗her2抗体，其特征在于，所述抗her2抗体包括一个或多个如权利要求1-3中任一项所述的抗her2纳米抗体的vhh链。
5.如权利要求4所述的抗her2抗体，其特征在于，所述抗her2抗体包括单体、二价抗体，和/或多价抗体。
...【专利技术属性】
技术研发人员：徐银凤，姜会春，郑彬彬，李婷婷，王璐，李蕾，唐甜，蒋立仲，李宗艳，王建刚，吴明远，
申请(专利权)人：康立泰生物医药青岛有限公司，
类型：发明
国别省市：
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