【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，尤其是涉及一种间充质干细胞来源的小细胞外囊泡的特异性标志物组合及其应用。
技术介绍
1、小细胞外囊泡(small extracellular vesicles，sevs)是一种由磷脂双分子层膜组成的，直径小于200nm的微小囊泡。几乎所有活细胞都能分泌sevs，其膜表面和腔内通常含有蛋白质、脂质、核酸等生物活性成分。通过递送其自身携带的生物活性成分至靶细胞，sevs能够介导细胞间的通讯，影响周围或远端的其他细胞的行为，发挥特定的生物功能。其中，间充质干细胞来源的小细胞外囊泡(mesenchymal stem cell derived smallextracellular vesicles，msc-sevs)在疾病治疗，尤其是促进损伤组织器官的修复与再生方面的功能被不断发现，备受广大学者的关注。
2、msc-sevs包含了母体干细胞的磷脂、蛋白质、rna、microrna和dna片段等物质，其可向受体细胞传递这些来自母体干细胞的活性物质而发挥干细胞样生物学功能，如促进细胞增殖迁移、抑制细胞凋亡、调节炎症反应、促进血管再生等作用。研究表明msc-sevs在心脏、肝脏、肾脏、运动系统及中枢神经系统等组织损伤的修复再生中具有显著的促进作用。另外，使用msc-sevs进行组织修复和疾病治疗能够避免干细胞的直接移植带来的成瘤和血管栓塞等风险，同时msc-sevs还具有低免疫原性，高效穿过各种人体屏障(皮肤、黏膜、血脑屏障等)、以及便于产业化生产和运输的特点，展现出诱人的临床转化应用前景。
3、目前
4、因此，寻找msc-sevs的特异性标志物，并利用这些特异性标志物进一步建立快速、简便的msc-sevs鉴定方法，对于推动msc-sevs的临床转化应用有实际意义。
5、中国专利cn117147817a公开了一种多能干细胞来源小细胞外囊泡的特征性标志物组合及其应用。多能干细胞来源小细胞外囊泡的特征性标志物组合包括：跨膜蛋白podxl及其糖基化表位tra-1-60和tra-1-81，和膜表面抗原ssea-4，以及标志物cd9，cd63以及cd81。该申请方案利用这些可靠的多能干细胞来源小细胞外囊泡的特征性标志物及其组合进行单囊泡水平的纳米流式分析，能够实现简便、快速地鉴定间充质干细胞来源小细胞外囊泡。由于不同的细胞来源的小细胞外囊泡的特征性标志物是完全不同的，因此，基于该方案的内容本领域技术人员并不能得到间充质干细胞来源的小细胞外囊泡的特异性标志物组合。
技术实现思路
1、鉴于现有技术中间充质干细胞来源小细胞外囊泡(msc-sevs)鉴定存在的技术缺陷，本专利技术提供一种间充质干细胞来源小细胞外囊泡的特征性标志物组合及其应用。
2、本专利技术的目的可以通过以下技术方案来实现：
3、本专利技术首先提供一种间充质干细胞来源小细胞外囊泡的特征性标志物组合，所述特征性标志物组合包括：氨肽酶n(aminopeptidase n，简称为ampn，cd抗原名称为cd13)，整合素β-1(recombinant integrin beta 1，简称为itgb1，cd抗原名称为cd29)，膜糖蛋白thy-1(简称thy1，cd抗原名称为cd90)，以及标志物cd9，cd63以及cd81。为了方便描述，后文中统一使用标志物的cd抗原名称。
4、本专利技术还提供一种鉴定间充质干细胞来源小细胞外囊泡的方法，基于所述间充质干细胞来源小细胞外囊泡的特征性标志物组合来鉴定小细胞外囊泡是否为间充质干细胞来源小细胞外囊泡；
5、基于间充质干细胞来源小细胞外囊泡的特征性标志物组合，对待检测的小细胞外囊泡进行免疫荧光染色，
6、当cd13阳性颗粒比例大于50％，且cd29阳性颗粒比例大于50％，且cd90阳性颗粒比例大于50％，且cd81阳性颗粒比例大于50％，且cd9/cd63/cd81阳性颗粒比例大于70％时，鉴定小细胞外囊泡为间充质干细胞来源的小细胞外囊泡；
7、当cd13阳性颗粒比例大于50％，且cd29阳性颗粒比例大于50％，且cd90阳性颗粒比例大于50％，且cd81阳性颗粒比例大于50％，且cd9/cd63/cd81阳性颗粒比例大于70％时这五个条件不同时达到时，鉴定小细胞外囊泡为非间充质干细胞来源的小细胞外囊泡。
8、在本专利技术的一个实施方式中，检测cd13阳性颗粒比例的方法为：
9、在免疫荧光染色时，加入cd13对应的荧光标记的适配体分子，然后孵育后，统计cd13阳性颗粒比例；
10、检测cd29阳性颗粒比例的方法为：
11、在免疫荧光染色时，加入cd29对应的荧光标记的适配体分子，然后孵育后，统计cd29阳性颗粒比例；
12、检测cd90阳性颗粒比例的方法为：
13、在免疫荧光染色时，加入cd90对应的荧光标记的适配体分子，然后孵育后，统计cd90阳性颗粒比例；
14、检测cd81阳性颗粒比例的方法为：
15、在免疫荧光染色时，加入cd81对应的荧光标记的适配体分子，然后孵育后，统计cd81阳性颗粒比例；
16、检测cd9/cd63/cd81阳性颗粒比例的方法为：
17、在免疫荧光染色时进行三种标志物cd9/cd63/cd81的联合染色，即本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种间充质干细胞来源小细胞外囊泡的特征性标志物组合，其特征在于，所述特征性标志物组合包括：CD13、CD29、CD90、CD9、CD63以及CD81。
2.一种鉴定间充质干细胞来源小细胞外囊泡的方法，其特征在于，基于权利要求1所述间充质干细胞来源小细胞外囊泡的特征性标志物组合来鉴定小细胞外囊泡是否为间充质干细胞来源小细胞外囊泡；
3.根据权利要求2所述的一种鉴定间充质干细胞来源小细胞外囊泡的方法，其特征在于，检测CD13阳性颗粒比例的方法为：
4.根据权利要求3所述的一种鉴定间充质干细胞来源小细胞外囊泡的方法，其特征在于，使用荧光标记的能够特异性识别CD13，CD29，CD90，CD9，CD63，CD81的适配体分子对样品进行免疫荧光染色，所述适配体分子选自抗体或核酸适配体；
5.根据权利要求2所述的一种鉴定间充质干细胞来源小细胞外囊泡的方法，其特征在于，在进行免疫荧光染色前，计算颗粒蛋白比，颗粒蛋白比大于1*10^8particles/μgprotein，且颗粒浓度在5*10^9particles/mL以上的样品进行后续免疫荧
6.根据权利要求2所述的一种鉴定间充质干细胞来源小细胞外囊泡的方法，其特征在于，使用荧光标记的能够特异性识别CD13，CD29，CD90，CD9，CD63，CD81的适配体分子对样品进行免疫荧光染色时，分别用荧光标记的适配体分子和样本在37℃孵育30min。
7.根据权利要求2所述的一种鉴定间充质干细胞来源小细胞外囊泡的方法，其特征在于，进行免疫荧光染色后，去除免疫荧光染色后未结合的游离的荧光标记的适配体分子，以降低游离荧光干扰，去除方法选自超速离心法、超滤法或尺寸排阻色谱法。
8.根据权利要求2所述的一种鉴定间充质干细胞来源小细胞外囊泡的方法，其特征在于，进行免疫荧光染色，且去除免疫荧光染色后未结合的游离的荧光标记的适配体分子后，进行单囊泡水平的纳米流式分析，获得CD13阳性颗粒比例、CD29阳性颗粒比例、CD90阳性颗粒比例、CD81阳性颗粒比例以及CD9/CD63/CD81阳性颗粒比例。
9.根据权利要求2所述的一种鉴定间充质干细胞来源小细胞外囊泡的方法，其特征在于，包括以下步骤：
10.基于权利要求1所述间充质干细胞来源小细胞外囊泡的特征性标志物组合的应用，其特征在于，所述特征性标志物组合的应用选自以下中的一种：
...【技术特征摘要】
1.一种间充质干细胞来源小细胞外囊泡的特征性标志物组合，其特征在于，所述特征性标志物组合包括：cd13、cd29、cd90、cd9、cd63以及cd81。
2.一种鉴定间充质干细胞来源小细胞外囊泡的方法，其特征在于，基于权利要求1所述间充质干细胞来源小细胞外囊泡的特征性标志物组合来鉴定小细胞外囊泡是否为间充质干细胞来源小细胞外囊泡；
3.根据权利要求2所述的一种鉴定间充质干细胞来源小细胞外囊泡的方法，其特征在于，检测cd13阳性颗粒比例的方法为：
4.根据权利要求3所述的一种鉴定间充质干细胞来源小细胞外囊泡的方法，其特征在于，使用荧光标记的能够特异性识别cd13，cd29，cd90，cd9，cd63，cd81的适配体分子对样品进行免疫荧光染色，所述适配体分子选自抗体或核酸适配体；
5.根据权利要求2所述的一种鉴定间充质干细胞来源小细胞外囊泡的方法，其特征在于，在进行免疫荧光染色前，计算颗粒蛋白比，颗粒蛋白比大于1*10^8particles/μgprotein，且颗粒浓度在5*10^9particles/ml以上的样品进行后续免疫荧光染色以及鉴定；
6.根据权利要求2所述的一种鉴...
【专利技术属性】
技术研发人员：李青，罗磊，汪泱，陈政升，顾潮，
申请(专利权)人：上海艾棵颂生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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