【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于化学分析，具体涉及一种茶叶中游离脂肪酸的衍生化检测方法。
技术介绍
1、脂肪酸(fatty acid)是由脂肪族碳氢链和一个末端羧基组成的有机化合物的总称，它可以与甘油结合生成脂肪，故名脂肪酸。脂肪酸是生物体维持正常新陈代谢不可或缺的物质，人体内的脂肪酸大部分来源于食物。脂肪酸是很多食物中都富含的一种营养物质，特别是人体自身无法合成的亚油酸、亚麻酸等多不饱和脂肪酸，必需从食物中摄取。食品中的脂肪酸主要以脂肪等结合态存在，以游离形式存在的脂肪酸尽管含量相对较少，它们对食品的风味和质量能够产生重要的影响。因此，食品中游离脂肪酸检测对于食品质量控制、营养评估和化学特征分析具有重要的意义。
2、茶是一种深受全球消费者喜爱的健康饮料。茶叶中已知含有700多种有机化合物，脂质是重要组成成分之一，约占茶叶干重的8％。脂质不仅是一种重要的营养物质，还与茶叶的感官品质有关。香气是影响茶叶风味和品质的最重要因素之一，直接影响饮茶者对茶叶优劣的感官评价。脂质降解被认为是茶叶香气形成的最重要过程之一。在茶叶加工过程中，一些脂质会降解形成游离脂肪酸。脂肪酸本身具有香气，它们也是芳香挥发物的重要前体，对茶叶香气有重要贡献。此外，茶叶储存过程中不饱和脂肪酸的氧化和酸败是茶叶品质劣变的重要原因。因此，定性和定量分析茶叶中游离脂肪酸对于茶叶风味特征分析和茶叶质量控制具有重要意义。
3、尽管脂肪酸的分子结构简单，对它们进行准确的定性和定量分析仍然具有挑战性。目前检测脂肪酸的方法有色谱法、色谱质谱联用法、光谱法等。由于色谱质谱联
4、虽然衍生化极大地提高了质谱分析的灵敏度，但是来自于衍生化过程的过量衍生试剂以及催化剂、脱水剂等辅助试剂通常对色谱和质谱带来不同程度的污染。另外，真实样品中不同碳链长度的脂肪酸性质和含量差异极大，在一次分析中，实现短、中、长和超长链脂肪酸的同时测定仍然具有一定的挑战。因此，开发一种简单易得、操作方便、高灵敏、无需后处理且对离子源无污染的新型衍生化试剂，用于茶叶中脂肪酸的lc-ms检测具有重要的意义。
技术实现思路
1、针对现有技术存在的问题，本专利技术的目的在于设计提供一种茶叶中游离脂肪酸的衍生化检测方法的技术方案。
2、本专利技术具体采用以下技术方案实现：
3、本专利技术第一方面提供了一种茶叶中游离脂肪酸的衍生化检测方法，其将待测样品中的脂肪酸衍生化为2-(二甲氨基)乙基脂肪酸酯，再使用液相色谱-质谱法对衍生产物进行检测。
4、进一步，所述衍生化采用的衍生试剂为2-(二甲氨基)溴乙烷、2-(二甲氨基)溴乙烷盐酸盐或2-(二甲氨基)溴乙烷氢溴酸盐。
5、进一步，该方法具体包括以下步骤：
6、(1)将待测样品使用有机溶剂萃取，得到提取液；
7、(2)将脂肪酸标准品、同位素标记的衍生试剂、三乙胺和乙腈混合，反应后得到脂肪酸衍生产物同位素内标溶液；
8、(3)将脂肪酸标准品、衍生试剂、三乙胺和乙腈混合，反应后得到脂肪酸衍生产物溶液，并用乙腈稀释得到5-8个不同浓度梯度的脂肪酸衍生产物溶液；
9、(4)将步骤(1)得到的提取液、衍生试剂、三乙胺和乙腈混合，反应后得到样品中脂肪酸衍生产物溶液；
10、(5)将步骤(2)得到脂肪酸衍生产物同位素内标溶液和步骤(3)得到的不同浓度的脂肪酸衍生产物溶液混合，过滤，使用液相色谱质谱联用法对滤液进行检测，根据脂肪酸标准品浓度与脂肪酸衍生产物和同位素标记的脂肪酸衍生产物的质谱响应峰面积比值绘制出标准曲线；
11、(6)将步骤(2)和(4)得到的衍生产物溶液混合，过滤得到待测液，使用液相色谱质谱联用法对待测液进行检测，通过内标法计算得到待测样品中脂肪酸的含量。
12、进一步，该方法中所述步骤(1)中的有机溶剂为氯仿、乙酸乙酯、甲基叔丁基醚、丙酮、乙腈或甲醇。
13、进一步，该方法中所述步骤(2)中同位素标记的衍生试剂为2-(二甲氨基-d6)溴乙烷、2-(二甲氨基-d6)溴乙烷盐酸盐或2-(二甲氨基-d6)溴乙烷氢溴酸盐。
14、进一步，该方法中所述步骤(2)中脂肪酸标准品的浓度为0.05mg/l，所述步骤(3)中脂肪酸标准品的浓度为0.05mg/l。
15、进一步，该方法中所述步骤(2)、(3)和(4)中同位素标记的衍生试剂和衍生试剂的浓度都为20mg/ml，三乙胺的浓度为3mg/ml。
16、进一步，该方法中述步骤(2)、(3)和(4)中反应温度为20-60℃，例如可以是20℃、30℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃等，反应时间为10-60min，例如可以是10min、20min、30min、40min、50min、60min等。
17、进一步，该方法中所述步骤(5)和(6)中，所述的液相色谱质谱联用使用c18液相色谱柱，质谱电离方式为电喷雾正模式。
18、本专利技术第二方面提供了2-(二甲氨基)溴乙烷、2-(二甲氨基)溴乙烷盐酸盐或2-(二甲氨基)溴乙烷氢溴酸盐作为脂肪酸衍生试剂在茶叶中游离脂肪酸衍生化检测中的应用。
19、本专利技术提供了一种游离脂肪酸的衍生化检测方法，所述检测方法以2-(二甲氨基)溴乙烷为柱前衍生试剂，使用液相色谱-质谱法进行检测。本专利技术通过衍生反应将脂肪酸衍生为2-(二甲氨基)乙基脂肪酸酯，引入了质子化能力很强的叔胺基团，提高了电喷雾质谱检测的灵敏度，降低了脂肪酸的检出限。进一步的，本专利技术以2-(二甲氨基-d6)溴乙烷衍生的脂肪酸为同位素内标，通过内标法定量，消除了基质效应，操作方法简单，结果准确，适用于茶叶中游离脂肪酸的定量分析。与现有的技术相比，本专利技术的优点还在于：样品提取液可直接用于衍生反应；所用的衍生试剂沸点较低，不需要除去过量的衍生剂，反应液可直接进行液相色谱-质谱进样分析，质谱离子源几乎不受污染；衍生反应体系比较简单，只使用了挥发性的有机碱，不使用其他脱水剂、催化剂等，减少对仪器的污染。
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1.一种茶叶中游离脂肪酸的衍生化检测方法，其特征在于，将待测样品中的脂肪酸衍生化为2-(二甲氨基)乙基脂肪酸酯，再使用液相色谱-质谱法对衍生产物进行检测。
2.如权利要求1所述的一种茶叶中游离脂肪酸的衍生化检测方法，其特征在于，所述衍生化采用的衍生试剂为2-(二甲氨基)溴乙烷、2-(二甲氨基)溴乙烷盐酸盐或2-(二甲氨基)溴乙烷氢溴酸盐。
3.如权利要求1或2所述的一种茶叶中游离脂肪酸的衍生化检测方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
4.如权利要求3所述的一种茶叶中游离脂肪酸的衍生化检测方法，其特征在于，所述步骤(1)中的有机溶剂为氯仿、乙酸乙酯、甲基叔丁基醚、丙酮、乙腈或甲醇。
5.如权利要求3所述的一种茶叶中游离脂肪酸的衍生化检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中同位素标记的衍生试剂为2-(二甲氨基-d6)溴乙烷、2-(二甲氨基-d6)溴乙烷盐酸盐或2-(二甲氨基-d6)溴乙烷氢溴酸盐。
6.如权利要求3所述的一种茶叶中游离脂肪酸的衍生化检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中脂肪酸标准品的浓度为0.05mg/L，所述
7.如权利要求3所述的一种茶叶中游离脂肪酸的衍生化检测方法，其特征在于，所述步骤(2)、(3)和(4)中同位素标记的衍生试剂和衍生试剂的浓度都为20mg/mL，三乙胺的浓度为3mg/mL。
8.如权利要求3所述的一种茶叶中游离脂肪酸的衍生化检测方法，其特征在于，述步骤(2)、(3)和(4)中反应温度为20-60℃，反应时间为10-60min。
9.如权利要求3所述的一种茶叶中游离脂肪酸的衍生化检测方法，其特征在于，所述步骤(5)和(6)中，所述的液相色谱质谱联用使用C18液相色谱柱，质谱电离方式为电喷雾正模式。
10.2-(二甲氨基)溴乙烷、2-(二甲氨基)溴乙烷盐酸盐或2-(二甲氨基)溴乙烷氢溴酸盐作为脂肪酸衍生试剂在茶叶中游离脂肪酸衍生化检测中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种茶叶中游离脂肪酸的衍生化检测方法，其特征在于，将待测样品中的脂肪酸衍生化为2-(二甲氨基)乙基脂肪酸酯，再使用液相色谱-质谱法对衍生产物进行检测。
2.如权利要求1所述的一种茶叶中游离脂肪酸的衍生化检测方法，其特征在于，所述衍生化采用的衍生试剂为2-(二甲氨基)溴乙烷、2-(二甲氨基)溴乙烷盐酸盐或2-(二甲氨基)溴乙烷氢溴酸盐。
3.如权利要求1或2所述的一种茶叶中游离脂肪酸的衍生化检测方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
4.如权利要求3所述的一种茶叶中游离脂肪酸的衍生化检测方法，其特征在于，所述步骤(1)中的有机溶剂为氯仿、乙酸乙酯、甲基叔丁基醚、丙酮、乙腈或甲醇。
5.如权利要求3所述的一种茶叶中游离脂肪酸的衍生化检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中同位素标记的衍生试剂为2-(二甲氨基-d6)溴乙烷、2-(二甲氨基-d6)溴乙烷盐酸盐或2-(二甲氨基-d6)溴乙烷氢溴酸盐。
6.如权利要求3...
【专利技术属性】
技术研发人员：柴云峰，刘颖颖，王雪，陈红平，
申请(专利权)人：中国农业科学院茶叶研究所，
类型：发明
国别省市：
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