【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种样品处理方法，特别是涉及一种低成本的快速收集蛋白样品的方法。
技术介绍
1、蛋白印迹（western blotting）是根据抗原抗体特异性结合检测复杂蛋白质中某种蛋白的方法。由于免疫印迹具有sds-page的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性，现已成为蛋白分析的一种常规技术，常用于鉴定某种蛋白，并对蛋白进行定性和半定量分析；结合化学发光检测，可以同时比较多个样品同种蛋白的表达量差异。
2、现如今，市场对于高通量实验的要求相对较高且实验方案也相对复杂，提取蛋白样品是其中关键的一个环节，传统方法在效率方面有一定的局限性，提高效率自然成为关键目标之一。收集蛋白样品的传统方法是加入一定量的细胞裂解液，之后使用细胞刮棒进行刮取收集。目前，市面上所售卖的细胞刮大都只适用于25cm2至175cm2的细胞培养瓶。在进行高通量的实验时，使用细胞刮棒进行挂取收集的方法存在一定缺陷，例如，在收集96孔板中的蛋白样品时，细胞刮棒的宽头刮面并不适用于此场景；在成本控制方面，细胞刮棒也不具备优势，如果重复使用，每使用一次都需要经过清洗、酒精浸泡、晾干等操作步骤，会消耗大量的时间成本和人力成本。利用清洗消毒的传统细胞刮棒，在没有清洁彻底的情况下，会导致收集的蛋白样品污染，从而影响实验效率和结果的准确性。
3、因此，本领域需要研究一种能够低成本的快速收集蛋白样品的方法，用于高通量实验的蛋白质提取，能够保证在蛋白质的提取效率处于较优水平的同时，降低人力成本和时间成本，且不影响后续实验检测的准确性。
>技术实现思路
1、本专利技术所要解决的技术问题在于，提供一种能够低成本的快速收集蛋白样品的方法，包括以下步骤：
2、步骤1、将放有样品的孔板置于冰上，吸出培养基，再使用缓冲液对样品进行清洗；
3、步骤2、清洗结束后，去除缓冲液，加入细胞裂解液，晃动孔板，使裂解液与样品充分接触，静置；
4、步骤3、根据孔板的型号选取移液器吸头，使用移液器吸头的头部或尾部在孔中旋转，刮取样品细胞，使样品细胞在裂解液中充分裂解；
5、步骤4、裂解后静置，之后离心，吸取上清液至新的ep管中，完成蛋白样品收集。
6、具体地，所述步骤1中，所述缓冲液为1×dpbs缓冲液。
7、具体地，所述步骤1中，所述缓冲液为预冷的缓冲液。
8、具体地，所述步骤1中，使用缓冲液对样品进行清洗的次数为两次。
9、具体地，所述步骤2中，所述细胞裂解液为预冷的ripa细胞裂解液。
10、具体地，所述步骤2中，静置时间为5-15min。
11、具体地，所述步骤3中，根据孔板的型号选取移液器吸头的选取方式为：当孔板的孔数为48及以上时，选择200μl的移液器吸头；当孔板的孔数为24及以下时，选择1000μl的移液器吸头。
12、具体地，所述步骤4中，静置的时间为3-10min。
13、具体地，所述步骤4中，离心的条件为4℃，12,000 rpm下离心10min。
14、具体地，步骤1-步骤4均为冰上操作。
15、本专利技术的样品前处理方法具有以下有益效果：
16、1、本专利技术提供的低成本的快速收集蛋白样品的方法，使用实验室常见且价格低廉的移液器吸头作为刮取细胞的直接刮取工具，降低了实验物料成本，此外，移液器吸头无rnase和dnase，可以满足去除热源要求，且由于移液器吸头价格低廉，可避免重复使用，进而防止样品污染情况的发生，提升后续蛋白分析实验的准确性。
17、2、本专利技术提供的低成本的快速收集蛋白样品的方法，移液器的吸头尾部平整，在刮取和破碎细胞时，具有均一稳定的优势，且在对多孔板进行高通量实验时，可以使用多道移液器进行操作，同时快速完成多个样品孔的细胞破碎操作，大大提高了蛋白提取的效率，进一步有利于降低人力成本。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种低成本的快速收集蛋白样品的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述低成本的快速收集蛋白样品的方法，其特征在于，所述步骤1中，所述缓冲液为1×DPBS缓冲液。
3.根据权利要求1所述的低成本的快速收集蛋白样品的方法，其特征在于，所述步骤1中，所述缓冲液为预冷的缓冲液。
4.根据权利要求1所述的低成本的快速收集蛋白样品的方法，其特征在于，所述步骤1中，使用缓冲液对样品进行清洗的次数为两次。
5.根据权利要求1所述的低成本的快速收集蛋白样品的方法，其特征在于，所述步骤2中，所述细胞裂解液为预冷的RIPA细胞裂解液。
6.根据权利要求1所述的低成本的快速收集蛋白样品的方法，其特征在于，所述步骤2中，静置时间为5-15min。
7.根据权利要求1所述的低成本的快速收集蛋白样品的方法，其特征在于，所述步骤3中，根据孔板的型号选取移液器吸头的选取方式为：当孔板的孔数为48及以上时，选择200μL的移液器吸头；当孔板的孔数为24及以下时，选择1000μL的移液器吸头。
8.根据权利要求1所
9. 根据权利要求1所述的低成本的快速收集蛋白样品的方法，其特征在于，所述步骤4中，离心的条件为4℃，12,000 rpm下离心10min。
10.根据权利要求1所述的低成本的快速收集蛋白样品的方法，其特征在于，步骤1-步骤4均为冰上操作。
...【技术特征摘要】
1.一种低成本的快速收集蛋白样品的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述低成本的快速收集蛋白样品的方法，其特征在于，所述步骤1中，所述缓冲液为1×dpbs缓冲液。
3.根据权利要求1所述的低成本的快速收集蛋白样品的方法，其特征在于，所述步骤1中，所述缓冲液为预冷的缓冲液。
4.根据权利要求1所述的低成本的快速收集蛋白样品的方法，其特征在于，所述步骤1中，使用缓冲液对样品进行清洗的次数为两次。
5.根据权利要求1所述的低成本的快速收集蛋白样品的方法，其特征在于，所述步骤2中，所述细胞裂解液为预冷的ripa细胞裂解液。
6.根据权利要求1所述的低成本的快速收集蛋白样品的方法，其特征在于，所述步骤...
【专利技术属性】
技术研发人员：曹艳红，程雪兰，房志文，刘运清，李静雨，刘婕，陆海燕，
申请(专利权)人：辉源生物科技上海有限公司，
类型：发明
国别省市：
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