【技术实现步骤摘要】
本申请涉及基因工程领域，具体而言，涉及一种核心链霉亲和素的基因、重组质粒、菌株及其构建方法。
技术介绍
1、链霉亲和素(streptavidin，简称sa)是一种由阿维丁链霉菌(streptomycesavidinii)分泌的约66kda同源四聚体。链霉亲和素是自然界中已知的最稳定的蛋白质之一，它能在高温、极端的ph、变性剂、降解酶存在的条件下，仍然保持生物活性，且结合了生物素的链霉亲和素具有更好的稳定性。链霉亲和素因为其独特的性质，一分子的链霉亲和素可以与生物素按照1：4的比例特异性结合，从而形成生物素－链霉亲和素系统。
2、完整的链霉亲和素溶解性差、易于聚集。全长的蛋白在阿维丁链霉菌外分泌发酵过程中易被细胞外分泌的蛋白酶酶切，成为不完整的sa蛋白。这种不完整的sa为全长的蛋白去掉两端部分氨基酸片段后形成的，后期研究表明sa氨基酸两端的序列为疏水性序列，是降低全长蛋白溶解性的关键，它的存在也会减弱sa与生物素的亲和能力。当蛋白被分泌到菌体外时，由蛋白酶切去除这两段序列，恢复sa的溶解性，这样可以大大降低它在细胞内由于过多结合生物素造成的细胞毒性，起到保护细胞的作用。核心链霉亲和素(corestreptavidin，csa)是链霉亲和素发挥生物活性的核心区段，csa具有溶解性好，生物活性、稳定性、耐酸、耐尿素及盐酸胍能力高的特点，是当前国内为主要使用的链霉亲和素形式。
3、鉴于对csa的认识，研究技术人员使用大肠杆菌表达csa，但存在以下问题：①蛋白表达量低；②菌源性蛋白其表达速度快无法正确折叠而多为包涵
技术实现思路
1、本申请的内容部分用于以简要的形式介绍构思，这些构思将在后面的具体实施方式部分被详细描述。本申请的内容部分并不旨在标识要求保护的技术方案的关键特征或必要特征，也不旨在用于限制所要求的保护的技术方案的范围。
2、为了解决以上
技术介绍
部分提到的技术问题，本申请的一些实施例提供了一种核心链霉亲和素基因，其表达的蛋白在c端通过分子手段添加赖氨酸序列；该基因序列具有序列表中seq id：no.1所示的核苷酸序列。
3、一种含有链霉亲和素核心基因的重组质粒，：包括如上述的核心链霉亲和素基因。
4、进一步地，所述重组质粒还包括载体petduet、载体petduet-csa-kkk或pet28载体。
5、进一步地，所述重组质粒的基因序列是序列表中seq id：no.2所示的核苷酸序列。
6、一种核心链霉亲和素基因的构建方法，其特征在于，包括：
7、获取核心链霉亲和素前体载体，并以核心链霉亲和素前体载体作为pcr的模板；
8、获取四种设计引物，分别为csa-k-f，csa-k-r，csal-f，csal-r；
9、将四种设计引物和模板依次进行pcr处理并依次构建到petduet和pet28载体上。
10、进一步地，将四种设计引物和模板依次进行pcr处理并依次构建到petduet和pet28载体上的方法包括：
11、使用引物对csa-k-f/csa-k-r对核心链霉亲和素前体载体进行pcr；
12、对petduet载体进行<ndei,xhoi>双酶切；并通过petduet<ndei,xhoi>进行重组连接；
13、获得构建在petduet载体上的核心链霉亲和素petduet-csa-kkk；
14、以petduet-csa-kkk为模板，使用引物对csal-f/csal-r进行pcr；
15、将pet28载体<ndei,noti>双酶切，并通过petduet<ndei,xhoi>进行重组连接；
16、获得构建在pet28载体上的核心链霉亲和素pet28-csa-kkk。
17、进一步地，获得构建在petduet载体上的核心链霉亲和素petduet-csa-kkk的方法包括：将连接产物转化dh5α感受态，在氨苄(ampicillin)存在环境下筛选，挑出测序结果正确的单克隆并提取质粒，获得构建在petduet载体上的核心链霉亲和素petduet-csa-kkk。
18、进一步地，获得构建在pet28载体上的核心链霉亲和素pet28-csa-kkk的方法包括：连接产物转化dh5α感受态，在氨苄(ampicillin)存在环境下筛选，挑出测序结果正确的单克隆并提取质粒，获得构建在pet28载体上的核心链霉亲和素pet28-csa-kkk。
19、一种核心链霉亲和素的基因工程菌株：所述基因工程菌株包括权利要求2-4中任一项所述的重组质粒；所述基因工程菌株的宿主菌为大肠杆菌基因工程菌。
20、本申请的有益效果在于：通过分子技术构建了一种重组核心链霉亲和素，具有结合效率更高和表达量更高的优势。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种核心链霉亲和素基因，其特征在于，核心链霉亲和素基因表达的蛋白在C端通过分子手段添加赖氨酸序列；核心链霉亲和素基因序列具有序列表中SEQ ID：NO.1所示的核苷酸序列。
2.一种含有链霉亲和素核心基因的重组质粒，其特征在于：包括如权利要求1所述的核心链霉亲和素基因。
3.根据权利要求2所述含有链霉亲和素核心基因的重组质粒，其特征在于：所述重组质粒还包括pET28载体。
4.根据权利要求2或3所述含有链霉亲和素核心基因的重组质粒，其特征在于：所述重组质粒的基因序列是序列表中SEQ ID：NO.2所示的核苷酸序列。
5.一种核心链霉亲和素基因的构建方法，其特征在于，包括：
6.根据权利要求5所述的核心链霉亲和素基因的构建方法，其特征在于：
7.根据权利要求6所述的核心链霉亲和素基因的构建方法，其特征在于：
8.根据权利要求6所述的核心链霉亲和素基因的构建方法，其特征在于：
9.一种核心链霉亲和素的基因工程菌株，其特征在于：所述基因工程菌株包括权利要求2-4中任一项所述的重组质粒；<...
【技术特征摘要】
1.一种核心链霉亲和素基因，其特征在于，核心链霉亲和素基因表达的蛋白在c端通过分子手段添加赖氨酸序列；核心链霉亲和素基因序列具有序列表中seq id：no.1所示的核苷酸序列。
2.一种含有链霉亲和素核心基因的重组质粒，其特征在于：包括如权利要求1所述的核心链霉亲和素基因。
3.根据权利要求2所述含有链霉亲和素核心基因的重组质粒，其特征在于：所述重组质粒还包括pet28载体。
4.根据权利要求2或3所述含有链霉亲和素核心基因的重组质粒，其特征在于：所述重组...
【专利技术属性】
技术研发人员：高振飞，钱永常，张科，来灿钢，
申请(专利权)人：杭州纽龙生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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