【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及反义寡核苷酸用于治疗、预防或改善由基因opa1中的突变引起的效应的用途。
技术介绍
1、常染色体显性视神经萎缩(adoa)是世界上最常见的遗传性视神经病变，其中估计的疾病患病率在1/50,000至1/10,000的范围内。opa1是患有adoa的大多数家族中的主要致病基因。
2、adoa经典地在儿童早期表现为进行性视觉衰竭，其中选择性视网膜神经节细胞损失作为定义的病理特性。视觉衰竭发作的平均年龄为7岁，范围为1至16岁。80％的受影响个体在10岁之前是有症状的。在至多20％的病例中，adoa与其它临床表现相关，最常见的是感觉神经耳聋、共济失调、肌病和进行性外眼肌麻痹。这些综合征型adoa变体的显著性已经通过在来自这些患者的骨骼肌活组织检查中鉴定细胞色素c氧化酶(cox)缺陷型肌纤维和多重mtdna缺失来突出，这暗示了opa1在线粒体dna维持中的作用。
3、opa1由3号染色体(3q28–q29)长臂上跨越100kb基因组dna的30个外显子组成，并且蛋白产物是共定位到线粒体内膜的960个氨基酸的多肽。opa1含有由机械酶的动力蛋白超家族的成员共享的高度保守的功能性gtpase结构域并且调节若干重要的细胞过程，包含线粒体网络的稳定性。已经报道超过400种不同的opa1突变导致视神经变性和视觉丧失，范围从经分离的‘显性视神经萎缩’(doa；omim#165500)到命名为‘doaplus’(omim#125250)的更严重的多系统综合征，包含贝尔综合征(behr syndrome)(omim#
4、opa1是一种对于线粒体功能而言是不可缺少的普遍表达的线粒体gtpase。在人类中，opa1通过根据图1a的外显子4、4b和5b或外显子4、5和7的等效物的差异剪接产生至少八种同种型。opa1前体蛋白通过其线粒体靶向序列(mts)被靶向并动员到线粒体。在线粒体中，opa1前体蛋白被切割成锚定到线粒体内膜的长形式(l形式)或被切割成短的可溶性形式(s形式)。
5、完整的opa1基因的编码序列超出了aav载体的包装能力，所述载体的极限小于5kb。此外，对于每个独特的opa1突变，某些形式的crispr/cas9基因校正将需要不同的产物，并且使用靶向opa1前体mrna的反义低聚物的剪接转换策略可能仅靶向突变区(例如，在外显子内，如同反义低聚物药物如艾特普利森(eteplirsen))并且可能不提供功能性蛋白产物。另外，基因替换方法和基因编辑方法两者都需要视网膜下注射病毒载体来实现足够的转染。该程序具有造成视网膜创伤的风险。
6、需要提供针对adoa的新的治疗或预防措施或至少提供补充先前已知治疗的方法。本专利技术寻求提供一种用于治疗、预防或改善adoa的效应的经改进的或替代性方法。
7、对
技术介绍
的先前讨论仅旨在促进对本专利技术的理解。该讨论不是承认或确认所提及的材料中的任何材料在申请的优先权日是或曾经是公知常识的一部分。
技术实现思路
1、本专利技术提供了一种组合物，所述组合物包括反义寡核苷酸，所述反义寡核苷酸与细胞中的opa1基因前体mrna的靶向部分结合，以促进在opa1前体mrna的剪接期间无义介导的rna衰变诱导(nmd)外显子的排除，从而增加编码opa1蛋白的opa1mrna转录物的水平。
2、本专利技术提供了一种增加功能性opa1蛋白表达水平的方法。优选地，功能性opa1的增加在患有adoa的患者体内，更优选地在涉及opa1单倍体不足的adoa中。
3、广泛地，根据本专利技术的一方面，提供了一种经分离或经纯化的反义寡核苷酸，所述经分离或经纯化的反义寡核苷酸与细胞中的opa1基因前体mrna的内含子7结合，以促进在opa1前体mrna的剪接期间源自内含子7的无义介导的rna衰变诱导(nmd)外显子7x的排除。优选地，提供了一种经分离或经纯化的反义寡核苷酸，以通过排除nmd外显子来增加功能性opa1蛋白的翻译。优选地，提供了一种用于诱导功能性opa1蛋白或其部分的产生增加的经分离或经纯化的反义寡核苷酸。
4、在本专利技术的一个方面，提供了一种具有10至50个核苷酸的反义寡核苷酸，所述反义寡核苷酸包括与内含子7或其部分附近或以内的区互补的靶向序列。在本专利技术的另一方面，提供了一种具有10至50个核苷酸的反义寡核苷酸，所述反义寡核苷酸包括与opa1基因转录物的外显子或其部分附近或以内的区互补的靶向序列。
5、根据本专利技术的一方面，提供了一种经分离或经纯化的反义寡核苷酸，所述经分离或经纯化的反义寡核苷酸被设计成通过排除无义介导的rna衰变诱导(nmd)外显子7x来增加功能性opa1蛋白的翻译。优选地，所述反义寡核苷酸是二氨代磷酸酯吗啉代寡核苷酸(phosphorodiamidate morpholino oligonucleotide)。
6、优选地，所述反义寡核苷酸选自由包括表1和表2中列出的序列以及其组合或混合物的组。
7、更具体地，所述反义寡核苷酸可以选自包括以下中的任一者或多者的组：seq idno:1-31；更优选地seq id no:1、2、3、4和7；甚至更优选地seq id no:1、3和4；以及其组合或混合物。
8、在一个实例中，所述反义寡核苷酸选自包括以下中的任一者或多者的组：seq idno:1-31。
9、在一个实例中，所述反义寡核苷酸选自包括以下中的任一者或多者的组：seq idno:1、2、3、4和7。
10、在一个实例中，所述反义寡核苷酸选自包括以下中的任一者或多者的组：seq idno:1、3和4。
11、优选地，所述反义寡核苷酸选自包括表1、2和4中列出的序列以及其组合或混合物的组。
12、更具体地，所述反义寡核苷酸可以选自包括以下中的任一者或多者的组：seq idno:1-31和33-54；更优选地seq id no:1、2、3、4、7和33-44；甚至更优选地seq id no:1、3、4、37、40和44；以及其组合或混合物。
13、在一个实例中，所述反义寡核苷酸选自包括以下中的任一者或多者的组：seq idno:1-31和33-54。
14、在一个实例中，所述反义寡核苷酸选自包括以下中的任一者或多者的组：seq idno:33-54。
15、在一个实例中，所述反义寡核苷酸选自包括以下中的任一者或多者的组：seq idno:1、2、3、4、7和33-44。
16、在一个实例中，所述反义寡核苷酸选自包括以下中的任一者或多者的组：seq idno:33-44。
17、在一个实例中，所述反义寡核苷酸选自包括以下中的任一者或多者的组：seq idno:1、3、4、37、40和44。
18、在一个实例中，所述反义寡核苷酸选自包括以下中的任一者或多者的组：seq idno:37、40和44。例如，所述反本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种经分离或经纯化的反义寡核苷酸，其与OPA1基因前体mRNA的内含子7结合。
2.根据权利要求1所述的经分离或经纯化的反义寡核苷酸，其：
3.根据权利要求1或2所述的经分离或经纯化的反义寡核苷酸，其中所述反义寡核苷酸是二氨代磷酸酯吗啉代寡核苷酸。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的经分离或经纯化的反义寡核苷酸，其中所述反义寡核苷酸选自由以下组成的组：
5.根据权利要求1至4中任一项所述的经分离或经纯化的反义寡核苷酸，其中与尚未施用所述反义寡核苷酸的细胞中的包括外显子7或缺乏外显子7的OPA1基因转录物的相对表达水平或正常生理比率相比，所述反义寡核苷酸在施用于细胞时不改变所述转录物的所述水平或所述比率。
6.一种用于操纵OPA1基因转录物的翻译的方法，所述方法包括以下步骤：
7.一种用于治疗、预防或改善与OPA1表达相关的疾病的效应的方法，所述方法包括以下步骤：
8.一种用于治疗、预防或改善与患者体内的OPA1表达相关的疾病的效应的药物组合物、预防性组合物或治疗性组合物，所述组合物包括：p>
9.一种根据权利要求1至5中任一项所述的经纯化和经分离的反义寡核苷酸的用途，其用于制备用于治疗、预防或改善与OPA1表达相关的疾病的效应的药物。
10.一种用于治疗、预防或改善与患者体内的OPA1表达相关的疾病的效应的试剂盒，所述试剂盒至少包括：
11.根据权利要求6或7所述的方法、根据权利要求8所述的组合物、根据权利要求9所述的用途或根据权利要求10所述的试剂盒，其中所述与OPA1表达相关的疾病：
12.根据权利要求1至5中任一项所述的反义寡核苷酸，其中所述反义寡核苷酸包括骨架修饰。
13.根据权利要求12所述的反义寡核苷酸，其中所述反义寡核苷酸包括骨架修饰，所述骨架修饰包括硫代磷酸酯键或二氨代磷酸酯键。
14.根据权利要求12或权利要求13所述的反义寡核苷酸，其中所述反义寡核苷酸包括二氨代磷酸酯吗啉代、锁核酸、肽核酸、2'-O-甲基、2'-氟代或2'-O-甲氧基乙基部分。
15.根据权利要求12至14中任一项所述的反义寡核苷酸，其中所述反义寡核苷酸包括至少一个经修饰的糖部分。
16.根据权利要求15所述的反义寡核苷酸，其中所述反义寡核苷酸中的每个糖部分是经修饰的糖部分。
17.根据权利要求12至16中任一项所述的反义寡核苷酸，其中所述反义寡核苷酸包括2'-O-甲氧基乙基部分。
18.根据权利要求17所述的反义寡核苷酸，其中所述反义寡核苷酸的每个核苷酸包括2'-O-甲氧基乙基部分。
19.一种用于在哺乳动物细胞中表达根据权利要求1至5的反义RNA(AR)的载体。
20.根据权利要求19中任一项所述的载体，其中表达载体包括用于驱动所述反义RNA在所述哺乳动物细胞中表达的细胞类型选择性或组织选择性启动子。
21.根据权利要求19所述的载体，其中所述细胞类型选择性或组织选择性启动子对于在选自由以下组成的列表的细胞类型或组织中的表达具有选择性：眼组织、视网膜神经节细胞、神经元细胞、神经胶质细胞、星形胶质细胞和光感受器。
22.根据权利要求19至21中任一项所述的载体，其中所述载体包括诱导型启动子。
23.根据权利要求19至21中任一项所述的载体，其中所述载体是非病毒载体。
24.根据权利要求19至21中任一项所述的载体，其中所述载体是病毒载体。
25.根据权利要求24所述的载体，其中所述病毒载体是选自由以下组成的组的重组病毒：腺相关病毒(AAV)、腺病毒、慢病毒和指环病毒(anellovirus)。
26.根据权利要求1至5、12至18中任一项所述的反义寡核苷酸或载体，其中所述反义寡核苷酸或所述反义RNA的核苷酸序列由以下组成：10至50个核苷酸、15至40个核苷酸、18至40个核苷酸、17至25个核苷酸、20至35个核苷酸、20至30个核苷酸、22至30个核苷酸、24至30个核苷酸、25至30个核苷酸或26至30个核苷酸。
27.根据权利要求1至5所述的反义寡核苷酸或载体，其中所述反义寡核苷酸或所述反义RNA的核苷酸序列由20至30个核苷酸组成。
28.根据权利要求27所述的反义寡核苷酸，其中所述反义寡核苷酸包括一个或多个二氨代磷酸酯吗啉代部分。
29.根据权利要求1至5或12至16中任一项所述的反义寡核苷酸，其中所述反义寡核苷酸进一步包括连接的功能性部分。
30.根据权利要求29所述的反义寡...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种经分离或经纯化的反义寡核苷酸，其与opa1基因前体mrna的内含子7结合。
2.根据权利要求1所述的经分离或经纯化的反义寡核苷酸，其：
3.根据权利要求1或2所述的经分离或经纯化的反义寡核苷酸，其中所述反义寡核苷酸是二氨代磷酸酯吗啉代寡核苷酸。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的经分离或经纯化的反义寡核苷酸，其中所述反义寡核苷酸选自由以下组成的组：
5.根据权利要求1至4中任一项所述的经分离或经纯化的反义寡核苷酸，其中与尚未施用所述反义寡核苷酸的细胞中的包括外显子7或缺乏外显子7的opa1基因转录物的相对表达水平或正常生理比率相比，所述反义寡核苷酸在施用于细胞时不改变所述转录物的所述水平或所述比率。
6.一种用于操纵opa1基因转录物的翻译的方法，所述方法包括以下步骤：
7.一种用于治疗、预防或改善与opa1表达相关的疾病的效应的方法，所述方法包括以下步骤：
8.一种用于治疗、预防或改善与患者体内的opa1表达相关的疾病的效应的药物组合物、预防性组合物或治疗性组合物，所述组合物包括：
9.一种根据权利要求1至5中任一项所述的经纯化和经分离的反义寡核苷酸的用途，其用于制备用于治疗、预防或改善与opa1表达相关的疾病的效应的药物。
10.一种用于治疗、预防或改善与患者体内的opa1表达相关的疾病的效应的试剂盒，所述试剂盒至少包括：
11.根据权利要求6或7所述的方法、根据权利要求8所述的组合物、根据权利要求9所述的用途或根据权利要求10所述的试剂盒，其中所述与opa1表达相关的疾病：
12.根据权利要求1至5中任一项所述的反义寡核苷酸，其中所述反义寡核苷酸包括骨架修饰。
13.根据权利要求12所述的反义寡核苷酸，其中所述反义寡核苷酸包括骨架修饰，所述骨架修饰包括硫代磷酸酯键或二氨代磷酸酯键。
14.根据权利要求12或权利要求13所述的反义寡核苷酸，其中所述反义寡核苷酸包括二氨代磷酸酯吗啉代、锁核酸、肽核酸、2'-o-甲基、2'-氟代或2'-o-甲氧基乙基部分。
15.根据权利要求12至14中任一项所述的反义寡核苷酸，其中所述反义寡核苷酸包括至少一个经修饰的糖部分。
16.根据权利要求15所述的反义寡核苷酸，其中所述反义寡核苷酸中的每个糖部分是经修饰的糖部分。
17.根据权利要求12至16中任一项所述的反义寡核苷酸，其中所述反义寡核苷酸包括2'-o-甲氧基乙基部分。
18.根据权利要求17所述的反义寡核苷酸，其中所述反义寡核苷酸的每个核苷酸包括2'-o-甲氧基乙基部分。
19.一种用于在哺乳动物细胞中表达根据权利要求1至5的反义rna(ar)的载体。
20.根据权利要求19中任一项所述的载体，其中表达载体包括...
【专利技术属性】
技术研发人员：占亚·格赖诺克，基姆·赖斯，萨西威蒙·乌塔马，
申请(专利权)人：PYC治疗有限公司，
类型：发明
国别省市：
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