【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于益生菌，具体涉及动物双歧杆菌乳亚种bbm-19及其应用。
技术介绍
1、在过去的几十年里，母乳被广泛认为是婴儿正常和最佳的饮食起点，其营养成分和生物活性成分的共同作用具有无与伦比的生物效应。从营养、生理和发育的角度来看，母乳喂养对婴儿的积极影响已经得到证实。除了具有多种营养和健康益处外，母乳还具有丰富的微生物群，这是婴儿肠道微生物群的重要来源。因此，直接从母乳中分离培养益生菌将为益生菌产业增添新动力。
2、2013年，dinan及其同事将“精神益生菌”一词定义为一类新型益生菌，可能用于治疗精神疾病。精神益生菌可以调节神经递质和蛋白质，包括gaba、血清素、谷氨酸和脑源性神经营养因子等，这些神经递质和蛋白质在控制神经兴奋-抑制平衡、情绪、认知功能、学习和记忆过程中发挥重要作用。
3、双歧杆菌作为人类主要肠道菌群的主要成员之一，在调节宿主先天和适应性免疫发育、代谢调节、肠脑轴双向调节等方面发挥着关键作用。事实上，使用双歧杆菌作为潜在的活菌膳食补充剂已经成为一种全球趋势。因此，通过活性代谢产物的评价和开发，可以更加精准的作用调控靶点，针对性的改善宿主健康，提升益生菌利用效果。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一株动物双歧杆菌乳亚种菌株及其应用，该菌株为2017年从202份母乳样品中分离、筛选、鉴定后挑选出的一株益生性能优良的菌株。该菌株可代谢产生乳酸、丙酸和丁酸等有机酸，可产生和分泌gaba和血清素，在抑菌、神经调节和助睡眠等领域
2、本研究的第一方面，提供一株动物双歧杆菌乳亚种(bifidobacterium animalissubsp.lactis)菌株，命名为：bbm-19，所述动物双歧杆菌乳亚种保藏于中国微生物菌种保藏管理中心，保藏编号：cgmcc no.25080。
3、较佳地，采样于健康妇女母乳中，将样品震荡混匀，取1ml于含有0.05％l-半胱氨酸盐的mrs固体培养基中，37℃厌氧培养48小时后，接种环挑取单菌落划线于含有0.05％l-半胱氨酸盐的mrs固体培养基中，37℃厌氧培养48h后，挑取白色菌落反复接种筛选，直至得到均一的单个菌落，命名为bbm-19；
4、动物双歧杆菌乳亚种经革兰氏染色为阳性，显微镜下呈短杆状，电镜下呈弯曲、短杆状；在含有0.05％l-半胱氨酸盐的mrs固体培养基上生长，可形成乳白色、不透明、表面光滑湿润、边缘整齐、圆形小菌落；在含有0.05％l-半胱氨酸盐的mrs液体培养基中呈均匀浑浊生长，久置菌体呈白色沉淀。
5、本专利技术提供一种上述双歧杆菌的筛选，其特征在于包括以下步骤：
6、(1)乳酸菌筛选
7、收集母乳样品振荡混匀后，吸取母乳样品1ml，将其涂布到含有0.05％l-半胱氨酸盐的mrs固体培养基上进行培养；培养一段时间后，挑取单菌落进一步使用含有0.05％l-半胱氨酸盐的mrs固体培养基进行划线分离纯化，纯化后再依次进行革兰氏染色镜检实验，符合双歧杆菌鉴定条件的菌株，用甘油保藏储存在-80℃的环境下备用；
8、(2)菌种鉴定
9、采用细菌dna提取试剂盒提取分离到的菌株基因组dna，并对提取的dna进行16srdna序列的pcr扩增，所得pcr产物纯化后进行测序，测序结果进行blast比对，从genbank中找到了相似菌株16s rrna的基因序列，将菌株16s rrna的基因序列与测定的序列共同用neighbor joining法建立系统发育树，1000次随机抽样，计算自引导值评估系统发育树的置信度，最终鉴定结果确定该菌株为动物双歧杆菌乳亚种。
10、筛选得到的动物双歧杆菌乳亚种bbm-19具有较好的耐酸耐胆盐特性，能够作为益生菌可以应用于益生菌发酵乳制品和活菌制剂。
11、上述动物双歧杆菌乳亚种bbm-19不具备溶血能力。
12、上述动物双歧杆菌乳亚种bbm-19发酵上清液未检出腐胺、尸胺、组胺和酪胺。
13、本专利技术还提供了一种菌剂，含有上述方案所述的动物双歧杆菌乳亚种bbm-19，菌剂的有效活菌数≥1×106cfu/ml。
14、本专利技术还提供了上述方案所述的菌剂的制备方法，包括以下步骤：将上述方案所述的动物双歧杆菌乳亚种bbm-19接种于含有0.05％l-半胱氨酸盐的mrs培养基，于37℃厌氧条件下进行培养，得到菌剂。
15、较佳地，所述动物双歧杆菌乳亚种bbm-19具有优良的耐酸耐胆盐特性。
16、本专利技术第二方面提供了动物双歧杆菌乳亚种bbm-19或者所述的菌剂或者所述的制备方法制备得到的菌剂在生成功能活性物质中的应用。
17、所述活性成分包括短链脂肪酸、有机酸及其衍生物、氨基酸及其衍生物以及脑肠轴调节物质中的一种或几种。
18、较佳地，所述动物双歧杆菌乳亚种bbm-19的发酵物包括动物双歧杆菌乳亚种bbm-19的胞外产物。
19、本专利技术第三方面提供了动物双歧杆菌乳亚种bbm-19菌株在抑菌方面的应用。
20、经研究发现，益生菌动物双歧杆菌乳亚种bbm-19菌株可以产生乳酸、丙酸、丁酸和戊酸等有机酸，进而抑制致病菌，增强肠屏障功能以及抗炎效果。
21、本专利技术第四方面提供了动物双歧杆菌乳亚种bbm-19菌株在产gaba和血清素中的应用。
22、经研究发现，动物双歧杆菌乳亚种bbm-19菌株可以分泌产生gaba和血清素，并通过产gaba和血清素这一特性影响神经系统功能，具备改善睡眠质量等功能。
23、本专利技术第五方面提供了动物双歧杆菌乳亚种bbm-19菌剂在失眠小鼠模型中的应用。
24、经研究发现，动物双歧杆菌乳亚种bbm-19菌株可以调节由对氯苯丙氨酸诱导的失眠小鼠体内血清素和gaba水平。
25、本专利技术提供了动物双歧杆菌乳亚种bbm-19或者动物双歧杆菌乳亚种bbm-19的发酵物或者含有动物双歧杆菌乳亚种bbm-19和/或动物双歧杆菌乳亚种bbm-19的发酵物的菌剂在生成功能性活性产物中的应用；所述功能活性物质包括短链脂肪酸、有机酸及其衍生物、氨基酸及其衍生物和脑肠轴调节物质中的一种或几种。本专利技术菌株具有多种益生功效，包括可产生乳酸、丁酸、丙酸和戊酸等有机酸，可产生和分泌gaba和血清素。本专利技术菌株具有调节失眠小鼠体内血清素和gaba水平的作用。因此，动物双歧杆菌乳亚种bbm-19具有抑菌、调节神经系统功能和失眠个体神经递质水平等多种功能。所述动物双歧杆菌乳亚种bbm-19保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心，保藏编号为：cgmcc no.25080。本专利技术为开发具有功能活性物质的益生菌深入研究和利用提供了一种全新的思路，具有重要的应用价值和经济价值。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一株动物双歧杆菌乳亚种(Bifidobacterium animalis subsp .lactis) Bbm-19，其特征在于，所述动物双歧杆菌乳亚种Bbm-19，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心，保藏编号为：CGMCC No.25080。
2.根据权利要求1所述的动物双歧杆菌乳亚种菌株Bbm-19，其特征在于：所述动物双歧杆菌菌株的16S rRNA的序列如SEQ ID NO.1所示。
3.一种菌剂，其特征在于，含有权利要求1或2所述的动物双歧杆菌乳亚种Bbm-19，有效活菌数≥1×106 CFU/mL。
4.权利要求1或2所述动物双歧杆菌乳亚种的培养方法，其特征在于，采用MRS培养基，并加入0.05% L-半胱氨酸盐，于37℃ 厌氧条件下培养。
5.含有权利要求1或2所述的动物双歧杆菌乳亚种Bbm-19或者权利要求3所述的菌剂或者权利要求4所述的培养方法制备得到的菌剂在生产功能活性物质中的应用，其特征在于，所述功能活性物质包括短链脂肪酸、有机酸及其衍生物、氨基酸及其衍生物以及脑肠轴调节物质中的一种或几
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述动物双歧杆菌乳亚种Bbm-19的发酵物包括动物双歧杆菌乳亚种Bbm-19的胞外产物。
7.根据权利要求3所述的菌剂的制备方法，其特征在于，所述动物双歧杆菌乳亚种Bbm-19培养条件为37℃厌氧发酵24小时后收集发酵上清液。
8.权利要求1所述的动物双歧杆菌乳亚种Bbm-19在制备调节神经系统紊乱的药物或保健品中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述调节神经系统紊乱包括调节结肠、血液中血清素和或GABA水平。
...【技术特征摘要】
1.一株动物双歧杆菌乳亚种(bifidobacterium animalis subsp .lactis) bbm-19，其特征在于，所述动物双歧杆菌乳亚种bbm-19，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心，保藏编号为：cgmcc no.25080。
2.根据权利要求1所述的动物双歧杆菌乳亚种菌株bbm-19，其特征在于：所述动物双歧杆菌菌株的16s rrna的序列如seq id no.1所示。
3.一种菌剂，其特征在于，含有权利要求1或2所述的动物双歧杆菌乳亚种bbm-19，有效活菌数≥1×106 cfu/ml。
4.权利要求1或2所述动物双歧杆菌乳亚种的培养方法，其特征在于，采用mrs培养基，并加入0.05% l-半胱氨酸盐，于37℃ 厌氧条件下培养。
5.含有权利要求1或2所述的...
【专利技术属性】
技术研发人员：孙志宏，姚国强，何秋雯，刘文俊，高广琦，赵飞燕，于洁，
申请(专利权)人：内蒙古农业大学，
类型：发明
国别省市：
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