【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及绿色环保、生物医药，具体涉及为一种含黄酮多酚的黄蜀葵多糖、绿色环保制备方法及其在生物医药中的应用。
技术介绍
1、黄蜀葵[abelmoschus manihot(am)]是常见的一年生或多年生锦葵科直立草本植物，其花又名侧金盏、山芙蓉，野棉花，味甘性寒，其根、茎、叶、花及种子均可入药，兼有清热、解毒、化瘀、消炎及镇痛之功效[1]。在一些文献如《全国中草药汇编》记载，黄蜀葵为我国药食两用传统中药材。目前，对于黄蜀葵活性成分“黄蜀葵花黄酮或黄蜀葵花多糖”的提取工艺技术，大致可归纳为两类：
2、(1)黄蜀葵花总黄酮(乙醇提取回收+大孔树脂吸附柱吸附+洗脱，来源于《一种制备黄蜀葵花总黄酮提取物的方法》[2]；或乙醇联合超声辅助提取，来源于《醇提联合超声波辅助技术优化黄葵花总黄酮提取工艺研究》[3])；
3、(2)黄蜀葵花多糖(水提醇沉法+脱蛋白+纤维素树脂和凝胶树脂纯化，来源于《具有抗肿瘤活性的黄蜀葵花多糖及其制备方法》[4])；
4、(3)黄蜀葵多糖(热水浸提-乙醇沉淀、鞣酸除蛋白、过氧化氢和活性炭脱色、微晶纤维素柱色谱分离纯化，来源于《黄蜀葵多糖的分析》[5])。
5、现有的超声辅助+乙醇沉淀+大孔吸附树脂洗脱获得的黄蜀葵花总黄酮提取流程[6]，或乙醇/水体系加热回流+醇沉分离沉淀+吸附大孔树脂洗脱分离获得的黄蜀葵花多糖及黄酮工艺流程[7]，或水提醇沉法+脱蛋白+纤维素/凝胶树脂纯化方法制备黄蜀葵花多糖[4]，以上方法均使用黄蜀葵花为原料，提取物成分主要为黄蜀葵黄酮或黄蜀
6、参考文献：
7、[1]段琼辉,李永,徐振宇.黄蜀葵非药用部位资源研究进展[j].现代农业科技,2020,(21):70-72+78.
8、[2]陈文星,石荣火.一种制备黄蜀葵花总黄酮提取物的方法[p].江苏:cn201310067720.5,2013-06-05.
9、[3]符锦玉,陈家益,姚玫红,谢小翠,伍纤纤,杨渊.醇提联合超声波辅助技术优化黄葵花总黄酮提取工艺研究[j].华夏医学,2022,35(01):1-6.
10、[4]江苏省中医院.具有抗肿瘤活性的黄蜀葵花多糖及其制备方法:cn201210551228.0[p].2013-03-13.
11、[5]高素莲,张秀真,陈均.黄蜀葵多糖的分析[j].分析测试学报,2002,(06):72-74.[6]江苏苏中药业集团股份有限公司.黄蜀葵花总黄酮提取物及其制备方法:cn201210082553.7[p].2012-07-25.
12、[7]沈阳化工研究院有限公司.一种同时提取黄蜀葵花多糖及黄酮的方法:cn202111150320.1[p].2022-01-21.
技术实现思路
1、现有的黄蜀葵黄酮和黄蜀葵多糖提取技术解决了黄蜀葵黄酮和黄蜀葵多糖提取分离及纯化的问题，但关注的重点是黄酮/多糖的分离纯化与含量测定，使用技术为：纤维素树脂纯化或纤维素柱色谱分离纯化工艺，获得的成分较单一，且工艺流程中使用过氧化氢或丙酮、乙醚等有毒有害试剂，在实际生产中难以得到规模化推广应用，难以实现黄蜀葵深加工产业链开发。
2、为了解决以上技术问题，本专利技术采用如下技术方案：
3、一种含黄酮多酚的黄蜀葵多糖绿色环保制备方法，包括以下步骤：
4、(1)碱化+超声+高压匀质化；
5、(2)乙醇+超声粉碎提取；
6、(3)旋蒸回收；
7、(4)酶解+热解；
8、(5)发酵；
9、(6)冷冻干燥+灭菌。
10、优选地，步骤(1)中的碱化+超声+高压匀质化方法，包括以下步骤：
11、1-1)称取干燥黄蜀葵根茎原料一份，应用粉碎机将原料粉碎，并用0.85mm-0.15mm-0.09mm不同直径样品筛进行筛粒，得黄蜀葵干粉；
12、1-2)以料液质量体积比1：30加入1％碳酸氢钠溶液，同时置于超声波清洗仪中60℃超声助溶20分钟，然后缓慢倒入高压匀质机进样孔，启动电源开关，运行机器5-10分钟，获得黄蜀葵匀质液。
13、优选地，步骤(2)中的乙醇+超声粉碎提取方法，包括以下步骤：
14、向黄蜀葵匀质液中加入60％乙醇浸泡，置于摇床上振摇45分钟，将溶液置于超声波细胞粉碎仪处理30分钟，获得处理液。
15、优选地，步骤(3)中的旋蒸回收方法，包括以下步骤：将处理液置于旋转蒸发仪上，温度调到65℃，通过加热旋蒸挥发乙醇成分，当旋蒸至溶液无乙醇残留(无乙醇气味)时，得黄蜀葵粗提取液。
16、优选地，步骤(4)中的酶解+热解方法，包括以下步骤：
17、4-1)向黄蜀葵粗多糖提取液中加入1.5g/100ml质量浓度食品级纤维素酶(含半纤维素酶)，在50℃条件下水浴1.5小时，获得黄蜀葵多糖提取物；
18、4-2)向黄蜀葵多糖物中以1.5g/100ml质量浓度加入枯草芽孢杆菌固体水解酶(中性蛋白酶)，继续50℃水浴1.5小时，增加黄蜀葵多糖提取物中的肽类及氨基酸活性成分；
19、4-3)继续升温至70℃20分钟，接着将黄蜀葵多糖提取物置于电热炉100℃热解5分钟，得黄蜀葵热解液。
20、优选地，步骤(5)中的发酵方法，包括以下步骤：
21、5-1)将黄蜀葵热解液以10％体积比(9：1)加入0.1g/ml发酵乳杆菌活菌液，置于36.5℃的恒温培养箱进行无氧发酵48小时；
22、5-2)接着以10％体积比(9：1)加入0.1g/ml副干酪乳杆菌活菌液，继续进行无氧发酵，发酵条件36.5℃，24小时后取出，测量ph值，再接着加去离子水稀释，经15-20μm滤纸抽滤，获得黄蜀葵多糖终提取物。
23、优选地，步骤5-1)的发酵乳杆菌活菌液或5-2)中的副干酪乳杆菌活菌液的制备方法，包括以下步骤：将>109cfu/g活菌粉溶于去离子水形成0.1g/ml浓度活菌液，置于36.5℃条件无氧培养6小时，分别制得发酵乳杆菌液或副干酪乳杆菌活菌液。
24、优选地，步骤(6)中的冷冻干燥+灭菌方法，包括以下步骤：将黄蜀葵终提取物进行喷雾冷冻干燥处理，然后在103～137kpa、12l～126℃下进行高压蒸气灭菌处理15分钟，取出黄蜀葵多糖提取物，置于2-8℃保存。
25、本专利技术还提供了一种含黄酮多酚的黄蜀葵多糖在生物医药中的应用，其特征在于，应用于制备人源肝癌hepg-2细胞脂质蓄积抑制效应的生物本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种含黄酮多酚的黄蜀葵多糖绿色环保制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述含黄酮多酚的黄蜀葵多糖绿色环保制备方法，其特征在于，步骤(1)中的匀质化方法，包括以下步骤：
3.根据权利要求1所述含黄酮多酚的黄蜀葵多糖绿色环保制备方法，其特征在于，步骤(2)中的乙醇+超声粉碎提取方法，包括以下步骤：
4.根据权利要求1所述的含黄酮多酚的黄蜀葵多糖绿色环保制备方法，其特征在于，步骤(3)中的旋蒸回收方法，包括以下步骤：将处理液置于旋转蒸发仪上，温度调到65℃，通过加热旋蒸挥发乙醇，当旋蒸至溶液几乎无乙醇残留时，得黄蜀葵粗多糖提取液。
5.根据权利要求1所述含黄酮多酚的黄蜀葵多糖绿色环保制备方法，其特征在于，步骤(4)中的酶解+热解方法，包括以下步骤：
6.根据权利要求1所述的含黄酮多酚的黄蜀葵多糖绿色环保制备方法，其特征在于，步骤(5)中的发酵方法，包括以下步骤：
7.根据权利要求1所述含黄酮多酚的黄蜀葵多糖绿色环保制备方法，其特征在于，步骤5-1)发酵乳杆菌活菌液或步骤5-2)中副干酪乳杆菌
8.根据权利要求1所述的含黄酮多酚的黄蜀葵多糖绿色环保制备方法，其特征在于，步骤(6)中的冷冻干燥+灭菌方法，包括以下步骤：将黄蜀葵多糖终提取物进行冷冻干燥处理，然后在103～137kPa、12l～126℃条件下进行高压蒸气灭菌处理15分钟，取出黄蜀葵多糖提取物，置于2-8℃保存。
9.一种根据权利要求1-8任一项所述方法制备的含黄酮多酚的黄蜀葵多糖。
10.一种根据权利要求9所述的含黄酮多酚的黄蜀葵多糖在生物医药中的应用，其特征在于，应用于制备人源肝癌HepG-2细胞脂质蓄积抑制效应的生物医药中。
...【技术特征摘要】
1.一种含黄酮多酚的黄蜀葵多糖绿色环保制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述含黄酮多酚的黄蜀葵多糖绿色环保制备方法，其特征在于，步骤(1)中的匀质化方法，包括以下步骤：
3.根据权利要求1所述含黄酮多酚的黄蜀葵多糖绿色环保制备方法，其特征在于，步骤(2)中的乙醇+超声粉碎提取方法，包括以下步骤：
4.根据权利要求1所述的含黄酮多酚的黄蜀葵多糖绿色环保制备方法，其特征在于，步骤(3)中的旋蒸回收方法，包括以下步骤：将处理液置于旋转蒸发仪上，温度调到65℃，通过加热旋蒸挥发乙醇，当旋蒸至溶液几乎无乙醇残留时，得黄蜀葵粗多糖提取液。
5.根据权利要求1所述含黄酮多酚的黄蜀葵多糖绿色环保制备方法，其特征在于，步骤(4)中的酶解+热解方法，包括以下步骤：
6.根据权利要求1所述的含黄酮多酚的黄蜀葵多糖绿色环保制备方法，其特征在于，步骤(5)中的发酵方法，包括以下步骤：
...【专利技术属性】
技术研发人员：杨渊，鲍家成，邓业康，李杰康，韦燕环，庞淑文，
申请(专利权)人：桂林医学院，
类型：发明
国别省市：
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