【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医学，具体地涉及一种血管内皮生长因子/胸苷激酶1/癌胚抗原测定试剂盒及其应用。
技术介绍
1、血管内皮生长因子（vegf）是一种高糖基化的分子量为46-48kda的同源二聚体蛋白，属于血小板源生长因子家族成员，又称血管渗透因子。在多种肿瘤类型中表达上调，它能够促进肿瘤血管的生成，为肿瘤提供血液供应和营养，帮助肿瘤的生长和扩散。胸苷激酶1（简称tk1）是评估细胞增殖的重要标志物，是细胞周期s期的依赖酶，它参与细胞增殖过程中s期dna合成，与细胞增殖密切相关，为一个辅助因子。tk1的表达和活性在许多肿瘤中升高，因此它被用作细胞增殖和肿瘤发展的生物标志物。癌胚抗原（cea）是一种糖蛋白，通常在胚胎的内胚层上皮中发现，cea属于一组称为癌胚蛋白的肿瘤标志物。在原发性结肠直肠癌病人及其他恶性肿瘤病人(包括胃肠道癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌、肝癌和胰腺癌)中，均已检测到血清cea浓度升高。在非恶性疾病病人(尤其是老年人和吸烟者)中，也已检测出血清cea浓度升高，因此广泛用于结直肠癌和其他一些癌症的诊断和预后评估。虽然cea在某些肿瘤中具有较高的敏感性和特异性，但它不具有肿瘤特异性，意味着它在其他非肿瘤性疾病中也可能升高，因此cea浓度不适用于从普通人群中筛查出未被检出的癌症病人，但cea浓度可以提供病人预后、手术切除后肿瘤复发及治疗有效性等重要信息。
2、目前，临床上单独测定单一血管内皮生长因子或胸苷激酶1或癌胚抗原指标的均已有报道，而通过同时检测以上三种指标来判断肿瘤状态信息的尚没有报道。因此，开发一种
技术实现思路
1、针对
技术介绍
提到的上述不足，本专利技术的目的在于提供一种血管内皮生长因子/胸苷激酶1/癌胚抗原测定试剂盒及其应用。该测定试剂盒可联合检查同一样本中的血管内皮生长因子、胸苷激酶1和癌胚抗原，特异性好，灵敏度高，稳定性好，可提供更加全面的肿瘤状态信息，可为制备肿瘤早期诊断、治疗监测、预后评估及个体化治疗产品提供重要依据，具有较好的临床应用前景。
2、为了实现上述目的，本专利技术提供一种血管内皮生长因子/胸苷激酶1/癌胚抗原测定试剂盒，包括检测卡、样本稀释液和id校准卡，所述检测卡包括硝酸纤维素膜、荧光垫、样品垫、吸水纸和塑料卡壳；所述硝酸纤维素膜上包括t1线、t2线、t3线和c线；
3、所述t1线包被鼠抗人血管内皮生长因子（vegf）单克隆抗体，所述t2线包被鼠抗人胸苷激酶1（tk1）单克隆抗体，所述t3线包被鼠抗人癌胚抗原（cea）单克隆抗体，所述c线包被兔抗鸡igy多克隆抗体。
4、本技术方案中通过将血管内皮生长因子单克隆抗体，胸苷激酶1单克隆抗体，癌胚抗原单克隆抗体同时设置在一个检测卡上，可通过一个样本同时实现血管内皮生长因子、胸苷激酶1和癌胚抗原的快速联合检测，不仅简单快速，而且可从多个角度了解肿瘤的生长、扩散、增殖与复发等更加全面的肿瘤状态信息，为后续临床应用提供依据。
5、进一步地，上述技术方案中，所述t1线、t2线、t3线和c线上抗体的浓度均为1-1.5mg/ml。
6、进一步地，上述技术方案中，所述荧光垫喷有荧光微球标记，所述荧光微球标记的抗体包括鼠抗人血管内皮生长因子单克隆抗体、鼠抗人胸苷激酶1单克隆抗体、鼠抗人癌胚抗原单克隆抗体和鸡igy。
7、进一步地，上述技术方案中，所述荧光微球标记的抗体的浓度为40-100ug/ml。
8、进一步地，上述技术方案中，所述样本稀释液为磷酸盐缓冲液，浓度为0.02mol/l。本技术方案中使用磷酸盐缓冲液作为样本稀释液，可有效维持样品垫上的离子强度以及ph，可提高免疫反应的特异性、灵敏度和稳定性。
9、进一步地，上述技术方案中，所述试剂盒的制备方法为：将样品垫、荧光垫、硝酸纤维素膜检测线、吸水纸依次整齐粘贴在底板上，得到检测卡，然后将检测卡装入塑料卡壳制得检测试剂盒。
10、进一步地，本专利技术还提供一种血管内皮生长因子/胸苷激酶1/癌胚抗原测定试剂盒的检测方法，检测时，先将荧光免疫分析仪打开，取出id校准卡，插入仪器校准卡端口，并导入信息；然后将检测卡放置在平整的表面，并做好标记，将待测样本用样本稀释液稀释后加入到检测卡的加样孔中，静置反应10-15min后，用荧光免疫分析仪读值并记录检测结果，完成检测。
11、本试剂盒应用双抗体夹心免疫层析法，利用特异性抗体与待测抗原的不同结合位点结合形成一个稳定的夹心复合物，一种抗体（捕捉抗体）被固定在固相载体（如试纸条）上，用于捕获待测样本中的抗原；另一种抗体（检测抗体）则与标记物（如胶体金、荧光物质等）结合，用于识别和检测与捕捉抗体结合的抗原；当样本中的抗原与这两种抗体结合后，就会形成可见的标记信号，从而实现对抗原的定性和定量检测。
12、具体地，在检测时，待测样本经稀释后准确加入检测卡加样孔，液体在毛细管效应下向上层析，样本中的vegf抗原、tk1抗原、cea抗原分别与荧光微球标记的鼠抗人vegf单克隆抗体、鼠抗人tk1单克隆抗体、鼠抗人cea单克隆抗体结合，在t1线处形成固相鼠抗人vegf单克隆抗体-vegf抗原-标记鼠抗人vegf单克隆抗体-荧光微球复合物，t2线处形成固相鼠抗人tk1单克隆抗体-tk1抗原-标记鼠抗人tk1单克隆抗体-荧光微球复合物，t3处形成固相鼠抗人cea单克隆抗体-cea抗原-标记鼠抗人cea单克隆抗体-荧光微球复合物，在c线处则形成兔抗鸡igy多克隆抗体-标记鸡lgy-荧光微球复合物。荧光微球颗粒在激发光下发出可见光信号，t1线、t2线、t3线信号与c线信号的比值(t1/c、t2/c、t3/c)与样本中的 vegf抗原、tk1抗原、cea抗原的浓度值成正比，通过荧光免疫分析仪的标准曲线拟合计算出样本中vegf、tk1、cea的浓度，可直接从分析仪屏幕上读值。
13、进一步地，上述技术方案中，所述样本与样本稀释液的体积比为1:0.6-1；所述检测环境为：温度15-30℃，湿度60±10%。
14、进一步地，上述技术方案中，所述样本为血清、血浆、全血中的任一种，所述血清或血浆样本在2-8℃储存时间不得超过1周，所述全血用肝素、柠檬酸钠、edta-kz进行预处理后在2~8℃储存。
15、本专利技术还提供一种血管内皮生长因子/胸苷激酶1/癌胚抗原测定试剂盒在制备肿瘤早期诊断、治疗监测、预后评估及个体化治疗产品中的应用。
16、与现有技术相比，本专利技术的有益效果：
17、本专利技术采用双抗体夹心免疫层析法，通过将血管内皮生长因子单克隆抗体，胸苷激酶1单克隆抗体，癌胚抗原单克隆抗体同时设置在一个检测卡上，并将荧光微球标记的鼠抗人血管内皮生长因子单克隆抗体、鼠抗人胸苷激酶1单克隆抗体、鼠抗人癌胚抗原单克隆抗体和鸡igy作为标记物，通过一个样本就可同时实现血管内皮生长因子、胸本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种血管内皮生长因子/胸苷激酶1/癌胚抗原测定试剂盒，包括检测卡、样本稀释液和ID校准卡，其特征在于，所述检测卡包括硝酸纤维素膜检测线、荧光垫、样品垫、吸水纸和塑料卡壳；所述试硝酸纤维素膜检测线包括T1线、T2线、T3线和C线；
2.根据权利要求1所述的一种血管内皮生长因子/胸苷激酶1/癌胚抗原测定试剂盒，其特征在于，所述T1线、T2线、T3线和C线上抗体的浓度均为1-1.5mg/mL。
3.根据权利要求1所述的一种血管内皮生长因子/胸苷激酶1/癌胚抗原测定试剂盒，其特征在于，所述荧光垫喷有荧光微球标记，所述荧光微球标记的抗体包括鼠抗人血管内皮生长因子单克隆抗体、鼠抗人胸苷激酶1单克隆抗体、鼠抗人癌胚抗原单克隆抗体和鸡IgY。
4.根据权利要求3所述的一种血管内皮生长因子/胸苷激酶1/癌胚抗原测定试剂盒，其特征在于，所述荧光微球标记的抗体的浓度为40-100μg/mL。
5.根据权利要求1所述的一种血管内皮生长因子/胸苷激酶1/癌胚抗原测定试剂盒，其特征在于，所述样本稀释液为磷酸盐缓冲液，浓度为0.02mol/L。
7.如权利要求1-6任一项所述的一种血管内皮生长因子/胸苷激酶1/癌胚抗原测定试剂盒的检测方法，其特征在于，检测时，先将荧光免疫分析仪打开，取出ID校准卡，插入仪器校准卡端口，并导入信息；然后将检测卡放置在平整的表面，并做好标记，将待测样本用样本稀释液稀释后加入到检测卡的加样孔中，静置反应10-15min后，用荧光免疫分析仪读值并记录检测结果，完成检测。
8.根据权利要求7所述的一种血管内皮生长因子/胸苷激酶1/癌胚抗原测定试剂盒的检测方法，其特征在于，所述样本与样本稀释液的体积比为1:0.6-1；所述检测环境为：温度15-30℃，湿度60±10%。
9.根据权利要求7所述的一种血管内皮生长因子/胸苷激酶1/癌胚抗原测定试剂盒的检测方法，其特征在于，所述样本为血清、血浆、全血中的任一种，所述血清或血浆样本在2-8℃储存时间不得超过1周，所述全血用肝素、柠檬酸钠、EDTA-Kz进行预处理后在2~8℃储存。
10.如权利要求1-6任一项所述的一种血管内皮生长因子/胸苷激酶1/癌胚抗原测定试剂盒在制备肿瘤早期诊断、治疗监测、预后评估及个体化治疗产品中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种血管内皮生长因子/胸苷激酶1/癌胚抗原测定试剂盒，包括检测卡、样本稀释液和id校准卡，其特征在于，所述检测卡包括硝酸纤维素膜检测线、荧光垫、样品垫、吸水纸和塑料卡壳；所述试硝酸纤维素膜检测线包括t1线、t2线、t3线和c线；
2.根据权利要求1所述的一种血管内皮生长因子/胸苷激酶1/癌胚抗原测定试剂盒，其特征在于，所述t1线、t2线、t3线和c线上抗体的浓度均为1-1.5mg/ml。
3.根据权利要求1所述的一种血管内皮生长因子/胸苷激酶1/癌胚抗原测定试剂盒，其特征在于，所述荧光垫喷有荧光微球标记，所述荧光微球标记的抗体包括鼠抗人血管内皮生长因子单克隆抗体、鼠抗人胸苷激酶1单克隆抗体、鼠抗人癌胚抗原单克隆抗体和鸡igy。
4.根据权利要求3所述的一种血管内皮生长因子/胸苷激酶1/癌胚抗原测定试剂盒，其特征在于，所述荧光微球标记的抗体的浓度为40-100μg/ml。
5.根据权利要求1所述的一种血管内皮生长因子/胸苷激酶1/癌胚抗原测定试剂盒，其特征在于，所述样本稀释液为磷酸盐缓冲液，浓度为0.02mol/l。
6.根据权利要求1所述的一种血管内皮生长因子/胸苷激酶1/癌胚抗原测定试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的制备方法为：将样品垫、荧光...
【专利技术属性】
技术研发人员：钱伟，毛勇，刘芸，周喜新，李文佳，聂宗秀，宋颖，刘如石，
申请(专利权)人：江西英大生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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