【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及肽提取，具体涉及一种预防痴呆的脑肽的制备方法。
技术介绍
1、脑肽是存在于脑中的多种小分子肽，这些小分子肽具有重要的药用价值，如抗菌、抗炎、抗氧化等作用，对于痴呆，记忆力减退，注意力不集中等问题具有很好的帮助。
2、目前，在提取脑肽方面取得了一定的进展，但仍然存在一些技术瓶颈：
3、(1)纯度难以保证：由于脑组织中含有多种成分，提取得到的小分子肽往往伴随着其他杂质，使得纯度难以达到要求；
4、(2)提取效率低：部分小分子肽可能与组织中的其他成分结合紧密，导致提取效率较低，影响产率。
技术实现思路
1、本专利技术的主要目的是提出一种预防痴呆的脑肽的制备方法，旨在提高脑肽的提取纯度和提取效率。
2、为实现上述目的，本专利技术提出一种预防痴呆的脑肽的制备方法，包括以下步骤：
3、s10.以动物脑组织为原料，置于0~4℃下研磨后冷藏12 h~24 h，排酸，洗涤，冻干，得脑组织粉体；
4、s20.将脑组织粉体与nacl溶液混合后置于mrm分子共振环境下浸泡发生盐析反应，离心过滤，滤渣为脑组织蛋白，滤液为脑组织肽溶液；
5、s30.将脑组织蛋白悬浮于磷酸盐缓冲液中，加入木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶，在负离子的发生量为2000 e-/cm3~2500 e-/cm3的mrm分子共振环境下进行50℃~60℃水浴反应60 min~90 min，灭酶，冷却，离心，收集上清液，得脑组织蛋白酶解液；
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7、在一实施例中，步骤s10中，采用tris-hcl缓冲液洗涤，tris-hcl缓冲液的ph值为7.5~8.5。
8、在一实施例中，步骤s20中，nacl溶液中nacl的质量占比为2%~4%；
9、所述脑组织粉体在nacl溶液中的质量浓度为50~70 g/l。
10、在一实施例中，步骤s30中，磷酸盐缓冲液的ph值为6.5~7.5。
11、在一实施例中，步骤s30中，木瓜蛋白酶在磷酸盐缓冲液中的质量浓度为40~60 g/l，菠萝蛋白酶在磷酸盐缓冲液中的质量浓度为40~60 g/l。
12、在一实施例中，步骤s40中，弱碱性缓冲液包括tris-hcl缓冲液，tris-hcl缓冲液的ph值为7.5~8.5。
13、在一实施例中，步骤s40中，脑组织肽溶液、脑组织蛋白酶解液及缓冲液的体积比为1:1:（1~2）。
14、在一实施例中，步骤s30中，灭酶的步骤包括沸水浴10~15 min；和/或，
15、步骤s40中，灭酶的步骤包括沸水浴10~15 min。
16、在一实施例中，步骤s40中，超滤的步骤采用4.5kda超滤膜进行离心过滤率分离。
17、在一实施例中，步骤s40中，浓缩干燥的步骤包括真空冷冻干燥。
18、本专利技术提供的技术方案通过采用mrm分子共振环境，提高盐析反应和一次酶解过程中的负离子发生量，加快反应进程，促进提高蛋白质提取率，以及促进酶解提升脑肽的提取率，从而提高脑肽的提取效率；通过采用胰蛋白酶和糜蛋白酶联用，提高脑组织蛋白的水解反应程度，进一步提高脑肽的提取率。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种预防痴呆的脑肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的预防痴呆的脑肽的制备方法，其特征在于，步骤S10中，采用Tris-HCl缓冲液洗涤，Tris-HCl缓冲液的pH值为7.5~8.5。
3.如权利要求1所述的预防痴呆的脑肽的制备方法，其特征在于，步骤S20中，NaCl溶液中NaCl的质量占比为2%~4%；
4.如权利要求1所述的预防痴呆的脑肽的制备方法，其特征在于，步骤S30中，磷酸盐缓冲液的pH值为6.5~7.5。
5.如权利要求1所述的预防痴呆的脑肽的制备方法，其特征在于，步骤S30中，木瓜蛋白酶在磷酸盐缓冲液中的质量浓度为40~60 g/L，菠萝蛋白酶在磷酸盐缓冲液中的质量浓度为40~60 g/L。
6.如权利要求1所述的预防痴呆的脑肽的制备方法，其特征在于，步骤S40中，弱碱性缓冲液包括Tris-HCl缓冲液，Tris-HCl缓冲液的pH值为7.5~8.5。
7.如权利要求1所述的预防痴呆的脑肽的制备方法，其特征在于，步骤S40中，脑组织肽溶液、脑组织蛋白酶解液及缓冲液
8.如权利要求1所述的预防痴呆的脑肽的制备方法，其特征在于，步骤S30中，灭酶的步骤包括沸水浴10~15 min；和/或，
9.如权利要求1所述的预防痴呆的脑肽的制备方法，其特征在于，步骤S40中，超滤的步骤采用4.5kDa超滤膜进行离心过滤率分离。
10.如权利要求1所述的预防痴呆的脑肽的制备方法，其特征在于，步骤S40中，浓缩干燥的步骤包括真空冷冻干燥。
...【技术特征摘要】
1.一种预防痴呆的脑肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的预防痴呆的脑肽的制备方法，其特征在于，步骤s10中，采用tris-hcl缓冲液洗涤，tris-hcl缓冲液的ph值为7.5~8.5。
3.如权利要求1所述的预防痴呆的脑肽的制备方法，其特征在于，步骤s20中，nacl溶液中nacl的质量占比为2%~4%；
4.如权利要求1所述的预防痴呆的脑肽的制备方法，其特征在于，步骤s30中，磷酸盐缓冲液的ph值为6.5~7.5。
5.如权利要求1所述的预防痴呆的脑肽的制备方法，其特征在于，步骤s30中，木瓜蛋白酶在磷酸盐缓冲液中的质量浓度为40~60 g/l，菠萝蛋白酶在磷酸盐缓冲液中的质量浓度为40~60 g/l。
6.如...
【专利技术属性】
技术研发人员：王玉民，李猷，
申请(专利权)人：德州蓝力生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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