【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及一种精浆胞外囊泡microrna在作为公猪繁殖力评定分子标志物中的应用。
技术介绍
1、人工授精(artificial insemination，ai)是指采用非性交的方式将精子递送到雌性生殖道中以达到受孕目的的一种辅助生殖技术，由于其具有侵入性小的特点，在家畜饲养领域得到了广泛的应用。目前全世界大约70％的牛和大约90％的猪是通过人工授精繁殖的，而且这项技术正越来越多地被应用于养猪业，用于升级后代猪的遗传基因，以最大限度地提高未来养猪业的生育力和产量。因此，在养猪业中，高繁殖力公猪的选择是猪遗传改良的首要问题。用于评估分析公猪繁殖力的常用指标包括受精后母猪分娩率(％)、窝产仔数、窝产活仔数、窝产健仔数、初生重(g)、均胎贡献仔猪数。然而，目前缺乏公猪繁殖力评估分析的高效、准确的方法。
2、在过去的几十年里，精液分析一直被认为是预测雄性繁殖力的第一步。然而，通过精液常规分析方法(精子活力、精子动力学特征、形态学分析)来确定公猪繁殖力的准确性一直存在争议。
3、精液由细胞成分(精子)和非细胞成分(精浆)组成。其中精浆由睾丸(2-5％)、附睾和前列腺(20-30％)、精囊腺(65-75％)以及尿道球腺及尿道旁腺(1％)的分泌物构成。这些分泌物富含脂质、糖、生长因子、转录因子和蛋白质。精浆中的胞外囊泡(extracellularvesicles，evs)在精子顶体反应和受精过程等环节中起着至关重要的作用。通过检测猪精浆胞外囊泡中的内容物来鉴定公猪精子质量已有报道，如现有技术《circ
4、microrna(mirna)是一类广泛存在于真核生物中的非编码rna分子，调节基因表达并参与许多生物和代谢过程，如生长、发育、繁殖等。如cn108034732b披露了一种mirna-486可用于预测绵羊繁殖能力。此类技术可采用pcr等分子手段检测靶标microrna从而实现繁殖力的评估，具有高效、准确等优势。因此，寻找评估预测公猪繁殖力的microrna靶标，开发公猪繁殖力的分子评估检测技术，具有重要的意义。
5、因此，仍需深入探究开发可用于鉴定评估公猪繁殖力的microrna分子标志物，对于养猪业具有相当的必要性。
技术实现思路
1、本专利技术针对现有技术的不足，旨在探索能够作为公猪繁殖力评定分子标志物的靶标microrna，更准确的实现公猪繁殖力的评定。
2、本专利技术的首要目的是提供seq id no.3所示microrna在作为评定公猪繁殖力的分子标志物中的应用，以及检测seq id no.3所示microrna的试剂在制备公猪繁殖力评定产品中的应用。
3、本专利技术的另一目的是提供seq id no.3所示microrna在作为筛选高繁殖力公猪的分子标志物中的应用，以及检测seq id no.3所示microrna的试剂在制备高繁殖力公猪筛选产品中的应用。
4、本专利技术的又一目的是提供一种公猪繁殖力评定产品。
5、本专利技术通过以下技术方案实现上述专利技术目的：
6、本专利技术研究得出，高繁殖力公猪与低繁殖力公猪的seq id no.3所示microrna的表达水平有显著性差异，高繁殖力公猪中该microrna的表达水平显著低于低繁殖力公猪，该microrna可以作为评定公猪繁殖力高低的差异标志物，对于养猪业中公猪繁殖力高低的评价，以及筛选高繁殖力公猪，有重要价值。
7、基于此，本专利技术提供了下述技术方案：
8、seq id no.3所示microrna在作为评定公猪繁殖力的分子标志物中的应用。
9、检测seq id no.3所示microrna的试剂在制备公猪繁殖力评定产品中的应用。
10、seq id no.3所示microrna在作为筛选高繁殖力公猪的分子标志物中的应用。
11、检测seq id no.3所示microrna的试剂在制备高繁殖力公猪筛选产品中的应用。
12、以及包含检测seq id no.3所示microrna的试剂的公猪繁殖力评定产品或筛选高繁殖力公猪的产品，也应在本专利技术保护范围之内。
13、所述seq id no.3所示microrna的核苷酸序列具体为：
14、5’-uucaaguaauccaggauaggcu-3’。
15、优选地，所述检测microrna的试剂包括检测seq id no.3所示microrna的引物对。
16、优选地，所述引物对的上游引物的核苷酸序列如seq id no.4所示，下游引物为mir-x mirna first-strand synthesis kit的通用下游引物。
17、优选地，所述检测microrna的试剂还包括rt-qpcr所需的试剂。
18、基于高繁殖力公猪精液中该靶标microrna的表达量显著低于低繁殖力公猪，上述应用方案中，公猪繁殖力评定的标准定为：seq id no.3所示microrna的表达水平越低则代表公猪繁殖力越高。
19、作为可选择的实施方案，microrna表达水平的高低可根据pcr产物的电泳条带颜色深浅来判断，或荧光pcr的扩增ct值来判断。
20、基于本专利技术研究，该microrna还有望成为提高公猪繁殖力、培育高繁殖力公猪的分子靶标，因此，seq id no.3所示microrna在培育高繁殖力公猪中的应用，以及降低seqid no.3所示microrna表达的试剂在培育高繁殖力公猪中的应用，也应在本专利技术保护范围之内。
21、本专利技术的技术方案具有以下有益效果：
22、本专利技术将seq id no.3所示microrna用于公猪繁殖力的鉴定，经本专利技术研究发现，精浆胞外囊泡中seq id no.3所示microrna在高繁殖力公猪中的表达量显著低于在低繁殖力公猪中的表达量；可用于评价公猪繁殖力。
23、本专利技术为公猪高繁殖力的鉴定提供了一种新的分子标志物，该microrna还有望成为提高公猪繁殖力、培育高繁殖力公猪的分子靶标，对提高公猪繁殖力，缩短育种周期，加速遗传改良，提高生猪产业的生产总值有重要意义。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.SEQ ID NO.3所示microRNA在作为评定公猪繁殖力的分子标志物中的应用。
2.检测SEQ ID NO.3所示microRNA的试剂在制备公猪繁殖力评定产品中的应用。
3.SEQ ID NO.3所示microRNA在作为筛选高繁殖力公猪的分子标志物中的应用。
4.检测SEQ ID NO.3所示microRNA的试剂在制备高繁殖力公猪筛选产品中的应用。
5.根据权利要求2或4所述的应用，其特征在于，所述检测microRNA的试剂包括检测SEQID NO.3所示microRNA的引物对。
6.根据权利要求1-4任一所述的应用，其特征在于，公猪繁殖力的评定标准为：microRNA的表达水平越低则代表公猪繁殖力越高。
7.一种公猪繁殖力评定产品，其特征在于，包含检测SEQ ID NO.3所示microRNA的试剂。
8.根据权利要求7所述的产品，其特征在于，包含检测SEQ ID NO.3所示microRNA的引物对。
9.SEQ ID NO.3所示microRNA在培育高繁殖力公
10.降低SEQ ID NO.3所示microRNA表达的试剂在培育高繁殖力公猪中的应用。
...【技术特征摘要】
1.seq id no.3所示microrna在作为评定公猪繁殖力的分子标志物中的应用。
2.检测seq id no.3所示microrna的试剂在制备公猪繁殖力评定产品中的应用。
3.seq id no.3所示microrna在作为筛选高繁殖力公猪的分子标志物中的应用。
4.检测seq id no.3所示microrna的试剂在制备高繁殖力公猪筛选产品中的应用。
5.根据权利要求2或4所述的应用，其特征在于，所述检测microrna的试剂包括检测seqid no.3所示microrna的引物对。
【专利技术属性】
技术研发人员：洪林君，吴珍芳，谢言射，陈伟东，顾婷，蔡更元，李紫聪，郑恩琴，徐铮，黄思秀，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：
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