【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及食品，尤其涉及一种鲜奶级酪蛋白活性肽的制备方法。
技术介绍
1、酪蛋白胶束(mcc)是由酪蛋白分子在乳中形成的一种球状的胶束结构。这些胶束由酪蛋白分子通过疏水相互作用和静电相互作用等力量结合在一起，起着维持乳液稳定性的作用。通过膜分离技术可从乳中分离出酪蛋白胶束，然后经过喷雾干燥干或冷冻干燥处理成粉末，富含优质的蛋白质。
2、酶解是生产生物活性肽的主要方法之一，不破坏氨基酸的结构，且不涉及高温，作用更加温和，很大程度保留蛋白质水解物的营养。现有技术中，周源等人利用复合酶制备的<5kda酪蛋白肽粉对肾性高血压大鼠具有积极的心肌保护作用。陈媛媛等人用风味蛋白酶进行酶解获得<2kda的酪蛋白肽能改善中老年失眠。
3、研究表明，自由基的过度积累导致质膜中的脂质过氧化，破坏细胞内蛋白和核酸的自然结构，从而降低线粒体内膜的通透性，引起氧化疲劳。抗氧化肽通过保护细胞免受氧化损伤，从而增加抗氧化能力，提高抗疲劳能力。然而目前缺乏对酪蛋白肽在抗疲劳方面的研究，使其应用受限。
技术实现思路
1、为解决上述技术难题，提出如下
技术实现思路
。
2、首先，本专利技术提供了一种鲜奶级酪蛋白活性肽的制备方法，包括：
3、(1)将酪蛋白胶束粉溶解后制得酪蛋白溶液；
4、(2)将所述酪蛋白溶液先用碱性蛋白酶酶解，然后经过5kda的陶瓷膜分离后，将获得的透过液用风味蛋白酶酶解，制得酶解液；
5、所述碱性蛋白酶酶解的条件包括
6、所述风味蛋白酶酶解的条件包括：ph值为5～8，酶解温度为50℃～60℃，酶解时间为3～4h；
7、(3)将所述酶解液经过1kda的陶瓷膜分离后，制得所述鲜奶级酪蛋白活性肽。
8、本专利技术通过选择碱性蛋白酶和风味蛋白酶序贯酶解，联合控制两步酶解过程中温度、ph以及酶解时间在合适的范围内，之后结合膜分离手段获得了平均分子量小于1kda的鲜奶级酪蛋白活性肽，其中含有高比例含量的具有抗氧化能力的脯氨酸、影响自由基清除的疏水性氨基酸和具有芳香族残基的氨基酸、以及可以提高运动能力的支链氨基酸；同时其中还包含多种具有抗氧化活性和自由基清除能力的活性肽，经动物实验验证，含有这些组分的鲜奶级酪蛋白活性肽能够有效缓解疲劳，且无明显的毒性。
9、优选地，所述碱性蛋白酶酶解的条件包括：ph值为8.2～8.8，酶解温度为58℃～62℃，酶解时间为170min～190min。
10、优选地，所述风味蛋白酶酶解的条件包括：ph值为7.5～8，酶解温度为52℃～58℃，酶解时间为200min～220min。
11、优选地，步骤(3)中，将所述酶解液经过1kda的陶瓷膜分离后，获得第一透过液和第一截留液；将所述第一截留液再过1kda的陶瓷膜分离，获得第二透过液；将所述第一透过液和第二透过液浓缩合并后，制得所述鲜奶级酪蛋白活性肽。
12、优选地，将所述鲜奶级酪蛋白活性肽冷冻干燥后制得鲜奶级酪蛋白活性肽粉。
13、优选地，步骤(2)中，按底物计碱性蛋白酶的添加量为0.3％～0.5％(w/w)；风味蛋白酶的添加量为0.05％～0.1％(w/w)。
14、进一步，本专利技术提供了一种鲜奶级酪蛋白活性肽或鲜奶级酪蛋白活性肽粉，其由上述任一实施方案所述的制备方法制得。
15、优选地，鲜奶级酪蛋白活性肽或鲜奶级酪蛋白活性肽粉中的必需氨基酸含量占总氨基酸含量的39％以上，和/或，其中的疏水性氨基酸占总氨基酸含量的50％以上。
16、优选地，鲜奶级酪蛋白活性肽或鲜奶级酪蛋白活性肽粉中含有13种具有抗氧化活性的肽段，包括：ypfpgpi、fpkypvepf、rhphphlsfm、ypfpgpipn、vypfpgpipn、ypvepf、rylgy、fsdipnpigse、ylgyle、rylgyle、apsfsdipnpigsense、tqtpvvvppflqpe、kvlpvpqk。
17、进一步，本专利技术提供了上述任一实施方案中所述的制备方法或所述的鲜奶级酪蛋白活性肽或鲜奶级酪蛋白活性肽粉在以下至少一方面中的应用：
18、(1)缓解疲劳或增强运动能力；
19、(2)制备抗疲劳或增强运动能力的药物；
20、(3)制备抗疲劳或增强运动能力的食品、食品添加剂或保健品。
21、与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：
22、本专利技术通过序贯酶解以及膜分离技术获得了分子量小于1kda的鲜奶级酪蛋白活性肽，具有较好的生物利用度和抗疲劳生物活性，可使机体快速恢复体力。本专利技术的非纯化蛋白质水解物比纯化肽具有更高的抗氧化活性，因为在糖和氨基酸的存在下能促进活性肽的吸收。本专利技术的鲜奶级酪蛋白活性肽具有种类和含量更为丰富的具有抗氧化活性和自由基清除能力的氨基酸和活性肽，可以用于制备抗疲劳食品和保健品，安全无毒。
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1.一种鲜奶级酪蛋白活性肽的制备方法，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述碱性蛋白酶酶解的条件包括：pH值为8.2～8.8，酶解温度为58℃～62℃，酶解时间为170min～190min。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述风味蛋白酶酶解的条件包括：pH值为7.5～8，酶解温度为52℃～58℃，酶解时间为200min～220min。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，将所述酶解液经过1KDa的陶瓷膜分离后，获得第一透过液和第一截留液；将所述第一截留液再过1KDa的陶瓷膜分离，获得第二透过液；将所述第一透过液和第二透过液浓缩合并后，制得所述鲜奶级酪蛋白活性肽。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，将所述鲜奶级酪蛋白活性肽冷冻干燥后制得鲜奶级酪蛋白活性肽粉。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，按底物计碱性蛋白酶的添加量为0.3％～0.5％(w/w)；风味蛋白酶的添加量为0.05％～0.1％(w/w)。
8.根据权利要求7所述的鲜奶级酪蛋白活性肽或鲜奶级酪蛋白活性肽粉，其特征在于，其中的必需氨基酸含量占总氨基酸含量的39％以上，和/或，其中的疏水性氨基酸占总氨基酸含量的50％以上。
9.根据权利要求7所述的鲜奶级酪蛋白活性肽或鲜奶级酪蛋白活性肽粉，其特征在于，其中含有13种具有抗氧化活性的肽段，包括：YPFPGPI、FPKYPVEPF、RHPHPHLSFM、YPFPGPIPN、VYPFPGPIPN、YPVEPF、RYLGY、FSDIPNPIGSE、YLGYLE、RYLGYLE、APSFSDIPNPIGSENSE、TQTPVVVPPFLQPE、KVLPVPQK。
10.权利要求1～6中任一项所述的制备方法或权利要求7～9中任一项所述的鲜奶级酪蛋白活性肽或鲜奶级酪蛋白活性肽粉在以下至少一方面中的应用：
...【技术特征摘要】
1.一种鲜奶级酪蛋白活性肽的制备方法，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述碱性蛋白酶酶解的条件包括：ph值为8.2～8.8，酶解温度为58℃～62℃，酶解时间为170min～190min。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述风味蛋白酶酶解的条件包括：ph值为7.5～8，酶解温度为52℃～58℃，酶解时间为200min～220min。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，将所述酶解液经过1kda的陶瓷膜分离后，获得第一透过液和第一截留液；将所述第一截留液再过1kda的陶瓷膜分离，获得第二透过液；将所述第一透过液和第二透过液浓缩合并后，制得所述鲜奶级酪蛋白活性肽。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，将所述鲜奶级酪蛋白活性肽冷冻干燥后制得鲜奶级酪蛋白活性肽粉。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，按底物计碱性蛋白酶的添加量为0.3％～0.5％(w/w...
【专利技术属性】
技术研发人员：王筠钠，逄晓阳，张书文，巩怡宁，吕加平，谢宁，李旭，
申请(专利权)人：中国农业科学院农产品加工研究所，
类型：发明
国别省市：
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