【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于中药制剂分析领域，具体涉及一种采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(uhplc-q-exactive-orbitrap-ms)技术快速识别归脾合剂中主要化学成分的检测方法。
技术介绍
1、中药复方制剂是中医临床治疗的主要方式和载体，是一个复杂的、多成分化学体系。以现代科学技术探索中药复杂体系的奥秘逐步成为中药大品种的质量控制、作用机制、临床应用提供科学依据，是保证中医临床用药安全性和有效性的重要一环。
2、归脾汤始载于宋代严用和的《济生方》，归脾合剂是以归脾汤为基础，采用现代制剂方法制成的中药复方制剂。全方由党参、炒白术、炙黄芪、炙甘草、茯苓、制远志、炒酸枣仁、龙眼肉、当归、木香、大枣(去核)、生姜十二味组成。方中人参、黄芪、白术、茯苓、甘草补脾益气；配以当归、大枣、枣仁、龙眼肉等生血宁心之品，全方共奏益气补血、健脾养心之功。归脾合剂用于治疗心脾两虚，气短心悸，失眠多梦，头昏头晕，肢倦乏力，食欲不振，崩漏便血之证，临床及药理实验都证明其疗效确切。研究归脾合剂复杂的化学成分体系，建立起成分与疗效之间的交互关系，有助于保证临床用药的安全性及有效性，但是目前尚无系统地研究其化学成分组成的报道。
3、现代研究表明，中药的药效并非是某几个“指标成分”或“主要成分”在起作用，而是多成分协同作用的结果。中药复杂的多组分体系使得其成分分离困难，定性和定量鉴别具有挑战性。利用薄层色谱技术及液相色谱技术等传统的检测、分析、鉴定技术，虽然能比较深入且准确地鉴定其中的化学成分或活性成分，但是其耗时长、
4、本专利技术公开了一种快速识别归脾合剂中化学成分的检测方法，目的在于提供一种采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(uhplc-q-exactive-orbitrap-ms)技术快速识别归脾合剂中主要化学成分的检测方法，实现了对归脾合剂中的苯丙素类、苯肽类、黄酮类、酮类、萜类等115种成分进行快速定性鉴别，为建立归脾合剂成分与疗效之间的交互关系提供基础，为临床用药的安全性和有效性的研究提供依据。
技术实现思路
1、为了弥补现有技术中对于中成药多种成分测定的局限性，本专利技术提供一种快速识别归脾合剂中化学成分的检测方法，采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(uhplc-q-exactive-orbitrap-ms)技术对归脾合剂的化学成分进行分析鉴定，得到所含成分的准分子离子峰及蕴含丰富结构信息的碎片离子峰，从而对其结构进行快速、准确的鉴定，为归脾合剂的药效物质基础研究提供依据。
2、一种快速识别归脾合剂中化学成分的检测方法，包括如下步骤：
3、配制供试品溶液和对照品溶液，分别将对照品和供试品溶液注入超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(uhplc-q-exactive ms)系统进行测定，结合对照品的色谱保留时间、紫外吸收光谱特征、分子量以及多级裂解离子碎片信息进行快速的结构鉴定。
4、优选地，所述供试品溶液的配制包括以下步骤：
5、精密吸取归脾合剂样品，加甲醇溶解，超声提取，定容，摇匀，离心，取上清液滤过，作为供试品溶液。
6、所述对照品为绿原酸、阿魏酸、甘草苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、远志酮ⅲ、鞣花酸、斯皮诺素、木犀草苷、党参炔苷、3,6’-二芥子酰基蔗糖、芒柄花素、甘草酸铵、细叶远志皂苷、白术内酯ⅰ、藁本内酯、新绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸b、异绿原酸a、异绿原酸c。
7、所述超高液相色谱条件为以十八烷基键合硅胶色谱柱为固定相，以10mmol/l乙酸铵溶液-乙腈为流动相梯度洗脱，检测波长为320-330nm，流速为0.2-0.4ml/min。
8、所述色谱柱为waters cortecs t3 c18色谱柱，色谱柱规格为2.1mm×100mm，1.6μm；或watersacquityuplc hss t3色谱柱，色谱柱规格为2.1mm×100mm，1.8μm。
9、优选地，所述色谱柱为waters cortecs t3 c18色谱柱，色谱柱规格为2.1mm×100mm，1.6μm。
10、优选地，所述洗脱过程按照如下的梯度表进行：
11、
12、
13、所述的检测波长为324nm，流速为0.2ml/min。
14、所述四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱条件为：
15、以离子源为hesi源，正/负离子切换模式，鞘气流速30arb，辅助气流速8arb，喷雾电压3.8kv，离子传输管温度320℃，扫描模式为full ms/dd-ms2，full ms分辨率70000，dd-ms2分辨率17500，扫描范围m/z 125-1875，ms/ms模式。
16、下面内容将详细阐述本专利技术的技术方案：
17、一种快速识别归脾合剂中化学成分的检测方法，包括如下步骤：
18、1)供试品溶液的制备：精密吸取归脾合剂，置容量瓶中，加甲醇溶解，超声提取，定容，摇匀，离心，取上清滤过，作为供试品溶液。
19、2)对照品溶液的制备：分别取绿原酸、阿魏酸、甘草苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、远志酮ⅲ、鞣花酸、斯皮诺素、木犀草苷、党参炔苷、3,6’-二芥子酰基蔗糖、芒柄花素、甘草酸铵、细叶远志皂苷、白术内酯ⅰ、藁本内酯、新绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸b、异绿原酸a、异绿原酸c对照品，用甲醇制备成浓度为1mg/ml的对照品储备液，各取1ml到50ml容量瓶中，用甲醇定容，制备成混合对照品溶液；
20、3)超高效液相色谱条件：waters cortecs t3 c18色谱柱；流动相a：2mmol/l乙酸铵溶液，流动相b：乙腈；按照如下的表格梯度洗脱；检测波长为324nm；进样量1μl；流速：0.2ml/min；柱温：28-32℃；
21、4)四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱条件：
22、采用离子源为hesi源，正/负离子切换模式，鞘气流速30arb，辅助气流速8arb，喷雾电压3.8kv，离子传输管温度320℃，扫描模式为full ms/dd-ms2，full ms分辨率70000，dd-ms2分辨率17500，扫描范围m/z 125-1875，ms/ms模式；
23、5)测定方法：将供试品溶液注入超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(uhplc-q-exactive ms)进行测定，结合各成分的色谱保留时间、紫外吸收光谱特征、分子量以及多级裂解离子碎片信息进行快速的结构鉴定。
24、优选地，步骤1)超声提取30min。
25、优选地，步骤3)所述色谱柱规格为2.1m×100mm，1.6μm。
26、优选地，步骤3)所述柱温为30℃。本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种快速识别归脾合剂中化学成分的检测方法，其特征在于，配制供试品溶液和对照品溶液，分别将对照品和供试品溶液注入超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱系统进行测定，结合对照品的色谱保留时间、紫外吸收光谱特征、分子量以及多级裂解离子碎片信息进行快速的结构鉴定，得到115种化合物成分。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述供试品溶液的配制包括以下步骤：精密吸取归脾合剂样品，加甲醇溶解，超声提取，定容，摇匀，离心，取上清液滤过，作为供试品溶液。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述对照品为绿原酸、阿魏酸、甘草苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、远志酮Ⅲ、鞣花酸、斯皮诺素、木犀草苷、党参炔苷、3,6’-二芥子酰基蔗糖、芒柄花素、甘草酸铵、细叶远志皂苷、白术内酯Ⅰ、藁本内酯、新绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述超高液相色谱条件为以十八烷基键合硅胶色谱柱为固定相，以10mmol/L乙酸铵溶液-乙腈为流动相梯度洗脱，检测波长为320-330nm，流速为0.2-0
5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述色谱柱为Waters CORTECS T3C18色谱柱，色谱柱规格为2.1mm×100mm，1.6μm；或WatersACQUITYUPLC HSS T3色谱柱，色谱柱规格为2.1mm×100mm，1.8μm。
6.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述洗脱过程按照如下的梯度表进行：
7.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述的检测波长为324nm，流速为0.2ml/min。
8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱条件为：
...【技术特征摘要】
1.一种快速识别归脾合剂中化学成分的检测方法，其特征在于，配制供试品溶液和对照品溶液，分别将对照品和供试品溶液注入超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱系统进行测定，结合对照品的色谱保留时间、紫外吸收光谱特征、分子量以及多级裂解离子碎片信息进行快速的结构鉴定，得到115种化合物成分。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述供试品溶液的配制包括以下步骤：精密吸取归脾合剂样品，加甲醇溶解，超声提取，定容，摇匀，离心，取上清液滤过，作为供试品溶液。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述对照品为绿原酸、阿魏酸、甘草苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、远志酮ⅲ、鞣花酸、斯皮诺素、木犀草苷、党参炔苷、3,6’-二芥子酰基蔗糖、芒柄花素、甘草酸铵、细叶远志皂苷、白术内酯ⅰ、藁本内酯、新绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸b、异绿原酸a、异绿原酸c。
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【专利技术属性】
技术研发人员：张贵民，邓丽华，许克宁，
申请(专利权)人：鲁南厚普制药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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