【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物工程领域，特别是涉及一种体外诱导扩增干性记忆t细胞的方法。
技术介绍
1、继手术、放疗和化疗后，t细胞免疫治疗已成为一种新型的肿瘤治疗方法，它是通过回输离体活化和扩增的来源于异体或自身的t细胞，引发机体免疫反应以达到治疗或缓解疾病的方法，被认为是目前极具潜力的肿瘤治疗策略。但是这种方法目前大多数是基于终末效应t细胞，其在体内难以长期存活，极大的影响了过继性细胞治疗的临床效果。近期有研究表明，较低分化状态的t细胞具有更强的抗肿瘤作用，特别是近期报道的干性记忆t细胞(stem cell-like memory t cells,tscm)，相较于终末效应t细胞，他们具有更强的扩增，自我更新以及存活的能力，并且可以分化成中央记忆t细胞和效应记忆t细胞。在小鼠抗肿瘤模型中，发现过继干性记忆t细胞比过继中央记忆t细胞或效应记忆性t细胞展现出更强的抗肿瘤作用。
2、干性记忆t细胞是过继性t细胞治疗中最理想的一群细胞亚群，但是由于其在常规培养条件下难以扩增，迄今为止仍缺乏有效地体外快速诱导干性记忆t细胞的方法。已有研究报道，短暂的cd3/cd28共刺激分子作用后，利用细胞因子il-7、il-15联合及il-21可以提高干性记忆t细胞的诱导比例，培养出更多数量的干性记忆t细胞，从而为过继性t细胞治疗提供更加优化的培养方案。但是在大规模诱导干性记忆t细胞过程中，细胞因子类药物用量较大，使得生产成本大大提高。同时要借助流式细胞仪分选技术以获得大量的干性记忆t细胞，但是此技术对仪器以及操作环境要求较高，不适合大规模细胞生产
3、有研究显示在t细胞体外扩增过程中，适当抑制t细胞代谢可使t细胞维持低分化状态，如雷帕霉素可通过抑制t细胞的糖酵解过程使其保持干性状态。甘露糖是葡萄糖的一种异构体，分布于人体的血液和各个组织中，如皮肤，脏器等。甘露糖能够参与糖蛋白的合成，调节自身免疫系统的功能。同时，甘露糖可通过干扰肿瘤细胞内葡萄糖代谢及pd-l1蛋白的稳定性从而抑制肿瘤的生长。
技术实现思路
1、专利技术要解决的问题
2、如何提供一种体外快速、高效诱导扩增干性记忆t细胞的方法，是本领域技术人员亟待解决的技术问题。
3、用于解决问题的方案
4、一方面，本专利技术提供一种体外诱导扩增干性记忆t细胞的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
5、s1：激活扩增t细胞；
6、s2：在t细胞激活时或激活后，在培养基中添加甘露糖培养。
7、优选地，所述s1步骤包括：利用抗体包被细胞培养板后，在含有细胞因子的培养基中激活扩增t细胞。
8、优选地，所述抗体为cd3抗体和cd28抗体。
9、优选地，所述细胞因子选自il-2、il-7、il-15、il-17和il-21中的一种或多种。
10、优选地，所述细胞因子为il-2。
11、优选地，所述cd3抗体的浓度为1～2μg/ml。
12、优选地，所述cd28抗体的浓度为1～2μg/ml。
13、优选地，所述甘露糖的浓度为2.0-100.0mm。
14、优选地，所述甘露糖的浓度为5.0-50.0mm。
15、优选地，所述方法还包括以下步骤：
16、s3：更换含有细胞因子和甘露糖的培养基进行培养，得到以干性记忆t细胞为主的淋巴细胞群。
17、优选地，所述细胞因子选自il-2、il-7、il-15、il-17和il-21中的一种或多种。
18、优选地，所述细胞因子为il-2。
19、优选地，所述更换培养基的时间为1-3天。
20、优选地，所述更换培养基的时间为2天。
21、优选地，所述淋巴细胞群包括cd4 t细胞、cd8 t细胞、γδt、tils、tcr-t、car-t、star-t。
22、优选地，所述t细胞种属来源包括人源t细胞或小鼠来源的t细胞。
23、另一方面，本专利技术提供一种淋巴细胞群，由上述方法所制备得到。
24、另一方面，本专利技术提供一种药物组合物，所述药物组合物包含上述淋巴细胞群。
25、优选地，所述药物组合物还包含药学上可接受的赋形剂。
26、优选地，所述的药物组合物还包含额外的治疗剂。
27、另一方面，本专利技术提供上述方法制备得到的淋巴细胞群、上述淋巴细胞群或上述组合物在制备过继性免疫治疗药物中的应用。
28、优选地，所述过继性免疫治疗为抗肿瘤免疫治疗、抗感染免疫治疗和自身免疫病治疗。
29、另一方面，本专利技术提供甘露糖在体外诱导扩增干性记忆t细胞中的应用。
30、专利技术的效果
31、1、本专利技术采用的化合物较为简单且廉价，具有价格低廉、生产安全性高等特点。可通过改变t细胞的培养条件获得大量的干性记忆t细胞，减少了其他细胞因子的使用，并大幅度降低了细胞因子应用所产生的毒副作用从而缩减了干性记忆t细胞的生产成本。
32、2、本专利技术获得的干性记忆t细胞具有多向分化潜能，其分化的t细胞可高效的募集到其发挥功能的部位、捕捉并清除抗原或携带抗原的肿瘤细胞或病原物，并在体内维持其干性t细胞特性，为进一步分化形成效应t细胞创造条件，延长了过继免疫治疗中过继t细胞的体内长效性，从而产生了长久的保护效力。
33、3、本专利技术获得的干性记忆t细胞适用于临床中的任何过继免疫治疗，包括但不限于肿瘤以及感染免疫以及自身免疫疾病等。
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1.一种体外诱导扩增干性记忆T细胞的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述S1步骤包括：利用抗体包被细胞培养板后，在含有细胞因子的培养基中激活扩增T细胞；
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述CD3抗体的浓度为1～2μg/mL；
4.根据权利要求1-2任一项所述的方法，其特征在于，所述甘露糖的浓度为2.0-100.0mM；优选为5.0-50.0mM。
5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，所述方法还包括以下步骤：
6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，所述T细胞种属来源包括人源T细胞或小鼠来源的T细胞。
7.一种淋巴细胞群，其特征在于，由权利要求1-6任一项所述的方法所制备得到。
8.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含权利要求7所述的淋巴细胞群；
9.权利要求1-6中任一项所述的方法制备得到的淋巴细胞群、权利要求7所述的淋巴细胞群或权利要求8所述的组合物在制备过继性免疫治疗药物中的应用；
10.甘露糖在体外诱导扩增干性记忆T细胞中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种体外诱导扩增干性记忆t细胞的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述s1步骤包括：利用抗体包被细胞培养板后，在含有细胞因子的培养基中激活扩增t细胞；
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述cd3抗体的浓度为1～2μg/ml；
4.根据权利要求1-2任一项所述的方法，其特征在于，所述甘露糖的浓度为2.0-100.0mm；优选为5.0-50.0mm。
5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，所述方法还包括以...
【专利技术属性】
技术研发人员：李贵登，邱雅静，程洪成，杜静，
申请(专利权)人：苏州系统医学研究所，
类型：发明
国别省市：
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