【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于免疫检测的，尤其涉及一种用于快速检测mrna加帽率的荧光免疫层析检测试纸、试剂盒、检测方法和应用。
技术介绍
1、帽子结构位于mrna的5'端，对mrna的稳定性和翻译效率起着至关重要的作用，而mrna加帽率检测是确保mrna疫苗稳定性和表达能力的关键步骤。传统的加帽率检测方法通常涉及同位素标记技术，这些技术虽然能够提供准确的加帽率信息，但存在着操作复杂、成本高、安全性差等缺点，限制了其在大规模生产和快速检测中的应用。
2、随着生物技术的进步，研究人员开始探索新的加帽率检测方法。这些方法旨在简化操作流程，提高检测速度和准确性。例如，通过rnase h酶特异性切割mrna的5'端，产生不同长度的片段，通过lc-ms技术对这些片段进行分析，可以根据其分子质量区分不同的帽子结构，从而计算得到加帽率。此外，一些新的核酶也被用于加帽率检测——核酶能够在mrna的特定位点进行特异性切割，释放出短rna片段，这些片段可以通过凝胶电泳或lc-ms进行分析，以确定加帽率。与rnase h酶相比，核酶提具有更高的切割特异性，有效地减少了非特异性切割产物的产生。elisa方法也被开发用于加帽率的测定，该方法依赖于帽特异性抗体或蛋白与加帽mrna的结合，通过信号放大来定量加帽mrna。
3、但是，上述传统的mrna的加帽率检测方法通常需要专业的设备、高昂的成本、复杂的样品处理步骤和专业的技术知识，这限制了其在快速、现场或低成本应用场景中的使用，具有较大的局限性。
技术实现思路p>
1、本专利技术的第一目的在于提供一种荧光免疫层析检测试纸，该试纸以荧光纳米颗粒-抗mrna的5'端加帽结构的抗体作为检测探针，以链霉亲和素-生物素-poly(dt)25作为捕获探针，其具有优秀的特异性识别、结合5’加帽结构并对mrna进行固定的能力——利用检测探针可快速与5’加帽结构特异性结合，利用poly(dt)25与mrna分子polya尾的碱基互补配对将mrna固定在检测线上，实现对荧光信号的富集，而后对荧光信号进行检测，可在百纳克级别的mrna样品量下，实现对加帽率的定量检测，且该试纸对于mrna加帽率的区别度不高于5％，具有优秀的分辨率和灵敏度，能够很好地被应用于快速、现场或低成本的应用场景中，应用前景良好。
2、本专利技术的第二目的在于提供一种试剂盒。
3、本专利技术的第三目的在于提供一种mrna加帽率的检测方法。
4、本专利技术的第四目的在于提供上述荧光免疫层析检测试纸和/或试剂盒在rna产品生产制造中的应用。
5、具体的，本专利技术提供的荧光免疫层析检测试纸包括依次接触的样品垫、结合垫和反应垫；所述结合垫上包被有荧光纳米颗粒-抗mrna的5'端加帽结构的抗体；所述反应垫上设置有检测线，所述检测线上包被有链霉亲和素-生物素-poly(dt)25。
6、进一步地，以所述结合垫的干重为基准，所述荧光纳米颗粒-抗mrna的5'端加帽结构的抗体的包被量为0.01～0.2μg/cm2。
7、进一步地，所述荧光纳米颗粒的粒径为100～300nm。
8、进一步地，所述检测线上，所述链霉亲和素-生物素-poly(dt)25的包被浓度为10～15μg/cm2。
9、进一步地，所述反应垫上设置有质控线，所述质控线上包被有抗抗mrna的5'端加帽结构的抗体的抗体。
10、进一步地，所述质控线上，所述抗抗mrna的5'端加帽结构的抗体的抗体的包被量为0.01～2μg/cm2。
11、本专利技术提供的试剂盒包括上述荧光免疫层析检测试纸。
12、进一步地，该试剂盒包括上样缓冲液，所述上样缓冲液包括nacl、表面活性剂和甲酰胺中的一种或多种。
13、进一步地，所述上样缓冲液为ph＝7～7.5的tris-hcl溶液。
14、进一步地，所述表面活性剂为乙基苯基聚乙二醇，且所述上样缓冲液中，所述nacl的浓度为1～2wt％，所述乙基苯基聚乙二醇的浓度为0.1～0.3wt％，所述甲酰胺的浓度为2～10wt％。
15、本专利技术提供的mrna加帽率的检测方法采用上述荧光免疫层析检测试纸和/或试剂盒对待测mrna进行检测，具体包括：s1、取待测mrna加样于所述荧光免疫层析检测试纸的样品垫上进行层析；s2、测得所述检测线的荧光信号并计算获得加帽率。
16、进一步地，步骤s1中，所述待测mrna的加样量为0.5～1pmol。
17、本专利技术还提供了上述荧光免疫层析检测试纸和/或试剂盒在rna产品生产制造中的应用。
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1.一种荧光免疫层析检测试纸，其特征在于，该检测试纸包括依次接触的样品垫、结合垫和反应垫；所述结合垫上包被有荧光纳米颗粒-抗mRNA的5'端加帽结构的抗体；所述反应垫上设置有检测线，所述检测线上包被有链霉亲和素-生物素-poly(dT)25。
2.根据权利要求1所述的荧光免疫层析检测试纸，其特征在于，以所述结合垫的干重为基准，所述荧光纳米颗粒-抗mRNA的5'端加帽结构的抗体的包被量为0.01～0.2μg/cm2。
3.根据权利要求1所述的荧光免疫层析检测卡，其特征在于，所述荧光纳米颗粒的粒径为100～300nm。
4.根据权利要求1所述的荧光免疫层析检测试纸，其特征在于，所述检测线上，所述链霉亲和素-生物素-poly(dT)25的包被量为10～15μg/cm2。
5.根据权利要求1所述的荧光免疫层析检测试纸，其特征在于，所述反应垫上设置有质控线，所述质控线上包被有抗抗mRNA的5'端加帽结构的抗体的抗体；
6.一种试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括权利要求1～5任一所述的荧光免疫层析检测试纸。
7.根据权利要
8.一种mRNA加帽率的检测方法，其特征在于，该检测方法采用权利要求1～5任一所述的荧光免疫层析检测试纸和/或权利要求6或7所述的试剂盒对待测mRNA进行检测，具体包括：S1、取待测mRNA加样于所述荧光免疫层析检测试纸的样品垫上进行层析；S2、测得所述检测线的荧光信号并计算获得加帽率。
9.根据权利要求8所述的mRNA加帽率的检测方法，其特征在于，步骤S1中，所述待测mRNA的加样量为0.5～1pmol。
10.权利要求1～5任一所述的荧光免疫层析检测试纸和/或权利要求6或7所述的试剂盒在RNA产品生产制造中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种荧光免疫层析检测试纸，其特征在于，该检测试纸包括依次接触的样品垫、结合垫和反应垫；所述结合垫上包被有荧光纳米颗粒-抗mrna的5'端加帽结构的抗体；所述反应垫上设置有检测线，所述检测线上包被有链霉亲和素-生物素-poly(dt)25。
2.根据权利要求1所述的荧光免疫层析检测试纸，其特征在于，以所述结合垫的干重为基准，所述荧光纳米颗粒-抗mrna的5'端加帽结构的抗体的包被量为0.01～0.2μg/cm2。
3.根据权利要求1所述的荧光免疫层析检测卡，其特征在于，所述荧光纳米颗粒的粒径为100～300nm。
4.根据权利要求1所述的荧光免疫层析检测试纸，其特征在于，所述检测线上，所述链霉亲和素-生物素-poly(dt)25的包被量为10～15μg/cm2。
5.根据权利要求1所述的荧光免疫层析检测试纸，其特征在于，所述反应垫上设置有质控线，所述质控线上包被有抗抗mrna...
【专利技术属性】
技术研发人员：汪大明，罗登旺，曹宇虹，
申请(专利权)人：毕昇北京生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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