【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于有机磷农药检测领域，具体涉及一种基于酶抑制灵敏检测有机磷农药残留的方法。
技术介绍
1、有机磷农药(organophosphorus pesticides,ops)在1960年代被引入农业生产中，用于控制病虫害以增加作物产量[1]，是目前最常用、最重要的一类农药。丙溴磷是一种高效、广谱且合成简单的有机磷杀虫剂，被用于防治蔬菜、棉花及其他农作物上的害虫，可以抑制害虫体内乙酰胆碱酯酶并导致呼吸窘迫甚至死亡[2-3]，因其广泛应用，对水、土壤甚至食物造成严重污染[4]，对人与动物的生命安全构成威胁[5]。在欧盟，对丙溴磷的使用有明确的限量，规定农产品中丙溴磷农药最大残留限量(mrls)在0.01mg/kg～0.4mg/kg[6]；我国2021《食品安全国家标准食品中农药最大残留限量》规定水果中丙溴磷的残留限量为0.05mg/kg、蔬菜中为0.05mg/kg[7]。因此，为了确保食品安全，对水果和蔬菜中丙溴磷进行检测具有重要意义。
2、近年来，主要使用常规仪器法来检测丙溴磷，如质谱法(ms)[8]、气相色谱法(gc)[9]、高效液相色谱法(hplc)[10]等方法。这些方法灵敏度高、准确性好，但是前处理复杂、技术技能要求高、耗时长、成本高。
3、酶抑制法是基于农药能抑制某些特定的生物酶(如乙酰胆碱酯酶、羧酸酯酶等)的活性，并借助特定的显色反应，通过肉眼观察或仪器读数进行判定，以定性或定量检测样品中农药残留的状况。酶抑制法因其操作过程简便，检测速度快，不需要昂贵仪器、检测成本低等优点，已经作为一种常用
4、提高富集倍数可以同样倍率地提高检测灵敏度，如果提高富集倍数的方法是快速、方便、高效的，就可以用于快速检测的前处理。固相萃取作为一种样品前处理技术，具有简单、高效、易自动化和有机溶剂耗量少等优点，常被应用于食品样品中污染物的萃取[13-14]。本工作将双咪唑离子液体修饰的poly(dbvd)-sil作为固相萃取的吸附剂，研究其对农药残留的萃取条件，以及萃取后采用酶抑制法进行快速检测的酶抑制条件，由此建立了固相萃取-酶抑制分光光度法快速检测果蔬中丙溴磷残留方法。
技术实现思路
1、一种基于酶抑制灵敏检测有机磷农药残留的方法，其特征在于包括如下步骤：
2、(1)取5ml待测液于25ml具塞比色管中，加入ph6.0的0.1mol/l pbs 2ml，分别加入0.5ml mb、2ml底液h2o2和1ml过氧化氢酶(cat)、0.01mol·l-1feso4溶液1.50ml，加水至25ml刻度，混匀，静置10min，用1cm比色皿，于664nm处测定吸光度；
3、(2)按照下式计算酶抑制率，以此判断果蔬中丙溴磷残留情况；
4、酶抑制率(％)＝[(δa0-δa1)/δa0]×100，式中：δa0为对照溶液反应10min吸光度的变化值；δa1为样品溶液反应10min吸光度的变化值。
5、本专利技术的另一实施方案提供上述基于酶抑制灵敏检测有机磷农药残留的方法，其特征在于所述待测液由如下方法制备：
6、取120mg的poly(dbvd)-sil装入固相萃取空柱管，经乙醇和去离子水分别活化后，制得固相萃取小柱，以6ml/min的流速将10ml样品溶液通过已活化好的固相萃取小柱，用5ml正己烷淋洗，1.0ml乙醇作为洗脱剂进行洗脱，即得所述待测液。
7、所述样品溶液由如下方法制备：取5g含有机磷农药残留的果蔬样品，捣碎，用20ml乙醇混匀，过0.22μm滤膜即得所述样品溶液。
8、所述poly(dbvd)-sil由如下方法制备：将乙烯基三乙氧基硅烷与硅胶在110℃和氮气保护下回流48h，制得乙烯基修饰的硅胶；以1-乙烯基咪唑和1,12-二溴十二烷为原料，在70℃和氮气保护下回流24h，合成3,3'-十二烷-1,1'-二-1-乙烯基双咪唑溴盐(dbvd)；以乙烯基修饰的硅胶和dbvd质量比为1:1，偶氮二异丁腈为引发剂，在70℃和氮气保护下，机械搅拌3h，制得poly(dbvd)-sil。
9、本专利技术的另一实施方案提供上述基于酶抑制灵敏检测有机磷农药残留的方法，其特征在于还任选包括如下步骤：分别配制0.001、0.010、0.050、0.100、0.500、1.00、5.00mgl-1丙溴磷标准溶液，测定其对过氧化氢酶活性的抑制程度，并绘制标准曲线，结果表明：丙溴磷的质量浓度在0.001～5.0mg·l-1之间时，其自然对数与酶活性抑制率呈线性关系，线性回归方程为y＝
10、0.0509x+0.4341，相关系数为0.9968检出限(3s/k)为3.1×10-4mg·l-1。
11、本专利技术的另一实施方案提供上述基于酶抑制灵敏检测有机磷农药残留的方法，其特征在于检测范围为0.001～5.0mg·l-1范围。
12、本专利技术所述有机磷农药为农药领域常见有机磷农药，优选丙溴磷。
13、本专利技术试验原理：试验考察了不同体系在波长400～750nm内的吸光度a，结果见图2。结果表明：mb体系在664nm处可见光区有强吸收(曲线1)，此时摩尔吸光系数为1.122×105l·mol-1·cm-1；在mb中加入芬顿试剂时，10min内体系变为淡蓝色，664nm处的吸光度a趋近于0(曲线2)，说明mb被氧化褪色；加入cat后，mb褪色受限，吸光度a恢复程度与cat活性有关(曲线3)。加入丙溴磷后，丙溴磷印制过氧化氢酶活性，mb褪色明显(曲线4、曲线5)。据此，可提出基于芬顿试剂-mb体系的褪色分光光度法测定丙溴磷。
14、与现有技术相比，本专利技术的优点在于：本专利技术对固相萃取剂种类、用量、流速、洗脱剂、酶液浓度、h2o2底液浓度及用量等参数进行了优化，得到了一种检测范围广、灵敏度高的方法。本专利技术成功地将固相萃取技术应用于果蔬中丙溴磷农药残留的富集，提高了残留农药的萃取率，提高了酶抑制法快速测定有机磷农药残留的灵敏度。该方法与传统的酶抑制法测定有机磷农药残留方法相比，检出限低，比传统方法的最低检出浓度(gb2763-2019)低2个数量级，检测结果准确可靠。利用该方法测定蔬菜中的有机磷农药残留，具有快速、方便、可靠等优势，对于防止超标蔬菜进入市场销售，具有一定的应用价值。
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1.一种基于酶抑制灵敏检测有机磷农药残留的方法，其特征在于包括如下步骤：
2.权利要求1所述的方法，其特征在于所述待测液由如下方法制备：
3.权利要求1-2任一项所述的方法，其特征在于所述样品溶液由如下方法制备：
4.权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于所述Poly(DBVD)-Sil由如下方法制备：
5.权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于该方法的检测范围为0.001～5.0mg·L-1范围。
6.权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于所述有机磷农药优选丙溴磷。
【技术特征摘要】
1.一种基于酶抑制灵敏检测有机磷农药残留的方法，其特征在于包括如下步骤：
2.权利要求1所述的方法，其特征在于所述待测液由如下方法制备：
3.权利要求1-2任一项所述的方法，其特征在于所述样品溶液由如下方法制备：
4.权利要求1-3任一...
【专利技术属性】
技术研发人员：金党琴，周慧，肖伽励，龚爱琴，高庆，王升文，徐同同，
申请(专利权)人：扬州工业职业技术学院，
类型：发明
国别省市：
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