【技术实现步骤摘要】
本申请涉及prrs或prrsv，具体涉及cd81作为prrs或prrsv的标志物或靶点的应用。
技术介绍
1、猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive andrespiratory syndrome,prrs)是对全球养猪业健康发展危害最大的传染病之一。其病原是猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive andrespiratory syndrome virus,prrsv)，主要侵染猪肺泡巨噬细胞，破坏免疫系统，引起免疫抑制，类似艾滋病病毒(hiv)，因此被称为“猪的艾滋病病毒”。prrsv主要引起母猪繁殖障碍，不同年龄阶段的猪只特别是仔猪呼吸道症状，以及继发感染如副猪嗜血杆菌、链球菌感染，从而对全球养猪业造成巨大的经济损失。
2、prrsv与其他病毒最大的区别在于其主要侵染猪肺泡巨噬细胞，破坏免疫系统。该病毒具有以下特点：极易变异重组、免疫抑制性、持续性感染、抗性依赖增强性(ade)，使得该病的防控和清除非常困难，已成为养猪业中最难防控的疾病之一。基于该病毒具有以上特性，从病原(prrsv)角度研发的疫苗存在以下问题：诱导产生中和抗体慢或不产生、对异源毒株交叉保护力差、疫苗毒病毒血症时间长、易与田间毒株重组产生致病力更强的重组毒，致使疫苗无法控制prrs的发生与流行，也无有效的抗病毒药物。因此，有必要从宿主(猪)遗传角度开展研究，从遗传本质上提高宿主对prrs的抗病力，通过发掘prrsv抗性/易感基因，进而培育抗病猪新品种(系)，或筛选靶向易感基因的抗病毒药物等。目前已鉴
3、生物育种是种业创新的核心。培育战略性新品种，实现种业科技自强自立，是解决“种源”要害、打赢种业翻身仗的重中之重。发掘具有自主知识产权的原创性靶基因是分子抗病育种的基础和关键。
4、由于遗传背景与生物抗病性有着紧密的联系，因此，从宿主遗传角度开展研究，在遗传水平提高宿主对prrs的抗病力，采用基因手段筛选蓝耳病抗性猪的工作，找出prrsv宿主抗性或易感相关的基因，对于猪繁殖与呼吸综合征的防控具有不可比拟的优势，不仅可以研究猪繁殖与呼吸综合征的感染机制，还为猪繁殖与呼吸综合征的治疗和预防提供新办法。目前已鉴定的具有重大育种价值的原创性抗性分子靶标鲜有报道，严重阻碍了prrs抗病育种的开展。通过发掘prrsv宿主抗病/易感基因，进而培育和筛选抗病(prrs)猪新品种(系)，探索更多相关基因对于分子层面抗猪繁殖与呼吸综合征具有重要的意义。
技术实现思路
1、本申请cd81作为prrs或prrsv的标志物或靶点的应用，为检测prrs或prrsv提供了帮助，为预防或治疗prrs或prrsv提供了新的靶点，也为培育和筛选抗病(prrs)猪新品种(系)提供了技术支持。
2、为此，本申请实施例至少公开了以下技术方案：
3、一方面，实施例公开了猪繁殖与呼吸综合征体外样本的标志物，所述标志物为cd81。
4、一方面，实施例公开了检测猪繁殖与呼吸综合征体外样本的试剂盒，其包括如seqid no.1和2所示的引物对。
5、一方面，实施例还公开了检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的试剂盒，其包括如seqid no.1和2所示的引物对。
6、一些实施例中，该试剂盒还包括rna提取试剂，cdna合成试剂，pcr扩增试剂。其中，所述rna提取试剂包括：trizol试剂、氯仿和异丙醇。所述cdna合成试剂包括随机引物oligo(dt)1μl，5×缓冲液4μl，rnase抑制剂(20u/μl)1μl，dntp mix(10mm)2μl，m-mulv反转录酶(200u/μl)1μl，cdna合成后-20℃保存备用。pcr扩增试剂包括如seq id no.1和2所示的引物对，dntp，dna聚合酶和10×pcr缓冲液。
7、一方面，实施例还公开了检测猪繁殖与呼吸综合征病毒体外样本的试剂盒，其包括cd81抗体，以及二抗。
8、一方面，实施例还公开了检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的试剂盒，其包括cd81抗体，以及二抗。
9、一些实施例中，所述一抗为cd81抗体(ab155760，abcam)或其稀释试剂。所述二抗为羊抗兔igg(h+l)alexa flour 488标记二抗或其稀释试剂。
10、一方面，实施例还公开了cd81作为预防或治疗猪繁殖与呼吸综合征的靶点在制备预防或治疗猪繁殖与呼吸综合征的试剂中的应用。
11、一方面，实施例还公开了预防或治疗猪繁殖与呼吸综合征的药物，所述药物包含过表达cd81的载体。
12、一方面，实施例还公开了抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒的药物，所述药物包含过表达cd81的载体。
13、一方面，实施例还公开了cd81在抗猪繁殖与呼吸综合征的猪品种育种中的应用。
14、一些实施例中，所述应用包括根据猪个体体内的所述cd81表达量判断所述猪个体是否对猪繁殖与呼吸综合征病毒具有抗性或易感性。
15、这些实施例中，术语“体外样本”指含有prrsv或疑似含有prrsv的猪血液样本、猪唾液样本、猪汗液样本、猪尿液样本、猪咽拭子样本、猪乳液样本、猪精液样本、猪皮肤擦拭样本、猪粪便样本、猪痰液样本中的至少一项，或者指患有prrs或疑似患有prrs的猪血液样本、猪唾液样本、猪汗液样本、猪尿液样本、猪咽拭子样本、猪乳液样本、猪精液样本、猪皮肤擦拭样本、猪粪便样本、猪痰液样本中的至少一项。
16、与现有技术相比，本申请具有以下有益效果：
17、本申请首次发现，在猪感染prrsv病毒后会抑制四次跨膜蛋白cd81的表达，且随着感染时间增加，cd81的表达量会显著降低。进一步过表达cd81后，显示cd81蛋白水平显著升高，而prrsv-n蛋白表达水平显著降低，且随着cd81浓度的升高，prrsv-n蛋白被抑制的程度越明显，显示cd81抑制prrsv复制具有剂量依赖性，过表达cd81能够抑制prrsv复制。而沉默cd81显著促进prrsv复制。因此，促进cd81表达可以提高猪对蓝耳病毒的抗性，cd81可以作为判定prrsv易感性或抗性的标准，cd81表达量异常较高的猪对prrsv具有抗性，反之易感。本申请提供了cd81的新应用，通过发掘prrsv宿主新的抗病/易感基因，有利于培育和筛选更多的抗病猪新品种(系)，为鉴定猪对prrsv易感性以及prrsv抗性猪的筛选、鉴定和培育奠定了坚实的基础，有利于培育优良品系猪，对猪繁殖与呼吸综合征的防控具有重要的意义。
18、另外，cd163基因是prrsv入侵的决定性受体，该基因敲除的编辑猪可完全抵抗prrsv感染。cd163基因是目前发现的最有产业化应用价值的prrsv抗性基因，在筛选/鉴定/培育抗蓝耳病新品种(系)方面具有重要的意义。cd81与cd163同属cd分子，在生物学功能上有很多相似之处。本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.猪繁殖与呼吸综合征体外样本的标志物，所述标志物为CD81。
2.检测猪繁殖与呼吸综合征体外样本的试剂盒，其包括如SEQ ID NO.1和2所示的引物对。
3.检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的试剂盒，其包括如SEQ ID NO.1和2所示的引物对。
4.检测猪繁殖与呼吸综合征病毒体外样本的试剂盒，其包括CD81抗体，以及二抗。
5.检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的试剂盒，其包括CD81抗体，以及二抗。
6.CD81作为预防或治疗猪繁殖与呼吸综合征的靶点在制备预防或治疗猪繁殖与呼吸综合征的试剂中的应用。
7.预防或治疗猪繁殖与呼吸综合征的药物，所述药物包含过表达CD81的载体，所述过表达CD81的载体携带如SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列。
8.抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒的药物，所述药物包含过表达CD81的载体，所述过表达CD81的载体携带如SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列。
9.CD81在抗猪繁殖与呼吸综合征的猪品种育种中的应用。
10.根据权利要求8所述的应用，所述
...【技术特征摘要】
1.猪繁殖与呼吸综合征体外样本的标志物，所述标志物为cd81。
2.检测猪繁殖与呼吸综合征体外样本的试剂盒，其包括如seq id no.1和2所示的引物对。
3.检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的试剂盒，其包括如seq id no.1和2所示的引物对。
4.检测猪繁殖与呼吸综合征病毒体外样本的试剂盒，其包括cd81抗体，以及二抗。
5.检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的试剂盒，其包括cd81抗体，以及二抗。
6.cd81作为预防或治疗猪繁殖与呼吸综合征的靶点在制备预防或治疗猪繁殖与呼吸综合征的试剂...
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