【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种复方中药榆栀止血颗粒hplc指纹图谱的建立方法及其hplc对照指纹图谱，属于中药制剂分析领域。
技术介绍
1、榆栀止血颗粒为山东新时代药业有限公司的独家品种，为安徽中医妇科三大学术流派之一的庐江妇科学术继承人——安徽著名老中医徐志华教授多年临床实践总结的验方。该方由地榆炭、墨旱莲、炒栀子、绵马贯众、仙鹤草、炒槐花、拳参、大蓟、侧柏叶(炒)、棕榈炭、牡丹皮、茜草、蒲黄炭、生地黄、白芍、黄芩、当归等十七味中药精制而成，具有固经止血，滋阴清热的功效。用于冲任不固、阴虚血热所致月经过多、经期延长，症见月经量多或经期延长，经色深红、质稠，或有小血块，腰膝酸软，苔少或无苔，脉细数见上述证候者。
2、榆栀止血颗粒是中药复方制剂，含多味中药且化学成分复杂，对其进行有效的质量控制是保证其临床疗效的重要基础。目前，关于榆栀止血颗粒的质量控制方法未见有报道，企业内部标准主要是对单一或几种成分的定量分析和对部分组方药材的定性鉴别，缺乏有关榆栀止血颗粒更为综合、全面的质量控制研究。
3、中药指纹图谱作为一项质量控制技术，能够较为全面的控制药品的质量，具有系统性，整体性特点。目前，以指纹图谱控制榆栀止血颗粒的质量，国内外尚未见专利公开及文献报道。本专利技术公开了一种榆栀止血颗粒指纹图谱的建立方法，以及用该方法制作的榆栀止血颗粒hplc对照指纹图谱，在用相似度进行评价的情况下，可用其对照指纹图谱对榆栀止血颗粒的质量进行全面地评价和控制，从而保证了产品质量的稳定性及临床用药的有效性和安全性。
1、本专利技术的目的是针对现有榆栀止血颗粒质量控制方法的不足，提供一种榆栀止血颗粒hplc指纹图谱的建立方法及用该方法所得的hplc对照指纹图谱，从而为榆栀止血颗粒的内在质量和真伪鉴别提供可靠依据。
2、为达此目的，本专利技术采用以下技术方案：
3、一种榆栀止血颗粒hplc指纹图谱的建立方法，包括以下步骤：
4、1、供试品和对照品溶液的制备
5、称取芦丁对照品适量，用甲醇溶解，作为对照品溶液；
6、取榆栀止血颗粒适量，置具塞锥形瓶中，加入极性溶剂，超声，放冷，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；
7、2、色谱条件的确定
8、色谱条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相a为甲醇，流动相b为浓度为0.05％～0.4％的磷酸溶液，梯度洗脱，检测波长为264nm，流速为0.8～1.2ml/min，柱温为25～35℃，所述梯度洗脱程序如下:
9、
10、3、对照指纹图谱制作
11、按步骤2色谱条件测定对照品和供试品溶液，将所得色谱图导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012版》软件分析，得到由样品共有特征峰构成的榆栀止血颗粒hplc对照指纹图谱。
12、在有的实施例中，所述步骤2中流动相b为浓度为0.05％～0.2％的磷酸溶液。
13、在有的实施例中，所述步骤2中流动相b为浓度为0.1％的磷酸溶液。
14、所述步骤1中供试品溶液制备所用极性溶剂，选自水和甲醇溶液。
15、进一步地，所述步骤1中供试品溶液制备所用极性溶剂为甲醇溶液，浓度在60％以下。
16、更进一步地，甲醇溶液浓度为50％。
17、所述步骤1中供试品溶液制备所用超声时间为10min～50min。
18、更进一步地，所述超声时间为30min。
19、进一步地，所述步骤2中流速为1.0ml/min。
20、进一步地，所述步骤2中柱温为30℃。
21、按照上述方法，对多批次榆栀止血颗粒进行高效液相色谱分析测定，根据分离度和重现性从共有峰中选取18个特征峰，这些共有特征峰构成了榆栀止血颗粒的指纹特征，可作为榆栀止血颗粒的对照指纹图谱。以芦丁的色谱峰为参照峰，其余17个共有特征峰的相对保留时间分别为：0.179、0.290、0.406、0.553、0.834、1.063、1.192、1.307、1.356、1.562、1.701、1.736、1.772、1.938、2.094、2.142、2.508。
22、本专利技术提供所述方法建立的指纹图谱在榆栀止血颗粒全过程质量评价体系或榆栀止血颗粒工艺关键点控制中的应用。
23、在有些实例中，所述应用是指所述指纹图谱在榆栀止血颗粒制剂质量控制中的应用。
24、与现有技术相比，本专利技术的技术方案取得了以下有益技术效果：
25、1)本专利技术榆栀止血颗粒hplc指纹图谱的建立方法，根据榆栀止血颗粒的处方成分构成特点，优选最佳的hplc条件，解决了特征峰难以分开及杂质峰干扰大的难题，所得指纹图谱特征峰多，峰形好，各特征峰均实现了良好的基线分离，且方法精密度高、重复性好、稳定性高。
26、2)本专利技术建立的榆栀止血颗粒hplc指纹图谱方法克服了检测指标单一、不能反映内在质量的缺点，通过对比所得指纹图谱中共有特征峰的有无，可有效地保证成品质量，完善了榆栀止血颗粒的质量评价体系，为榆栀止血颗粒质量的全面、有效控制提供了理论和实践基础。
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1.一种榆栀止血颗粒HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于，该方法的色谱条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相A为甲醇，流动相B为浓度为0.05％～0.4％的磷酸溶液，梯度洗脱，检测波长为264nm，流速为0.8～1.2ml/min，柱温为25～35℃，所述梯度洗脱程序如下:
2.如权利要求1所述榆栀止血颗粒HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于，该方法还包括以下供试品和对照品溶液的制备步骤：
3.如权利要求2所述榆栀止血颗粒HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于，将对照品和供试品溶液注入色谱系统，按照权利要求1的色谱条件进行分析测定，得到由共有特征峰构成的榆栀止血颗粒HPLC对照指纹图谱。
4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，极性溶剂选自水和甲醇溶液。
5.如权利要求2所述的方法，其特征在于，极性溶剂为甲醇溶液，浓度在60％以下。
6.如权利要求2所述的方法，其特征在于，超声时间为10min～50min。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，流动相B磷酸溶液浓度为0.1％。
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