【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
1、使用单链可变片段(scfv)靶向癌相关表面抗原的表达嵌合抗原受体(car)的t细胞对几种血液恶性肿瘤，包括b细胞淋巴瘤(1)和多发性骨髓瘤(2,3)高度有效。然而，它们超凡的细胞毒活性带来了新的挑战，诸如无意中杀伤表达靶抗原的健康组织，尽管这通常在相当低的水平(4)。在广泛使用的cd19 car t细胞的情况下，这种中靶脱瘤毒性导致健康b细胞的消除(5,6)，而各种其他car t细胞方法由于靶向健康组织而导致了危及生命的毒性，甚至导致患者死亡(7-9)。先前已经证实，car t细胞在广泛的亲和力范围内发挥强效的抗肿瘤活性(10-12)，并且目前临床使用的许多car t细胞策略可能超过所需的亲和力阈值。因此，已经针对几种癌症靶标开发了低亲和力抗体以增加癌症选择性以及car t细胞持久性和功能(13-16)。然而，这些结合结构域都不是源自已经在临床使用中的现有的且广泛测试的高亲和力抗体，并且必须再次进行严密的临床前评价，有承担重大责任的风险，例如脱靶反应性和不稳定的表位。
技术实现思路
1、公开了通过修饰亲本高亲和力抗体来系统优化现有car结合结构域的抗体亲和力的方法，该方法可以是开发更有效且更安全的car t细胞方法的重要工具。
2、公开了包含cd229抗原结合结构域、跨膜结构域和细胞内信号传导结构域的嵌合抗原受体(car)多肽，其中所述cd229结合结构域是变体cd229抗原结合结构域。
3、公开了包含cd229抗原结合结构域、跨膜结构域和细
4、公开了包含cd229抗原结合结构域、跨膜结构域和细胞内信号传导结构域的嵌合抗原受体(car)多肽，其中所述cd229抗原结合结构域包含seq id no:134、seq id no:53或seq id no:84的序列。
5、公开了包含cd229抗原结合结构域、跨膜结构域和细胞内信号传导结构域的嵌合抗原受体(car)多肽，其中所述cd229抗原结合结构域包含含有序列akrdnsnsfdyw(seq idno:253)、akrgnensfdyw(seq id no:284或akrgnsnsqdyw(seq id no:134)的hcdr3。
6、公开了能够编码公开的任何car多肽的核酸序列。
7、公开了包含公开的car核酸序列的核酸序列的载体。
8、公开了包含公开的car多肽、car核酸或公开的载体中的任一者的细胞。
9、公开了与人cd229结合的抗体或其片段，其中所述抗体包含cd229抗原结合结构域，其包含seq id no:134、seq id no:53或seq id no:84的序列。公开了与人cd229结合的抗体或其片段，其中所述抗体包含cd229抗原结合结构域，其包含含有序列akrdnsnsfdyw(seq id no:？？)、akrgnensfdyw(seq id no:**)或akrgnsnsqdyw(seq id no:##)的hcdr3。
10、本文公开了包含公开的多肽、核酸、载体或细胞中的任一者的组合物。
11、公开了治疗多发性骨髓瘤的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的经遗传修饰以表达一种或多种公开的car多肽的t细胞。
12、公开了检测细胞上的cd229的方法，其包括向样品施用包含一种或多种公开的抗体或其片段的组合物，并检测所述抗体或其片段与cd229的结合。
13、公开了杀伤cd229阳性细胞的方法，其包括向包含cd229阳性细胞的样品施用有效量的经遗传修饰以表达一种或多种公开的car多肽的细胞。
14、公开了优先靶向癌细胞的方法，其包括向样品施用包含一种或多种公开的抗体或其片段的组合物，并检测所述抗体或其片段与cd229的结合。
15、公开了制备细胞的方法，其包括用一种或多种公开的载体转导细胞。
16、公开了活化表达本文公开的car多肽之一的t细胞的方法，其包括将t细胞与表达cd229的细胞一起培养并在培养后检测ifn-γ存在与否，其中ifn-γ的存在指示t细胞的活化。
17、所公开的方法和组合物的另外的优点将在下面的描述中部分列出，并且部分将从描述中理解，或可通过所公开的方法和组合物的实践来学习。所公开的方法和组合物的优点将借助在所附权利要求书中特别指出的要素和组合来实现和达到。应理解，以上概述和以下详述都仅是示例性和解释性的，并且不限制要求保护的本专利技术。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种嵌合抗原受体(CAR)多肽，其包含CD229抗原结合结构域、跨膜结构域和细胞内信号传导结构域，其中所述CD229结合结构域是SEQ ID NO:1的变体。
2.如权利要求1所述的CAR多肽，其中所述CD229抗原结合结构域包含序列QVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSGSIGYADSAKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKRGNSNSQDYWGQGTLVTVSSLEGGGGSGGGGSGGGASDIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPWTFGQGTKLEIKR。
3.如权利要求1所述的CAR多肽，其中所述CD229抗原结合结构域包含序列QVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSGSIGYADSAKGRFTISRDNSKNTLYLQMN
4.如权利要求1所述的CAR多肽，其中所述CD229抗原结合结构域包含图2所示的一个或多个氨基酸取代。
5.如前述权利要求中任一项所述的CAR多肽，其中所述CD229抗原结合结构域是与CD229特异性结合的抗体片段或抗原结合片段。
6.如前述权利要求中任一项所述的CAR多肽，其中所述CD229抗原结合结构域是特异性结合CD229的抗体的Fab或单链可变片段(scFv)。
7.如前述权利要求中任一项所述的CAR多肽，其中所述CD229抗原结合结构域包含在SEQ ID NO:1的HCDR3中的一个或多个氨基酸取代。
8.如前述权利要求中任一项所述的CAR多肽，其中所述CD229抗原结合结构域包含含有序列AKRDNSNSFDYW、AKRGNENSFDYW或AKRGNSNSQDYW的HCDR3。
9.如前述权利要求中任一项所述的CAR多肽，其中变体CD229抗原结合结构域包含在2D3 scFv的LCDR3中的一个或多个氨基酸取代。
10.如前述权利要求中任一项所述的CAR多肽，其中所述CD229抗原结合结构域包含含有表2中的那些中的任一个的序列的LCDR3。
11.如前述权利要求中任一项所述的CAR多肽，其中所述CD229抗原结合结构域包含与SEQ ID NO:53、84或134所示序列具有至少90％同一性的序列，其中所述CD229抗原结合结构域在所述HCDR3处包含与SEQ ID NO:53、84或134的100％同一性。
12.如前述权利要求中任一项所述的CAR多肽，其中所述CD229抗原结合结构域包含重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包含：
13.如前述权利要求中任一项所述的CAR多肽，其中所述变体CD229抗原结合结构域包含含有表2的那些中的任一个的轻链免疫球蛋白可变区。
14.如前述权利要求中任一项所述的CAR多肽，其中所述CD229抗原结合结构域包含对CD229的改变的亲和力。
15.如权利要求14所述的CAR多肽，其中所述改变的亲和力是较低的亲和力。
16.如权利要求14所述的CAR多肽，其中所述改变的亲和力是高亲和力。
17.如权利要求16所述的CAR多肽，其中所述CD229抗原结合结构域包含序列QVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSGSIGYADSAKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKRGNSDSFDYWGQGTLVTVSSLEGGGGSGGGGSGGGASDIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPWTFGQGTKLEIK。
18.如前述权利要求中任一项所述的CAR多肽，其中所述细胞内信号传导结构域包含共刺激信号传导区。
19.如前述权利要求中任一项所述的CAR多肽，其中所...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种嵌合抗原受体(car)多肽，其包含cd229抗原结合结构域、跨膜结构域和细胞内信号传导结构域，其中所述cd229结合结构域是seq id no:1的变体。
2.如权利要求1所述的car多肽，其中所述cd229抗原结合结构域包含序列qvqlvesggglvqpgrslrlscaasgftfddyamhwvrqapgkglewvsgiswnsgsigyadsakgrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycakrgnsnsqdywgqgtlvtvssleggggsggggsgggasdiqmtqspssvsasvgdrvtitcrasqsissylnwyqqkpgkapklliyaasslqsgvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyycqqsystpwtfgqgtkleikr。
3.如权利要求1所述的car多肽，其中所述cd229抗原结合结构域包含序列qvqlvesggglvqpgrslrlscaasgftfddyamhwvrqapgkglewvsgiswnsgsigyadsakgrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycakrdnsnsfdywgqgtlvtvssleggggsggggsgggasdiqmtqspssvsasvgdrvtitcrasqsissylnwyqqkpgkapklliyaasslqsgvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyycqqsystpwtfgqgtkleikr。
4.如权利要求1所述的car多肽，其中所述cd229抗原结合结构域包含图2所示的一个或多个氨基酸取代。
5.如前述权利要求中任一项所述的car多肽，其中所述cd229抗原结合结构域是与cd229特异性结合的抗体片段或抗原结合片段。
6.如前述权利要求中任一项所述的car多肽，其中所述cd229抗原结合结构域是特异性结合cd229的抗体的fab或单链可变片段(scfv)。
7.如前述权利要求中任一项所述的car多肽，其中所述cd229抗原结合结构域包含在seq id no:1的hcdr3中的一个或多个氨基酸取代。
8.如前述权利要求中任一项所述的car多肽，其中所述cd229抗原结合结构域包含含有序列akrdnsnsfdyw、akrgnensfdyw或akrgnsnsqdyw的hcdr3。
9.如前述权利要求中任一项所述的car多肽，其中变体cd229抗原结合结构域包含在2d3 scfv的lcdr3中的一个或多个氨基酸取代。
10.如前述权利要求中任一项所述的car多肽，其中所述cd229抗原结合结构域包含含有表2中的那些中的任一个的序列的lcdr3。
11.如前述权利要求中任一项所述的car多肽，其中所述cd229抗原结合结构域包含与seq id no:53、84或134所示序列具有至少90％同一性的序列，其中所述cd229抗原结合结构域在所述hcdr3处包含与seq id no:53、84或134的100％同一性。
12.如前述权利要求中任一项所述的car多肽，其中所述cd229抗原结合结构域包含重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包含：
13.如前述权利要求中任一项所述的car多肽，其中所述变体cd229抗原结合结构域包含含有表2的那些中的任一个的轻链免疫球蛋白可变区。
14.如前述权利要求中任一项所述的car多肽，其中所述cd229抗原结合结构域包含对cd229的改变的亲和力。
15.如权利要求14所述的car多肽，其中所述改变的亲和力是较低的亲和力。
16.如权利要求14所述的car多肽，其中所述改变的亲和力是高亲和力。
17.如权利要求16所述的car多肽，其中所述cd229抗原结合结构域包含序列qvqlvesggglvqpgrslrlscaasgftfddyamhwvrqapgkglewvsgiswnsgsigyadsakgrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycakrgnsdsfdywgqgtlvtvssleggggsggggsgggasdiqmtqspssvsasvgdrvtitcrasqsissylnwyqqkpgkapklliyaasslqsgvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyycqqsystpwtfgqgtkleik。
18.如前述权利要求中任一项所述的car多肽，其中所述细胞内信号传导结构域包含共刺激信号传导区。
19.如前述权利要求中任一项所述的car多肽，其中所述共刺激信号传导区包含选自以下的共刺激分子的胞质结构域：cd27、cd28、4-1bb、ox40、cd30、cd40、pd-1、icos、淋巴细胞功能相关抗原-1(lfa-1)、cd2、cd7、light、nkg2c、b7-h3、与cd83特异性结合的配体及其任何组合。
20.如前述权利要求中任一项所述的car多肽，其中所述细胞内信号传导结构域是t细胞信号传导结构域。
21.如前述权利要求中任一项所述的car多肽，其中所述细胞内信号传导结构域包含cd3 zeta(cd3ζ)信号传导结构域。
22.如前述权利要求中任一项所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：T·C·吕特肯斯，E·范德莫斯，D·阿塔纳科维奇，
申请(专利权)人：犹他大学研究基金会，
类型：发明
国别省市：
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