【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物检测，尤其涉及用于同时检测prv、ptv1和ss2的引物探针组及其试剂盒和检测方法。
技术介绍
1、猪伪狂犬病是由猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus，prv)感染引起的一种急性、高度传染性的疾病。prv属于疱疹科病毒1型，是一种双链线性dna病毒，基因组大小约为150kb。现有研究表明，不同日龄的猪都能感染prv，2周龄内仔猪的致死率可达100％，并伴有明显的神经症状。猪伪狂犬病传播迅速，全年均可发生，具有潜伏感染的特点，宿主会不断向外界排出病毒粒子，使得prv难以根除，导致该病持续存在。
2、猪捷申病毒(porcine teschovirus,ptv)是小rna病毒科肠道病毒属的一员，对养猪业造成重大危害。ptv的基因组全长约7.2kb，病毒粒子无囊膜，由内部核心和蛋白质衣壳组成，直径约20-30nm。迄今为止，已发现ptv有13个血清型，其中家猪中检出12种(ptv1-ptv12)，野猪中检出1种(ptv13)。猪捷申病毒1型是一种急性致死性猪传染病，可引起严重的中枢神经系统紊乱，亦称为捷申病毒脑脊髓炎(teschovirus encephalomyelitis)。该病症状多样，包括神经系统紊乱、繁殖障碍、肺炎、鼻炎、腹泻、心包炎、心肌炎和皮肤损伤等。
3、猪链球菌病是由多种猪链球菌(streptococcus suis，ss)引起的一种重要的人畜共患传染病。猪链球菌是一类革兰氏阳性兼性厌氧球菌，具有复杂的血清类型。根据荚膜多糖抗原(cps)的不同，猪链球菌可分为3
4、上述三种传染病其共同特征表现为神经特征，由于在群体养殖中多种病原共存成为一种常态，因此快速的进行筛查和精准判断病原成为当前兽医诊断中的重要瓶颈。为了在群体，特别是育肥阶段预判具有共性特征的不同病原引起的疫病，并采取个性化的处置措施，亟待开发新的、快速精准的诊断试剂及其方法。目前，现有的技术主要通过荧光pcr或普通pcr单独检测猪伪狂犬病病毒(prv)、猪捷申病毒1型(ptv1)和猪链球菌2型(ss2)。这些方法虽然能够有效检测单一病原体，但通常存在耗时长、成本高和操作复杂等问题。此外，单一检测方法难以应对混合感染的情况，无法满足临床实际需求。因此，亟需开发一种能够同时灵敏并特异检测prv、ptv1和ss2三种病毒的新方法。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种用于检测prv、ptv1和ss2的引物探针组及其试剂盒和检测方法。
2、为实现上述目的，本专利技术提供了如下技术方案：
3、首先，本专利技术提供了一种用于同时检测猪伪狂犬病病毒(prv)、猪捷申病毒1型(ptv1)和猪链球菌2型(ss2)的多重taqman荧光定量pcr的引物探针组合物，所述引物探针组合物包括：
4、prv-f：gcttccacgcgctcggcttc，
5、prv-r：cgggtggtagatgcagggct，
6、prv-p:fam-cgacctgatgccgcgcgtggtct-bhq1；
7、ptv1-f：ccttctgaaagacctgctctg；
8、ptv1-r：cagtcccattgcccagtc；
9、ptv1-p：vic-cttctgtaccctgtcgccaccattg-bhq1；
10、ss2-f：gatagatgacggttcttcagattc；
11、ss2-r：ccatttggtaaccggaaaagtt；
12、ss2-p：cy5-tctaccatcttgctctgcgtattcca-bhq2。
13、优选地，所述引物探针组合物用于多重taqman荧光定量pcr时，每种引物和探针的比例为4:1。
14、优选地，所述引物探针组合物所扩增的基因片段如seq id no.10,seq id no.11,seq id no.12所示。
15、其次，本专利技术提供了一种用于同时检测猪伪狂犬病病毒、猪捷申病毒1型和猪链球菌2型的多重taqman荧光定量pcr试剂盒，所述多重taqman荧光定量pcr试剂盒包括权利要求1所述的引物探针组合物。
16、优选地，所述多重taqman荧光定量pcr试剂盒的每20μl的反应体系为：
17、10μl 2×one step q probe mix，1μl one step q probe enzyme mix，0.2μlprv-f，0.2μl prv-r，0.1μl prv-p，0.2μl ptv1-f，0.2μl ptv1-r，0.1μlptv1-p，0.2μlss2-f，0.2μl ss2-r，0.1μl ss2-p，4μl待测样品总dna，3.5μlddh2o。
18、优选地，所述多重taqman荧光定量pcr试剂盒的反应条件为：55℃5min；95℃30s；95℃10s，60℃30s，40个循环。
19、优选地，所述多重taqman荧光定量pcr试剂盒用于样品检测时，pcr仪器同时采集fam、vic、和cy5三个通道的荧光值。
20、其次，本专利技术提供了一种用于同时检测猪伪狂犬病病毒、猪捷申病毒1型和猪链球菌2型的多重taqman荧光定量pcr检测方法，所述多重taqman荧光定量pcr检测方法用于非疾病诊断目的；
21、所述多重taqman荧光定量pcr检测方法包括如下步骤：
22、以待测样品的dna为模板，利用权利要求1所述的引物探针组合物进行多重taqman荧光定量pcr检测，根据检测结果判定待测样品prv、ptv1和ss2的存在情况和混合感染情况。
23、优选地，所述多重taqman荧光定量pcr检测方法的每20μl的反应体系为10μl 2×one step q probe mix，1μl one step q probe enzyme mix，0.2μlprv-f，0.2μl prv-r，0.1μl prv-p，0.2μl ptv1-f，0.2μl ptv1-r，0.1μlptv1-p，0.2μl ss2-f，0.2μl ss2-r，0.1μl ss2-p，4μl待测样品总dna，3.5μlddh2o。
24、优选地，所述多重taqman荧光定量pcr检测方法的反应条件为：55℃5min；95℃30s；95℃10s，60℃30s，40个循环本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于同时检测猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪捷申病毒1型(PTV1)和猪链球菌2型(SS2)的多重TaqMan荧光定量PCR的引物探针组合物，其特征在于，所述引物探针组合物包括：
2.根据权利要求1所述的一种用于同时检测猪伪狂犬病病毒、猪捷申病毒1型和猪链球菌2型的多重TaqMan荧光定量PCR的引物探针组合物，其特征在于，所述引物探针组合物用于多重TaqMan荧光定量PCR时，每种引物和探针的比例为4:1。
3.根据权利要求1所述的一种用于同时检测猪伪狂犬病病毒、猪捷申病毒1型和猪链球菌2型的多重TaqMan荧光定量PCR的引物探针组合物，其特征在于，所述引物探针组合物所扩增的基因片段如SEQ ID NO.10,SEQ ID NO.11,SEQ ID NO.12所示。
4.一种用于同时检测猪伪狂犬病病毒、猪捷申病毒1型和猪链球菌2型的多重TaqMan荧光定量PCR试剂盒，其特征在于，所述多重TaqMan荧光定量PCR试剂盒包括权利要求1所述的引物探针组合物。
5.根据权利要求4所述的一种用于同时检测猪伪狂犬病病毒、猪捷申病毒1
6.根据权利要求5所述的一种用于同时检测猪伪狂犬病病毒、猪捷申病毒1型和猪链球菌2型的多重TaqMan荧光定量PCR试剂盒，其特征在于，所述多重TaqMan荧光定量PCR试剂盒的反应条件为：55℃5min；95℃30s；95℃10s，60℃30s，40个循环。
7.根据权利要求6所述的一种用于同时检测猪伪狂犬病病毒、猪捷申病毒1型和猪链球菌2型的多重TaqMan荧光定量PCR试剂盒，其特征在于，所述多重TaqMan荧光定量PCR试剂盒用于样品检测时，PCR仪器同时采集FAM、VIC、和Cy5三个通道的荧光值。
8.一种用于同时检测猪伪狂犬病病毒、猪捷申病毒1型和猪链球菌2型的多重TaqMan荧光定量PCR检测方法，其特征在于，
9.根据权利要求8所述的一种用于同时检测猪伪狂犬病病毒、猪捷申病毒1型和猪链球菌2型的多重TaqMan荧光定量PCR检测方法，其特征在于，
10.根据权利要求9所述的一种用于同时检测猪伪狂犬病病毒、猪捷申病毒1型和猪链球菌2型的多重TaqMan荧光定量PCR检测方法，其特征在于，所述多重TaqMan荧光定量PCR检测方法的反应条件为：55℃5min；95℃30s；95℃10s，60℃30s，40个循环；
...【技术特征摘要】
1.一种用于同时检测猪伪狂犬病病毒(prv)、猪捷申病毒1型(ptv1)和猪链球菌2型(ss2)的多重taqman荧光定量pcr的引物探针组合物，其特征在于，所述引物探针组合物包括：
2.根据权利要求1所述的一种用于同时检测猪伪狂犬病病毒、猪捷申病毒1型和猪链球菌2型的多重taqman荧光定量pcr的引物探针组合物，其特征在于，所述引物探针组合物用于多重taqman荧光定量pcr时，每种引物和探针的比例为4:1。
3.根据权利要求1所述的一种用于同时检测猪伪狂犬病病毒、猪捷申病毒1型和猪链球菌2型的多重taqman荧光定量pcr的引物探针组合物，其特征在于，所述引物探针组合物所扩增的基因片段如seq id no.10,seq id no.11,seq id no.12所示。
4.一种用于同时检测猪伪狂犬病病毒、猪捷申病毒1型和猪链球菌2型的多重taqman荧光定量pcr试剂盒，其特征在于，所述多重taqman荧光定量pcr试剂盒包括权利要求1所述的引物探针组合物。
5.根据权利要求4所述的一种用于同时检测猪伪狂犬病病毒、猪捷申病毒1型和猪链球菌2型的多重taqman荧光定量pcr试剂盒，其特征在于，所述多重taqman荧光定量pcr试剂盒的每20μl的...
【专利技术属性】
技术研发人员：李孝文，来冉冉，杨晨，武利利，吴伟胜，于佃坤，李鲁鲁，闫征，
申请(专利权)人：巨野新好农牧有限公司，
类型：发明
国别省市：
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