【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及动物模型构建方法，尤其涉及一种慢性脑低灌注促进tau病理朊样传播的ad动物模型及其构建方法。
技术介绍
1、阿尔茨海默病(alzheimer′s disease，ad)是最常见的神经退行性疾病，主要表现为学习记忆功能障碍和认知功能减退等临床特征，其主要病理学特征为aβ沉积形成神经炎性斑块、tau蛋白异常磷酸化形成的神经原纤维缠结(neurofibrillary tangles，nfts)以及神经元缺失和胶质细胞增生等。临床与病理相关性研究发现nfts的数量与ad病人的痴呆程度呈正相关，而与淀粉斑数量无关。
2、临床上根据nft的数量、分布和扩散情况对ad进行病理诊断和分级，即braak分级。nft病理起始于蓝斑核、内嗅皮层移行区(braak i，ii级)，进而发展至边缘系统(braakiii，iv级)，最后侵袭新皮层(braakv，vi级)，显示出固定的进行模式。nft的主要成分是异常过度磷酸化的tau蛋白聚集而形成的双螺旋丝(pairedhelical filaments，phfs)。本课题组和其他研究者的结果显示，从ad患者脑中提取的寡聚体tau(ad o-tau)或体外表达重组tau蛋白经肝素诱导形成的聚集物，注射到小鼠脑中，均可诱发内源性tau蛋白发生病理性聚集；且tau病理能够沿关联脑区进行传播，其传播路径与ad患者脑中nft的固定传播模式一致；tau抗体治疗可有效降低ad模型小鼠中的tau病理及其传播，同时还能减轻aβ病理，改善小鼠认知能力。上述研究表明，tau病理传播是导致ad病程进展的关
3、虽然基因突变已被证明在ad病理中起着重要的作用，但99％的ad病例是散发性的，越来越多的研究支持环境风险因素也对ad的发生和发展有很大的影响。因此，现在一般认为，ad的发生是遗传因素与环境因素相互作用的结果。环境因素包含：老龄化、慢性炎症、脑血管疾病、糖尿病、慢性脑低灌注、中风等。尤其值得关注的是慢性脑低灌注可以显著增加ad的发病概率。大量临床研究表明，长期慢性脑低灌注会引发病人不同程度的痴呆，其在ad和vd等多种神经系统疾病的发生发展中起着重要的作用。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是为了解决现有技术中缺乏相关的动物模型的技术问题。
2、为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：
3、一种慢性脑低灌注促进tau病理朊样传播的ad动物模型的构建方法，首先制备uccao模型，一周之后，在同侧海马注射ad o-tau，获得慢性脑低灌注促进tau病理朊样传播的动物模型。
4、优选的，所述uccao模型选用7-8个月龄的tg/htau小鼠，uccao模型构建方法如下：使用七氟醚气体麻醉小鼠，剃除小鼠右侧颈部的毛发，放置于体式显微镜下，剪开颈部皮肤，分离并找出右侧颈总动脉，uccao组在距颈总动脉分叉约0.5cm处穿线并结扎，缝合颈部切口。
5、优选的，所述ad o-tau获得方法如下：
6、(1)加10倍体积的脑匀浆液至ad患者脑组织中，冰上匀浆；
7、(2)27000xg，4℃离心30min，转移上清至新的离心管；
8、(3)235000xg，4℃离心45min，沉淀即为ad o-tau。
9、优选的，沉淀获得的ad o-tau生理盐水洗沉淀3遍，然后用适量的生理盐水重悬沉淀，超声破碎沉淀，分装并-80℃保存
10、优选的，注射ad o-tau使用小鼠海马体立体定位注射，注射前先根据小鼠体重(0.16ml/10g)将浓度为2.5％的avertin经腹腔注射，麻醉小鼠。
11、优选的，ad o-tau注射位置为前囟向后2.5mm、向左/右旁开2.0mm、自硬膜向腹侧进针1.8mm。
12、优选的，根据海马坐标使用脑立体定位仪和31-gauge hamilton微量注射器注射ad o-tau 2μl，注射时间为2min，留针3min。
13、优选的，所述构建方法还包括行为学检测及病理学检测，其中，所述行为学检测在小鼠注射四周后进行，所述病理学检测在小鼠注射十周后进行。
14、优选的，所述行为学检测包括旷场实验及新物体识别；所述病理学检测包括脑组织蛋白质免疫印迹及脑组织免疫化学染色检测。
15、本申请还提供了一种慢性脑低灌注促进tau病理朊样传播的ad动物模型，使用上述所述的构建方法构建获得。
16、与现有技术相比，本申请中将慢性脑低灌注和tau病理朊样传播模型(海马注射ado-tau)相结合，建立一种可以用于研究慢性脑低灌注对tau病理朊样传播和认知功能障碍研究的动物模型，为下一步慢性脑低灌注引发ad发病机制研究和治疗策略探索提供动物模型。
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1.一种慢性脑低灌注促进tau病理朊样传播的AD动物模型的构建方法，其特征在于：首先制备UCCAO模型，一周之后，在同侧海马注射AD O-tau，获得慢性脑低灌注促进tau病理朊样传播的动物模型。
2.根据权利要求1所述的一种慢性脑低灌注促进促进tau病理朊样传播的AD动物模型的构建方法，其特征在于：所述UCCAO模型选用7-8个月龄的Tg/hTau小鼠，UCCAO模型构建方法如下：使用七氟醚气体麻醉小鼠，剃除小鼠右侧颈部的毛发，放置于体式显微镜下，剪开颈部皮肤，分离并找出右侧颈总动脉，UCCAO组在距颈总动脉分叉约0.5cm处穿线并结扎，缝合颈部切口。
3.根据权利要求2所述的一种慢行脑低灌注促进促进tau病理朊样传播的AD动物模型的构建方法，其特征在于：所述AD O-tau获得方法如下：
4.根据权利要求3所述的一种慢性脑低灌注促进促进tau病理朊样传播的AD动物模型的构建方法，其特征在于：沉淀获得的AD O-tau生理盐水洗沉淀3遍，然后用适量的生理盐水重悬沉淀，超声破碎沉淀，分装并-80℃保存。
5.根据权利要求1所述的一种
6.根据权利要求5所述的一种慢性脑低灌注促进促进tau病理朊样传播的AD动物模型的构建方法，其特征在于：AD O-tau注射位置为前囟向后2.5mm、向左/右旁开2.0mm、自硬膜向腹侧进针1.8mm。
7.根据权利要求6所述的一种慢性脑低灌注促进促进tau病理朊样传播的AD动物模型的构建方法，其特征在于：根据海马坐标使用脑立体定位仪和31-gauge Hamilton微量注射器注射AD O-tau 2μL，注射时间为2min，留针3min。
8.根据权利要求1所述的一种慢性脑低灌注促进促进tau病理朊样传播的AD动物模型的构建方法，其特征在于：所述构建方法还包括行为学检测及病理学检测，其中，所述行为学检测在小鼠注射四周后进行，所述病理学检测在小鼠注射十周后进行。
9.根据权利要求8所述的一种慢性脑低灌注促进促进tau病理朊样传播的AD动物模型的构建方法，其特征在于：所述行为学检测包括旷场实验及新物体识别；所述病理学检测包括脑组织蛋白质免疫印迹及脑组织免疫化学染色检测。
10.一种慢性脑低灌注促进tau病理朊样传播的AD动物模型，其特征在于：使用权利要求1-9任意一项所述的构建方法构建获得。
...【技术特征摘要】
1.一种慢性脑低灌注促进tau病理朊样传播的ad动物模型的构建方法，其特征在于：首先制备uccao模型，一周之后，在同侧海马注射ad o-tau，获得慢性脑低灌注促进tau病理朊样传播的动物模型。
2.根据权利要求1所述的一种慢性脑低灌注促进促进tau病理朊样传播的ad动物模型的构建方法，其特征在于：所述uccao模型选用7-8个月龄的tg/htau小鼠，uccao模型构建方法如下：使用七氟醚气体麻醉小鼠，剃除小鼠右侧颈部的毛发，放置于体式显微镜下，剪开颈部皮肤，分离并找出右侧颈总动脉，uccao组在距颈总动脉分叉约0.5cm处穿线并结扎，缝合颈部切口。
3.根据权利要求2所述的一种慢行脑低灌注促进促进tau病理朊样传播的ad动物模型的构建方法，其特征在于：所述ad o-tau获得方法如下：
4.根据权利要求3所述的一种慢性脑低灌注促进促进tau病理朊样传播的ad动物模型的构建方法，其特征在于：沉淀获得的ad o-tau生理盐水洗沉淀3遍，然后用适量的生理盐水重悬沉淀，超声破碎沉淀，分装并-80℃保存。
5.根据权利要求1所述的一种慢性脑低灌注促进促进tau病理朊样传播的ad动物模型的构建方法，其特征在于：注射ad o-tau使用小鼠海马体立体定位注射，注射前先根据小鼠体重(0...
【专利技术属性】
技术研发人员：靳娜娜，顾锦华，汪晗，张书强，许莲，施建华，
申请(专利权)人：南通市第一人民医院，
类型：发明
国别省市：
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