【技术实现步骤摘要】
本说明书涉及医药领域，特别涉及一种mc4r r165q点突变肥胖小鼠模型构建方法及其应用。
技术介绍
1、黑皮质素受体(melanocortin receptor，mcr)家族是g蛋白偶联受体，包括5个亚型(mc1r-mc5r)，其中，mc4r在脑内广泛表达，尤其是下丘脑室旁核(pvh)和下丘脑侧区(lh)。除了在脑部表达，mc4r在脊髓、肌肉、肝脏和交感神经系统等也有表达。人的mc4r基因定位在18号染色体上，编码332个氨基酸。在目前已知的所有单基因肥胖病因中，mc4r居于核心地位。不仅因为其突变频率在单基因肥胖中比例最高，临床异质性较高，与基因突变类型(激活突变、失活突变、功能激活或失活的程度)密切相关，而且作为一个膜受体，mc4r在“瘦素-黑皮质素”食欲调控通路中也居于中心位置，是较为理想的药物开发靶点。
2、2019年，farooqi等报道了英国生物银行(uk biobank)队列50万人中发现的61种mc4r点突变，对它们进行了功能鉴定，并将突变分为功能获得型突变(gof variant)、野生型类突变(wt-like variant)和功能失活型突变(lof variant)。r165q被鉴定为功能失活型突变。
3、目前，用于肥胖研究的小鼠模型主要有饮食诱导肥胖(diet-induced obesity，dio)、瘦素缺陷型(ob/ob)小鼠等。然而，dio小鼠需要一段时间高脂饲喂造模，试验周期较长，且一批小鼠中有一些无法喂胖。ob/ob小鼠具有早发极度肥胖的表型，但ob/ob小鼠育性差，繁
技术实现思路
1、本说明书一个或多个实施例提供一种mc4r r165q点突变肥胖小鼠构建方法。该方法包括：基于crispr-cas9基因编辑技术，将小鼠mc4r 165位的r突变为q，得到mc4r r165q点突变肥胖小鼠，所述小鼠呈现明显的早发性肥胖表型，且呈基因型依赖。
2、本说明书一个或多个实施例提供一种mc4r r165q点突变肥胖小鼠的构建方法。该方法基于crispr/cas9基于编辑技术，将小鼠的mc4r 165位的r突变为q，得到mc4r r165q点突变肥胖小鼠，包括：(1)选择小鼠mc4r基因的外显子1作为靶位点，将供体寡核苷酸中的p.r165q(cgg突变为cag)通过同源定向修复引入所述外显子1；(2)将cas9、grna和所述供体寡核苷酸共同通过显微注射的方式注射到受精卵中，其后将所述受精卵注射至代孕雌性小鼠；(3)获到f0代小鼠并鉴定基因型，得到所述mc4r r165q点突变肥胖小鼠模型。
3、本说明书一个或多个实施例提供一种mc4r r165q点突变肥胖小鼠模型在脂肪代谢研究中的应用。其中，相对野生型小鼠(wt组)，所述mc4r r165q点突变杂合子小鼠(he组)和纯合子小鼠(ho组)体重和摄食量增加，血清总胆固醇(tc)增加，脂肪细胞体积增大，肝脏脂肪变性增多。
4、本说明书一个或多个实施例提供一种mc4r r165q点突变肥胖小鼠模型在肥胖、高脂血症、胰岛素抵抗、糖尿病、非酒精性脂肪肝、代谢综合征等代谢性疾病生理生化过程的研究中的应用。其中，所述小鼠育性好，易繁殖，肥胖表型明显。
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1.一种MC4R R165Q点突变肥胖小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述方法包括：基于CRISPR-Cas9基因编辑技术，将小鼠MC4R 165位的R突变为Q，得到所述MC4R R165Q点突变肥胖小鼠，所述小鼠呈现明显的早发性肥胖表型，且呈基因型依赖。
2.如权利要求1所述的小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述基于CRISPR/Cas9基于编辑技术，将小鼠的MC4R 165位的R突变为Q，得到所述MC4R R165Q点突变肥胖小鼠，包括：
3.一种MC4R R165Q点突变肥胖小鼠模型在脂肪代谢研究中的应用，其中，相对野生型小鼠(WT组)，所述MC4R R165Q点突变杂合子小鼠(HE组)和纯合子小鼠(HO组)体重和摄食量增加，血清总胆固醇(TC)增加，脂肪细胞体积增大，肝脏脂肪变性增多。
4.一种MC4R R165Q点突变肥胖小鼠模型在肥胖、高脂血症、胰岛素抵抗、糖尿病、非酒精性脂肪肝、代谢综合征等代谢性疾病生理生化过程的研究中的应用，其中，所述小鼠育性好，易繁殖，肥胖表型明显。
【技术特征摘要】
1.一种mc4r r165q点突变肥胖小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述方法包括：基于crispr-cas9基因编辑技术，将小鼠mc4r 165位的r突变为q，得到所述mc4r r165q点突变肥胖小鼠，所述小鼠呈现明显的早发性肥胖表型，且呈基因型依赖。
2.如权利要求1所述的小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述基于crispr/cas9基于编辑技术，将小鼠的mc4r 165位的r突变为q，得到所述mc4r r165q点突变肥胖小鼠，包括：
<...【专利技术属性】
技术研发人员：王计秋，贾胜，宁光，刘瑞欣，李丹洁，
申请(专利权)人：上海市内分泌代谢病研究所，
类型：发明
国别省市：
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