【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本披露总体上涉及用于有效生产微细胞和蛋白质的工程化细菌细胞。本披露还涉及含有杀昆虫蛋白毒素pir和cry的杀昆虫微细胞的混合物，以及与其生产和使用相关的方法。本披露还涉及含有杀昆虫蛋白毒素pir的杀昆虫微细胞与bt衍生的活性成分的混合物，以及与其生产和使用相关的方法。
技术介绍
1、需要能够靶向细胞并递送生物药剂的递送载体。此外，需要将所述载体递送至细胞的方法，从而调节包括动物、植物和昆虫细胞、组织和生物体的生物系统。能够靶向细胞并递送生物药剂的递送载体是已知的，例如，从wo/2020123569。申请人希望含有此类递送载体的组合物能够提供改进的功效，包括例如其中的生物药剂的功效。
技术实现思路
1、本披露提供了用于从亲本细菌细胞(例如，大肠杆菌(e.coli)菌株)制造微细胞颗粒的组合物和方法，所述亲本细菌细胞具有各种基因突变以产生增加数量的微细胞颗粒。另外，提供了用于产生微细胞的亲本细胞的不同表达盒，其产生高水平的蛋白质表达。
2、几个实施例涉及制造包含多个微细胞的组合物的方法，所述微细胞基本上不含活的亲本细菌细胞，所述方法包括：(a)将表现出至少一种细胞分裂拓扑特异性因子的水平或活性降低的亲本细菌细胞群体暴露于允许形成微细胞的条件下，其中所述亲本细菌细胞缺乏参与dna修复的基因；以及(b)将微细胞与亲本细菌细胞分离，从而产生包含多个基本上不含活亲本细菌细胞的微细胞的组合物。在一些实施例中，细胞分裂拓扑特异性因子选自由minc、mind、mine和ftsz组成的组。
3、在一些方面中，提供了一种用于制造包含多个负载有蛋白质的微细胞的组合物的方法，所述组合物基本上不含活的亲本细菌细胞，所述方法包括：(a)将表现出至少一种细胞分裂拓扑特异性因子的水平或活性降低的亲本细菌细胞暴露于允许蛋白表达的条件下，其中所述亲本细菌细胞缺乏参与dna修复的基因；(b)将所述亲本细菌细胞暴露于允许形成微细胞的条件下；以及(c)将微细胞与亲本细胞分离，从而产生包含多个负载有蛋白质的微细胞的组合物，所述微细胞基本上不含活的亲本细菌细胞。在一些实施例中，亲本细菌细胞包含表达载体。在一些实施例中，表达载体编码一种或多种杀昆虫蛋白。在一些实施例中，编码蛋白的基因在t3、t7、k11或sp6的控制下表达。在一些实施例中，组合物包含每109个微细胞至少100ng蛋白。
4、几个实施例涉及组合物，其包含：(a)多个微细胞，其中所述微细胞衍生自多个亲本细菌细胞，所述亲本细菌细胞表现出至少一种细胞分裂拓扑特异性因子的水平或活性降低；以及(b)其中所述多个微细胞包含每109个微细胞至少100ng蛋白质。在一些实施例中，细胞分裂拓扑特异性因子选自由minc、mind、mine和ftsz组成的组。在一些实施例中，亲本细菌细胞还缺乏参与dna修复的基因。在一些实施例中，参与dna修复的基因选自由muts、muth、mutl、ssb、reca、recj、exoi、exovii、exox、uvrd、和dna聚合酶iii组成的组。在一些实施例中，参与dna修复的基因是reca。在一些实施例中，亲本细菌细胞包含t3、t7、k11或sp6聚合酶或编码t3、t7、k11或sp6聚合酶的核酸中的一种或多种。在一些实施例中，亲本细菌细胞包含t7聚合酶或编码t7聚合酶的核酸。在一些实施例中，细菌细胞是大肠杆菌dh10bδmincde。在一些实施例中，亲本细菌细胞包含表达载体。在一些实施例中，表达载体编码一种或多种杀昆虫蛋白(例如，pir、cry、bt等)。在一些实施例中，编码蛋白的基因在t3、t7、k11或sp6的控制下表达。在一些实施例中，组合物是农业组合物。在一些实施例中，农业组合物包含一种或多种异源杀昆虫剂。
5、在一些方面中，本披露提供了一种包含多个亲本细菌细胞的组合物，其中这些亲本细菌细胞(a)的至少一种细胞分裂拓扑特异性因子的水平或活性降低；(b)缺乏参与dna修复的基因；其中所述亲本细菌细胞产生每升亲本细菌细胞培养物至少1011个微细胞。在一些实施例中，参与dna修复的基因选自由muts、muth、mutl、ssb、reca、recj、exoi、exovii、exox、uvrd、和dna聚合酶iii组成的组。在一些实施例中，参与dna修复的基因是reca。在一些实施例中，细菌细胞是大肠杆菌dh10bδmincde。
6、几个实施例涉及含有递送载体和活性成分混合物的用于控制昆虫有害生物的组合物。还披露了用于减少总体损害、减少昆虫数量以及减少由昆虫引起的产率损失的方法。在许多实施例中，本文披露的组合物和方法表现出出人意料的良好杀昆虫活性。因此，在一些实施例中，本披露能够产生含有有效浓度的杀昆虫毒素pir(例如，pirab)的微细胞或含有有效浓度的杀昆虫毒素cry(例如，cry1ac)的微细胞。在许多实施例中，含有pir的微细胞和含有cry的微细胞的组合物产生杀死农业昆虫有害生物的协同效应。
7、在其他实施例中，本披露使得能够产生含有有效浓度的杀昆虫毒素pir(例如，pirab)的微细胞。本披露进一步使得能够产生含有这些微细胞和bt衍生的活性成分(例如，)的组合物。在许多实施例中，含有pir的微细胞和bt衍生的活性成分的组合物产生杀死农业昆虫有害生物的协同效应。
8、几个实施例涉及一种组合物，其包括：液体载剂相；以及分散在载剂相中的多个微细胞，其中所述多个微细胞包括第一微细胞和第二微细胞的混合物，所述第一微细胞包括第一有效量的包括pir的第一外源蛋白毒素，并且所述第二微细胞包括第二有效量的包括cry的第二外源蛋白毒素，其中第一有效量和第二有效量的存在比例范围为约50:1-1:50。在这一方面的一些实施例中，第一有效量与第二有效量的存在比例为约46:1、23:1、11:1、9:1、6:1、5:1、3:1或1:1。在这一方面的进一步实施例(其可与前述实施例中的任一项组合)中，当将组合物施用于昆虫有害生物时，第一有效量和第二有效量的混合物对于控制至少一种昆虫有害生物具有协同效应，所述协同效应超过了当将第一有效量或第二有效量施用于昆虫有害生物时，单独的第一有效量对控制至少一种昆虫有害生物的效应和单独的第二有效量对控制至少一种昆虫有害生物的效应。在这一方面的其他实施例(其可与前述实施例中的任一项组合)中，第一微细胞的第一颗粒本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种组合物，其包含：
2.如权利要求1所述的组合物，其中所述第一有效量与所述第二有效量的存在比例为约46:1、23:1、11:1、9:1、6:1、5:1、3:1或1:1。
3.如权利要求1或权利要求2所述的组合物，其中当将所述组合物施用于所述昆虫有害生物时，所述第一有效量和所述第二有效量的混合物对于控制至少一种昆虫有害生物具有协同效应，所述协同效应超过了当将所述第一有效量或所述第二有效量施用于所述昆虫有害生物时，单独的所述第一有效量对控制至少一种昆虫有害生物的效应和单独的所述第二有效量对控制至少一种昆虫有害生物的效应。
4.如权利要求1-3中任一项所述的组合物，其中所述第一微细胞的第一颗粒浓度在约1x 102至约8x 1014的范围内，并且其中所述第二微细胞的第二颗粒浓度在约1x 102至约8x1014的范围内。
5.如权利要求1-4中任一项所述的组合物，其中将所述组合物施用给所述昆虫有害生物包含选自由以下组成的组的施用方法：将所述组合物递送至所述昆虫有害生物以供其摄食；使所述昆虫有害生物与所述组合物接触；将所述组合物递送至所述
6.如权利要求5所述的组合物，其中所述组合物作为叶面处理、注射处理、出苗前处理、和出苗后处理中的至少一种应用于所述植物。
7.如权利要求1-6中任一项所述的组合物，其中将所述组合物配制为以下中的至少一种：即用型(RTU)配制品、悬浮液浓缩物、罐混合物、气溶胶、种子处理剂、浸根剂、土壤处理剂、灌溉配制品、喷洒配制品、和浸泡处理剂。
8.如权利要求1-7中任一项所述的组合物，其中所述第一外源蛋白毒素包含PirAB或其功能组分。
9.如权利要求8所述的组合物，其中PirAB包含选自由以下组成的组的PirA：SEQ IDNO:143、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:147、SEQ ID NO:154、SEQ ID NO:157、SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:164、SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:167、SEQ ID NO:168、SEQ IDNO:169、SEQ ID NO:170、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:174、SEQ ID NO:174、SEQ ID NO:186、SEQ ID NO:190、SEQ ID NO:192、SEQ ID NO:197、SEQ ID NO:199、SEQ ID NO:202和SEQ IDNO:203；和选自由以下组成的组的PirB：SEQ ID NO:144、SEQ ID NO:145、SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:149、SEQ ID NO:150、SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:159、SEQ IDNO:160、SEQ ID NO:162、SEQ ID NO:166、SEQ ID NO:172、SEQ ID NO:177、SEQ ID NO:178、SEQ ID NO:179、SEQ ID NO:180、SEQ ID NO:181、SEQ ID NO:182、SEQ ID NO:183、SEQ IDNO:184、SEQ ID NO:185、SEQ ID NO:187、SEQ ID NO:188、SEQ ID NO:189、SEQ ID NO:191、SEQ ID NO:193、SEQ ID NO:194、SEQ ID NO:195、SEQ ID NO:196、SEQ ID NO:198、SEQ IDNO:201和SEQ ID NO:204，或其任一个的功能组分。
10.如权利要求9所述的组合物，其中PirAB包含含有SEQ ID NO:203的PirA和含有SEQID NO:204的PirB，或者其中PirAB包含含有SEQ ID NO:197的PirA和含有SEQ ID NO:178的PirB。
11.如权利要求1-10中任一项所述的组合物，其中所述第二外源蛋白毒素包含Cry1A、Cry1B、Cry1C、Cry1D、Cry1E、Cry1F、Cry1G、Cry1H、Cry1I、Cry1J或Cry1K或其功能组分。
12.如权利要求11所述的组合物，其中所述Cry1A包含选自由以下组成的组的Cry1A：SEQ ID NO:105、SEQ ID NO:106、SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:108、SEQ ID NO:109、SEQ IDNO:110、SEQ ID NO:111...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种组合物，其包含：
2.如权利要求1所述的组合物，其中所述第一有效量与所述第二有效量的存在比例为约46:1、23:1、11:1、9:1、6:1、5:1、3:1或1:1。
3.如权利要求1或权利要求2所述的组合物，其中当将所述组合物施用于所述昆虫有害生物时，所述第一有效量和所述第二有效量的混合物对于控制至少一种昆虫有害生物具有协同效应，所述协同效应超过了当将所述第一有效量或所述第二有效量施用于所述昆虫有害生物时，单独的所述第一有效量对控制至少一种昆虫有害生物的效应和单独的所述第二有效量对控制至少一种昆虫有害生物的效应。
4.如权利要求1-3中任一项所述的组合物，其中所述第一微细胞的第一颗粒浓度在约1x 102至约8x 1014的范围内，并且其中所述第二微细胞的第二颗粒浓度在约1x 102至约8x1014的范围内。
5.如权利要求1-4中任一项所述的组合物，其中将所述组合物施用给所述昆虫有害生物包含选自由以下组成的组的施用方法：将所述组合物递送至所述昆虫有害生物以供其摄食；使所述昆虫有害生物与所述组合物接触；将所述组合物递送至所述昆虫有害生物生长、生活、繁殖、进食或侵染的至少一个生境；以及将所述组合物应用于植物。
6.如权利要求5所述的组合物，其中所述组合物作为叶面处理、注射处理、出苗前处理、和出苗后处理中的至少一种应用于所述植物。
7.如权利要求1-6中任一项所述的组合物，其中将所述组合物配制为以下中的至少一种：即用型(rtu)配制品、悬浮液浓缩物、罐混合物、气溶胶、种子处理剂、浸根剂、土壤处理剂、灌溉配制品、喷洒配制品、和浸泡处理剂。
8.如权利要求1-7中任一项所述的组合物，其中所述第一外源蛋白毒素包含pirab或其功能组分。
9.如权利要求8所述的组合物，其中pirab包含选自由以下组成的组的pira：seq idno:143、seq id no:146、seq id no:147、seq id no:154、seq id no:157、seq id no:161、seq id no:163、seq id no:164、seq id no:165、seq id no:167、seq id no:168、seq idno:169、seq id no:170、seq id no:171、seq id no:174、seq id no:174、seq id no:186、seq id no:190、seq id no:192、seq id no:197、seq id no:199、seq id no:202和seq idno:203；和选自由以下组成的组的pirb：seq id no:144、seq id no:145、seq id no:148、seq id no:149、seq id no:150、seq id no:153、seq id no:158、seq id no:159、seq idno:160、seq id no:162、seq id no:166、seq id no:172、seq id no:177、seq id no:178、seq id no:179、seq id no:180、seq id no:181、seq id no:182、seq id no:183、seq idno:184、seq id no:185、seq id no:187、seq id no:188、seq id no:189、seq id no:191、seq id no:193、seq id no:194、seq id no:195、seq id no:196、seq id no:198、seq idno:201和seq id no:204，或其任一个的功能组分。
10.如权利要求9所述的组合物，其中pirab包含含有seq id no:203的pira和含有seqid no:204的pirb，或者其中pirab包含含有seq id no:197的pira和含有seq id no:178的pirb。
11.如权利要求1-10中任一项所述的组合物，其中所述第二外源蛋白毒素包含cry1a、cry1b、cry1c、cry1d、cry1e、cry1f、cry1g、cry1h、cry1i、cry1j或cry1k或其功能组分。
12.如权利要求11所述的组合物，其中所述cry1a包含选自由以下组成的组的cry1a：seq id no:105、seq id no:106、seq id no:107、seq id no:108、seq id no:109、seq idno:110、seq id no:111、seq id no:112、seq id no:113、seq id no:114、seq id no:115、seq id no:151、seq id no:152和seq id no:205；所述cry1b包含选自由以下组成的组的cry1b：seq id no:117、seq id no:118、seq id no:119、seq id no:120、seq id no:121、seq id no:122和seq id no:155；所述cry1c包含选自由以下组成的组的cry1c：seq idno:123、seq id no:124、seq id no:125和seq id no:156；所述cry1d包含选自由以下组成的组的cry1d：seq id no:126、seq id no:127、seq id no:175和seq id no:176；所述cry1e包含选自由以下组成的组的cry1e：seq id no:128和seq id no:129；所述cry1f包含选自由以下组成的组的cry1f：seq id no:130和seq id no:131；所述cry1g包含选自由以下组成的组的cry1g：seq id no:132和seq id no:133；所述cry1h包含选自由以下组成的组的cry1h：seq id no:134和seq id no:135；所述cry1i包含选自由以下组成的组的cry1i：seq id no:136、seq id no:137、seq id no:138和seq id no:139；所述cry1j包含选自由以下组成的组的cry1j：seq id no:140和seq id no:141；或者所述cry1k包含seqid no:142，或其任一个的功能组分。
13.如权利要求11或权利要求12所述的组合物，其中所述第二外源蛋白毒素包含含有seq id no:205的cry1a。
14.如权利要求1-13中任一项所述的组合物，其中所述第一微细胞包含第一载体，所述第一载体包含所述第一外源蛋白毒素的编码序列。
15.如权利要求14所述的组合物，其中所述第一载体包含clodf复制起点或pmb1复制起点。
16.如权利要求14或权利要求15所述的组合物，其中所述第一外源蛋白毒素的编码序列可操作地连接至第一启动子。
17.如权利要求16所述的组合物，其中所述第一启动子是诱导型启动子或组成型启动子。
18.如权利要求17所述的组合物，其中所述诱导型启动子包含ptac、ptet或pt7。
19.如权利要求17所述的组合物，其中所述组成型启动子包含j23119(seq id no:200)。
20.如权利要求14-19中任一项所述的组合物，其中所述第一外源蛋白毒素包含pirab，其中pirab包括包含seq id no:203的pira和包含seq id no:204的pirb，并且其中所述pira的编码序列包含seq id no:102，并且所述pirb的编码序列包含seq id no:103。
21.如权利要求14-18和20中任一项所述的组合物，其中所述第一外源蛋白毒素的表达是用atc或iptg诱导的。
22.如权利要求1-21中任一项所述的组合物，其中所述第二微细胞包含第二载体，所述第二载体包含所述第二外源蛋白毒素的编码序列。
23.如权利要求22所述的组合物，其中所述第二载体包含clodf复制起点或pmb1复制起点。
24.如权利要求22或权利要求23所述的组合物，其中所述第二外源蛋白毒素的编码序列可操作地连接至第二启动子。
25.如权利要求24所述的组合物，其中所述第二启动子是诱导型启动子或组成型启动子。
26.如权利要求25所述的组合物，其中所述诱导型启动子包含ptac、ptet或pt7。
27.如权利要求25所述的组合物，其中所述组成型启动子包含j23119(seq id no:200)。
28.如权利要求22-27中任一项所述的组合物，其中所述第二外源蛋白毒素包含cry1a，其中所述cry1a包含seq id no:205，并且其中所述cry1a的编码序列包含seq id no:104。
29.如权利要求22-26和28中任一项所述的组合物，其中所述第二外源蛋白毒素的表达是用atc或iptg诱导的。
30.如权利要求3-29中任一项所述的组合物，其中控制包含以下中的至少一个：
31.如权利要求30所述的组合物，其中
32.如权利要求3-31中任一项所述的组合物，其中控制包含至少约55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％的观察到的昆虫有害生物死亡率。
33.如权利要求1-32中任一项所述的组合物，其进一步包含农用化学表面活性剂，其中所述农用化学表面活性剂改善以下特征中的至少一种：喷雾性、铺展性、和可注射性。
34.如权利要求1-33中任一项所述的组合物，其中所述液体载剂相是水性或油性的。
35.如权利要求3-34中任一项所述的组合物，其中所述至少一种昆虫有害生物选自由以下组成的组：小菜蛾(dbm)、地老虎、草地贪夜蛾(faw)、赤拟谷盗(rfb)、科罗拉多马铃薯甲虫(cpb)、地中海粉螟、亚洲斑点螟蛉、鳞翅目属物种、鞘翅目属物种和双翅目属物种。
36.一种组合物，其包含：
37.如权利要求36所述的组合物，其中所述第一有效量与所述第二有效量的存在比例为约46:1、23:1、11:1、9:1、6:1、5:1、3:1或1:1。
38.如权利要求36或权利要求37所述的组合物，其中当将所述组合物施用于所述昆虫有害生物时，所述第一有效量和所述第二有效量组合起来对于控制至少一种昆虫有害生物具有协同效应，所述协同效应超过了当将所述组合物施用于所述昆虫有害生物时，单独的所述第一有效量对控制至少一种昆虫有害生物的效应和单独的所述第二有效量对控制至少一种昆虫有害生物的效应。
39.一种控制昆虫有害生物的方法，所述方法包括：
40.如权利要求39所述的方法，其中将所述组合物施用给所述昆虫有害生物包含选自由以下组成的组的施用方法：将所述组合物递送至所述昆虫有害生物以供其摄食；使所述昆虫有害生物与所述组合物接触；将所述组合物递送至所述昆虫有害生物生长、生活、繁殖、进食或侵染的至少一个生境；以及将所述组合物应用于植物。
41.如权利要求40所述的方法，其中所述组合物作为叶面处理、注射处理、出苗前处理、和出苗后处理中的至少一种应用于所述植物。
42.如权利要求39-41中任一项所述的方法，其中将所述组合物配制为以下中的至少一种：即用型(rtu)配制品、悬浮液浓缩物、罐混合物、气溶胶、种子处理剂、浸根剂、土壤处理剂、灌溉配制品、喷洒配制品、或浸泡处理剂。
43.如权利要求39-42中任一项所述的方法，其中控制包含以下中的至少一个：
44.如权利要求43所述的方法，其中
45.如权利要求39-44中任一项所述的方法，其中控制包含在所述植物上观察到的昆虫有害生物死亡率为约55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％。
46.如权利要求39-45中任一项所述的方法，其中所述有害生物选自由以下组成的组：小菜蛾(dbm)、地老虎、草地贪夜蛾(faw)、赤拟谷盗(rfb)、科罗拉多马铃薯甲虫(cpb)、地中海粉螟、亚洲斑点螟蛉、鳞翅目属物种、鞘翅目属物种和双翅目属物种。
47.一种可湿性粉剂，其包含：
48.如权利要求47所述的可湿性粉剂，其中所述第一有效量与所述第二有效量的存在比例为约46:1、23:1、11:1、9:1、6:1、5:1、3:1或1:1。
49.如权利要求47或权利要求48所述的可湿性粉剂，其中当将所述组合物施用于所述昆虫有害生物时，所述第一有效量和所述第二有效量的混合物对于控制至少一种昆虫有害生物具有协同效应，所述协同效应超过了当将所述第一有效量或所述第二有效量施用于所述昆虫有害生物时，单独的所述第一有效量对控制至少一种昆虫有害生物的效应和单独的所述第二有效量对控制至少一种昆虫有害生物的效应。
50.如权利要求47-49中任一项所述的可湿性粉剂，其中所述第一微细胞的第一颗粒浓度在约1x 102至约8x 1014的范围内，并且其中所述第二微细胞的第二颗粒浓度在约1x 102至约8x 1014的范围内。
51.如权利要求47-50中任一项所述的可湿性粉剂，其进一步包含农业化学上可接受的固体载剂组分，其包含以下中的至少一种：粘土组分、高岭土组分、滑石组分、白垩组分、方解石组分、石英组分、浮石组分、硅藻土组分、蛭石组分、硅酸盐组分、二氧化硅组分、二氧化硅粉剂组分、铝组分、硫酸铵组分、磷酸铵组分、碳酸钙组分、尿素组分、糖组分、淀粉组分、锯末组分、研磨的椰子壳组分、研磨的玉米芯组分、以及研磨的烟草秆组分。
52.如权利要求47-51中任一项所述的可湿性粉剂，其中所述水性载剂包含水。
53.如权利要求47-52中任一项所述的可湿性粉剂，其中将所述组合物施用给所述昆虫有害生物包含选自由以下组成的组的施用方法：将所述组合物递送至所述昆虫有害生物以供其摄食；使所述昆虫与所述组合物接触；将所述组合物递送至所述昆虫有害生物生长、生活、繁殖、进食或侵染的至少一个生境；以及将所述组合物应用于植物。
54.如权利要求53所述的组合物，其中所述组合物作为叶面处理、注射处理、出苗前处理、和出苗后处理中的至少一种应用于所述植物。
55.如权利要求47-54中任一项所述的组合物，其中所述第一外源蛋白毒素包含pirab或其功能组分。
56.如权利要求55所述的组合物，其中pirab包含选自由以下组成的组的pira：seq idno:143、seq id no:146、seq id no:147、seq id no:154、seq id no:157、seq id no:161、seq id no:163、seq id no:164、seq id no:165、seq id no:167、seq id no:168、seq idno:169、seq id no:170、seq id no:171、seq id no:174、seq id no:174、seq id no:186、seq id no:190、seq id no:192、seq id no:197、seq id no:199、seq id no:202和seq idno:203；和选自由以下组成的组的pirb：seq id no:144、seq id no:145、seq id no:148、seq id no:149、seq id no:150、seq id no:153、seq id no:158、seq id no:159、seq idno:160、seq id no:162、seq id no:166、seq id no:172、seq id no:177、seq id no:178、seq id no:179、seq id no:180、seq id no:181、seq id no:182、seq id no:183、seq idno:184、seq id no:185、seq id no:187、seq id no:188、seq id no:189、seq id no:191、seq id no:193、seq id no:194、seq id no:195、seq id no:196、seq id no:198、seq idno:201和seq id no:204，或其任一个的功能组分。
57.如权利要求56所述的组合物，其中pirab包含含有seq id no:203的pira和含有seqid no:204的pirb，或者其中pirab包含含有seq id no:197的pira和含有seq id no:178的pirb。
58.如权利要求47-57中任一项所述的组合物，其中所述第二外源蛋白毒素包含cry1a、cry1b、cry1c、cry1d、cry1e、cry1f、cry1g、cry1h、cry1i、cry1j或cry1k或其功能组分。
59.如权利要求58所述的组合物，其中所述cry1a包含选自由以下组成的组的cry1a：seq id no:105、seq id no:106、seq id no:107、seq id no:108、seq id no:109、seq idno:110、seq id no:111、seq id no:112、seq id no:113、seq id no:14、seq id no:115、seq id no:151、seq id no:152和seq id no:205；所述cry1b包含选自由以下组成的组的cry1b：seq id no:117、seq id no:118、seq id no:119、seq id no:120、seq id no:121、seq id no:122和seq id no:155；所述cry1c包含选自由以下组成的组的cry1c：seq idno:123、seq id no:124、seq id no:125和seq id no:156；所述cry1d包含选自由以下组成的组的cry1d：seq id no:126、seq id no:127、seq id no:175和seq id no:176；所述cry1e包含选自由以下组成的组的cry1e：seq id no:128和seq id no:129；所述cry1f包含选自由以下组成的组的cry1f：seq id no:130和seq id no:131；所述cry1g包含选自由以下组成的组的cry1g：seq id no:132和seq id no:133；所述cry1h包含选自由以下组成的组的cry1h：seq id no:134和seq id no:135；所述cry1i包含选自由以下组成的组的cry1i：seq id no:136、seq id no:137、seq id no:138和seq id no:139；所述cry1j包含选自由以下组成的组的cry1j：seq id no:140和seq id no:141；或者所述cry1k包含seqid no:142，或其任一个的功能组分。
60.如权利要求59所述的组合物，其中所述第二外源蛋白毒素包含含有seq id no:205的cry1a。
61.如权利要求47-60中任一项所述的组合物，其中控制包含以下中的至少一个：
62.如权利要求61所述的组合物，其中
63.如权利要求47-62中任一项所述的组合物，其中控制包含至少约55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％的观察到的昆虫有害生物死亡率。
64.如权利要求47-63中任一项所述的组合物，其中所述至少一种昆虫有害生物选自由以下组成的组：小菜蛾(dbm)、地老虎、草地贪夜蛾(faw)、赤拟谷盗(rfb)、科罗拉多马铃薯甲虫(cpb)、地中海粉螟、亚洲斑点螟蛉、鳞翅目属物种、鞘翅目属物种和双翅目属物种。
65.一种生产可湿性粉剂的方法，所述方法包括：
66.如权利要求65所述的方法，其中所述第一有效量与所述第二有效量以约46:1、23:1、11:1、9:1、6:1、5:1、3:1或1:1的比例混合。
67.一种可种植组合物，其包含：
68.如权利要求67所述的可种植组合物，其中所述第一有效量与所述第二有效量的存在比例为约46:1、23:1、11:1、9:1、6:1、5:1、3:1或1:1。
69.如权利要求67或权利要求68所述的可种植组合物，其中当将所述组合物施用于所述昆虫有害生物时，所述第一有效量和所述第二有效量的混合物对于控制至少一种昆虫有害生物具有协同效应，所述协同效应超过了当将所述第一有效量或所述第二有效量施用于所述昆虫有害生物时，单独的所述第一有效量对控制至少一种昆虫有害生物的效应和单独的所述第二有效量对控制至少一种昆虫有害生物的效应。
70.如权利要求67-69中任一项所述的可种植组合物，其中所述第一微细胞的第一颗粒浓度在约1x 102至约8x 1014的范围内，并且其中所述第二微细胞的第二颗粒浓度在约1x102至约8x 1014的范围内。
71.如权利要求67-70中任一项所述的可种植组合物，其中所述第一外源蛋白毒素包含pirab或其功能组分。
72.如权利要求71所述的可种植组合物，其中pirab包含选自由以下组成的组的pira：seq id no:143、seq id no:146、seq id no:147、seq id no:154、seq id no:157、seq idno:161、seq id no:163、seq id no:164、seq id no:165、seq id no:167、seq id no:168、seq id no:169、seq id no:170、seq id no:171、seq id no:174、seq id no:174、seq idno:186、seq id no:190、seq id no:192、seq id no:197、seq id no:199、seq id no:202和seq id no:203；和选自由以下组成的组的pirb：seq id no:144、seq id no:145、seq idno:148、seq id no:149、seq id no:150、seq id no:153、seq id no:158、seq id no:159、seq id no:160、seq id no:162、seq id no:166、seq id no:172、seq id no:177、seq idno:178、seq id no:179、seq id no:180、seq id no:181、seq id no:182、seq id no:183、seq id no:184、seq id no:185、seq id no:187、seq id no:188、seq id no:189、seq idno:191、seq id no:193、seq id no:194、seq id no:195、seq id no:196、seq id no:198、seq id no:201和seq id no:204，或其任一个的功能组分。
73.如权利要求72所述的可种植组合物，其中pirab包含含有seq id no:203的pira和含有seq id no:204的pirb，或者其中pirab包含含有seq id no:197的pira和含有seq idno:178的pirb。
74.如权利要求67-73中任一项所述的可种植组合物，其中所述第二外源蛋白毒素包含cry1a、cry1b、cry1c、cry1d、cry1e、cry1f、cry1g、cry1h、cry1i、cry1j或cry1k或其功能组分。
75.如权利要求74所述的可种植组合物，其中所述cry1a包含选自由以下组成的组的cry1a：seq id no:105、seq id no:106、seq id no:107、seq id no:108、seq id no:109、seq id no:110、seq id no:111、seq id no:112、seq id no:113、seq id no:114、seq idno:115、seq id no:151、seq id no:152和seq id no:205；所述cry1b包含选自由以下组成的组的cry1b：seq id no:117、seq id no:118、seq id no:119、seq id no:120、seq idno:121、seq id no:122和seq id no:155；所述cry1c包含选自由以下组成的组的cry1c：seq id no:123、seq id no:124、seq id no:125和seq id no:156；所述cry1d包含选自由以下组成的组的cry1d：seq id no:126、seq id no:127、seq id no:175和seq id no:176；所述cry1e包含选自由以下组成的组的cry1e：seq id no:128和seq id no:129；所述cry1f包含选自由以下组成的组的cry1f：seq id no:130和seq id no:131；所述cry1g包含选自由以下组成的组的cry1g：seq id no:132和seq id no:133；所述cry1h包含选自由以下组成的组的cry1h：seq id no:134和seq id no:135；所述cry1i包含选自由以下组成的组的cry1i：seq id no:136、seq id no:137、seq id no:138和seq id no:139；所述cry1j包含选自由以下组成的组的cry1j：seq id no:140和seq id no:141；或者所述cry1k包含seqid no:142，或其任一个的功能组分。
76.如权利要求75所述的可种植组合物，其中所述第二外源蛋白毒素包含含有seq idno:205的cry1a。
77.如权利要求67-76中任一项所述的可种植组合物，其中所述至少一种昆虫有害生物选自由以下组成的组：小菜蛾(dbm)、地老虎、草地贪夜蛾(faw)、赤拟谷盗(rfb)、科罗拉多马铃薯甲虫(cpb)、地中海粉螟、亚洲斑点螟蛉、鳞翅目属物种、鞘翅目属物种和双翅目属物种。
78.如权利要求67-77中任一项所述的可种植组合物，其中所述种子来自选自由以下组成的组的植物：苜蓿、扁桃、苹果、杏、朝鲜蓟、芦笋、牛油果、香蕉、大麦、豆类、蓝莓、蔓越莓、巴西坚果、可可、四季桔、油菜籽、波兰油菜籽、西兰花、羽衣甘蓝、卷心菜、芜菁、康乃馨、胡萝卜、腰果、木薯、芹菜、樱桃、板栗、鹰嘴豆、菊苣、辣椒、菊花、香橼、椰子、咖啡、棉花、豇豆、蚕豆、黄瓜、黑醋栗、醋栗、椰枣、浮萍、茄子、接骨木浆果、桉树、亚麻、天竺葵、姜、参、柚子、葡萄、番石榴、榛子、麻、大麻、啤酒花、辣根、鸢尾、菠萝蜜、奇异果、金橘、柠檬、扁豆、莴苣、酸橙、荔枝、澳洲坚果、玉蜀黍、柑橘、芒果、山竹、瓜类植物、小米、燕麦、油棕、秋葵、橄榄、洋葱、橙子、木瓜、防风草、百香果、胡桃、桃、油桃、梨、豌豆、花生、牡丹、柿子、矮牵牛、菠萝、开心果、大蕉、李子、一品红、柚、白杨、土豆、西葫芦、南瓜、桲、覆盆子、大黄、稻、玫瑰、橡胶、黑麦、红花、小蜜柑、芝麻籽、高粱、酸橙、刺果番荔枝、大豆、草莓、甜菜、甘蔗、向日葵、甘薯、罗望子、橘子、茶、烟草、粘果酸浆、番茄、郁金香、核桃、西瓜、小麦、和山药。
79.一种组合物，其包含：
80.如权利要求79所述的组合物，其中所述第一有效量与所述第二有效量的存在比例为约23:1、22:1、11:1、6:1、3:1、2:1或1.5:1。
81.如权利要求79或权利要求80所述的组合物，其中当将所述组合物施用于所述昆虫有害生物时，所述第一有效量和所述第二有效量的混合物对于控制至少一种昆虫有害生物具有协同效应，所述协同效应超过了当将所述第一有效量或所述第二有效量施用于所述昆虫有害生物时，单独的所述第一有效量对控制至少一种昆虫有害生物的效应和单独的所述第二有效量对控制至少一种昆虫有害生物的效应。
82.如权利要求79-81中任一项所述的组合物，其中所述微细胞的颗粒浓度在约1x 102至约8x 1014的范围内。
83.如权利要求79-82中任一项所述的组合物，其中所述bt衍生的ai包含苏云金芽孢杆菌、其发酵固体、其孢子和其杀昆虫毒素中的至少一种。
84.如权利要求83所述的组合物，其中所述bt衍生的ai包含苏云金芽孢杆菌、其发酵固体、其孢子及其杀昆虫毒素中的至少两种、至少三种或全部。
85.如权利要求79-84中任一项所述的组合物，其中将所述组合物施用给所述昆虫有害生物包含选自由以下组成的组的施用方法：将所述组合物递送至所述昆虫有害生物以供其摄食；使所述昆虫有害生物与所述组合物接触；将所述组合物递送至所述昆虫有害生物生长、生活、繁殖、进食或侵染的至少一个生境；以及将所述组合物应用于植物。
86.如权利要求85所述的组合物，其中所述组合物作为叶面处理、注射处理、出苗前处理、和出苗后处理中的至少一种应用于所述植物。
87.如权利要求79-86中任一项所述的组合物，其中所述组合物被配制为即用型(rtu)配制品、悬浮液浓缩物、罐混合物、气溶胶、种子处理剂、浸根剂、土壤处理剂、灌溉配制品、喷洒配制品、浸泡处理剂、尘剂、乳化型浓缩物、流动型浓缩物、配制品中间体、颗粒配制品、浸渍材料配制品、粒状/片状配制品、可溶性浓缩物配制品、技术化学配制品、水分散性颗粒配制品、水溶性包装配制品或可湿性粉剂配制品中的至少一种。
88.如权利要求79-87中任一项所述的组合物，其中所述外源蛋白毒素包含pirab或其功能组分。
89.如权利要求88所述的组合物，其中pirab包含选自由以下组成的组的pira：seq idno:4、seq id no:6、seq id no:8、seq id no:10、seq id no:12、seq id no:14、seq idno:16、seq id no:17、seq id no:18、seq id no:19、seq id no:20、seq id no:21、seq idno:22、seq id no:23、seq id no:24、seq id no:25、seq id no:26、seq id no:27、seq idno:28、seq id no:29、seq id no:30、seq id no:31和seq id no:32；和选自由以下组成的组的pirb：seq id no:5、seq id no:7、seq id no:9、seq id no:11、seq id no:13、seq idno:15、seq id no:33、seq id no:34、seq id no:35、seq id no:36、seq id no:37、seq idno:38、seq id no:39、seq id no:40、seq id no:41、seq id no:42、seq id no:43、seq idno:44、seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47、seq id no:48、seq id no:49、seq idno:50、seq id no:51、seq id no:52、seq id no:53、seq id no:54、seq id no:55、seq idno:56、seq id no:57和seq id no:58，或其任一个的功能组分。
90.如权利要求89所述的组合物，其中pirab包含含有seq id no:4的pira和含有seqid no:5的pirb，或者其中pirab包含含有seq id no:6的pira和含有seq id no:7的pirb。
91.如权利要求88所述的组合物，其中pirab包含选自由以下组成的组的pira：seq idno:4、seq id no:6、seq id no:8、seq id no:10、seq id no:12、seq id no:14、seq idno:16、seq id no:17、seq id no:18、seq id no:19、seq id no:20、seq id no:21、seq idno:22、seq id no:23、seq id no:24、seq id no:25、seq id no:26、seq id no:27、seq ...
【专利技术属性】
技术研发人员：迈尔·史蒂夫·阿文道·阿玛多，丽迪雅·简·格里芬，詹姆士·亚伦·克莱默，罗摩·克里希纳·辛哈德里，
申请(专利权)人：英薇艾欧科学股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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