【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于药物分析，尤其涉及一种超高效液相色谱-质谱联用同时检测乳康胶囊中14种化合物含量的测定方法及应用。
技术介绍
1、乳康胶囊是由黄芪、乳香、玄参、夏枯草、丹参、白术、牡蛎、海藻等15味药制备而成，主要功效为舒肝活血，祛痰软坚。用于肝郁气滞、痰淤互结所致的乳癖，症见乳房肿块或结节、或经前胀痛；乳腺增生病见上述证候者。现行标准为中国药典2020年版一部和国家食品药品监督管理局标准ybz00942010。但其现行质量标准的含量测定项仅分别对丹参中的丹酚酸b和丹参素进行质量控制，《乳康胶囊tlc鉴别及含量测定》文献中记载了王建明等人采用高效液相色谱-蒸发光散射法对乳康胶囊中的黄芪甲苷进行含量测定，该方法需要索氏提取、萃取等步骤，操作繁琐。文献中也未见有关制剂中天冬、白术、夏枯草、玄参成分含量测定相关的报道，现有方法不足以进行质量整体控制。
2、黄芪中黄酮类及皂苷类成分，丹参中的丹酚酸b、丹参酮ⅱa和迷迭香酸，玄参中的哈巴苷和哈巴俄苷，白术中的白术内酯ⅱ，天冬中的薯蓣皂苷，夏枯草中的迷迭香酸均为其各自的潜在质量标志物。但由于以上成分种类繁多，结构各异，且丹参酮ⅱa和薯蓣皂苷在样品中含量较低，液相色谱法无法对样品中含量较低、分离度不好的成分进行定量。为了全面评价乳康胶囊中以上药材的质量，亟需针对乳康胶囊中的有效成分建立灵敏度高、专属性强、快速高效的分析方法，为乳康胶囊的质量控制、标准提高以及药效学研究提供分析方法和数据参考。
3、中国专利技术202110005948.6的说明书中记录了一种补骨脂药材中18
4、本专利技术中检测的化合物与专利202110005948.6中检测的化合物均不同，且该专利中的质谱方法、色谱方法均不适用于本专利技术，采用该专利中的流动相体系来检测本专利技术中的化合物会使丹酚酸b和薯蓣皂苷没有响应。
技术实现思路
1、为了解决以上技术问题，本专利技术提供一种超高效液相色谱-质谱联用同时检测乳康胶囊中14种化合物含量的测定方法及应用，检测方法分析迅速，稳定性好，准确度高；其中所采用的色谱条件能够同时检出14种化合物，且化合物的峰型良好；该14种化合物即有效成份的含量高低能够指示处方中黄芪、丹参、玄参、白术、夏枯草和天冬6味药材的投料情况，避免了只因测定单一化学成分而判定制剂整体质量的片面性。
2、解决以上技术问题的本专利技术中的一种超高效液相色谱-质谱联用同时检测乳康胶囊中14种化合物含量的测定方法，其特征在于：包括以下步骤：
3、(1)制备系列标准混合工作液：
4、精密称取14种化合物各对照品，加甲醇制成混合对照品储备液溶液；将混合对照品储备液溶液逐级稀释至所需要的浓度，即为系列标准混合工作液；
5、(2)制备供试品溶液：
6、取待测样品，经n次超声、离心后，将上清液合并，过滤后作为供试品溶液；n≥1。
7、(3)精密吸取步骤(1)系列标准混合工作液及对照品储备液注入超高效液相色谱-质谱联用仪，以化合物的浓度为横坐标，以化合物的峰面积为纵坐标，每个成分取5个浓度点，绘制回归方程；
8、(4)将步骤(2)供试品溶液注入超高效液相色谱-质谱联用仪，将各化合物的峰面积带入到标准曲线中，即可求得待测物中各有效成分的含量。
9、优化方案中，所述14种有效成分包括：哈巴苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、迷迭香酸、丹酚酸b、芒柄花苷、哈巴俄苷、毛蕊异黄酮、黄芪甲苷、黄芪皂苷ⅱ、芒柄花素、黄芪皂苷ⅰ、薯蓣皂苷、白术内酯ⅱ和丹参酮ⅱa。
10、乳康胶囊处方中共有15味药材，即黄芪、乳香、玄参、夏枯草、丹参、白术、牡蛎、天冬、夏枯草、瓜蒌、三棱和海藻等15味药。黄芪中黄酮类及皂苷类成分，丹参中的丹酚酸b、丹参酮ⅱa和迷迭香酸，玄参中的哈巴苷和哈巴俄苷，白术中的白术内酯ⅱ，天冬中的薯蓣皂苷，夏枯草中的迷迭香酸均为其各自的潜在质量标志物，以上化合物可以适用于超高效液相色谱-质谱联用技术。
11、所述甲醇为质量浓度为100％甲醇。
12、质谱采集参数具体数据见表：
13、
14、所述步骤(1)中系列标准混合工作液的制备步骤如下：精密称取各对照品适量，加甲醇制成质量浓度分别为芒柄花素0.28μg/ml、毛蕊异黄酮0.85μg/ml、丹参酮ⅱa0.10μg/ml、芒柄花苷0.33μg/ml、毛蕊异黄酮葡萄糖苷0.76μg/ml、黄芪甲苷1.06μg/ml、黄芪皂苷ⅱ1.29μg/ml、黄芪皂苷ⅰ0.44μg/ml、哈巴苷0.23μg/ml、哈巴俄苷0.16μg/ml、丹酚酸b11.17μg/ml、薯蓣皂苷0.11μg/ml、迷迭香酸2.88μg/ml和白术内酯ⅱ0.16μg/ml的混合溶液，即得混合对照品储备液。
15、将上述混合对照品储备液分别稀释2、5、10、33、100、200、400倍，得到系列标准混合工作液。
16、进一步优化方案中，步骤(2)供试品溶液制备方法为：取本品0.5g，精密称定，置离心管中，加入甲醇10ml，超声处理后离心，取出上清液至25ml容量瓶中，再加入甲醇10ml置同一离心管中，超声处理后离心，取出上清液至同一25ml容量瓶中，再加入甲醇5ml置同一离心管中，超声处理后离心，取出上清液至同一25ml容量瓶中，将容量瓶定容至刻度，摇匀，滤过，精密吸取续滤液1ml置5ml的容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，0.22μm滤膜滤过，取续滤液，即得。
17、所述超声处理10min，其超声功率300w，频率40khz；离心3min，其转速4200r/min。
18、所述步骤(3)的色谱条件为：
19、色谱柱：waters acquity uplc hss t3 c18色谱柱(2.1mm×100mm，1.8μm)；
20、流动相：流动相乙腈(a)-0.1％甲酸(b)；
21、梯度洗脱的过程包括：
22、0～1min，7％～7％a；
23、1～8min，7％～95％a；
24、8～12min，95％～95％a；
25、12～15min，7％～7％a；
26、流速：0.2ml/min；柱温：40℃；进样量：2μl。
27、进一步优化方案中，所述步骤(3)的质谱条件为：
28、离子源：电喷雾离子源；
29、扫描方式：正负离子检测；
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【技术保护点】
1.一种超高效液相色谱-质谱联用同时检测乳康胶囊中14种化合物含量的测定方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤；
2.根据权利要求1所述的一种超高效液相色谱-质谱联用同时检测乳康胶囊中14种化合物含量的测定方法，其特征在于：所述乳康胶囊中化合物包括哈巴苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、迷迭香酸、丹酚酸B、芒柄花苷、哈巴俄苷、毛蕊异黄酮、黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅱ、芒柄花素、黄芪皂苷Ⅰ、薯蓣皂苷、白术内酯Ⅱ和丹参酮ⅡA。
3.根据权利要求1所述的一种超高效液相色谱-质谱联用同时检测乳康胶囊中14种化合物含量的测定方法，其特征在于：所述甲醇为质量浓度为100％甲醇。
4.根据权利要求2所述的一种超高效液相色谱-质谱联用同时检测乳康胶囊中14种化合物含量的测定方法，其特征在于：所述步骤(1)中，系列标准混合工作液的制备过程具体为：
5.根据权利要求1所述的一种超高效液相色谱-质谱联用同时检测乳康胶囊中14种化合物含量的测定方法，其特征在于：所述步骤(2)中，供试品溶液制备方法：
6.根据权利要求5所述的一种超高效液相色谱-质谱联用同时检测乳康
7.根据权利要求1所述的一种超高效液相色谱-质谱联用同时检测乳康胶囊中14种化合物含量的测定方法，其特征在于：
8.根据权利要求2或7所述的一种超高效液相色谱-质谱联用同时检测乳康胶囊中14种化合物含量的测定方法，其特征在于：所述质谱采集参数具体见下表：
9.根据权利要求2所述的一种超高效液相色谱-质谱联用同时检测乳康胶囊中14种化合物含量的测定方法，其特征在于：
10.根据权利要求1所述方法的应用，其特征在于：将方法能够同时检测14种化合物的含量高低应用于能够指示处方中黄芪、丹参、玄参、白术、夏枯草和天冬6味药材的投料情况。
...【技术特征摘要】
1.一种超高效液相色谱-质谱联用同时检测乳康胶囊中14种化合物含量的测定方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤；
2.根据权利要求1所述的一种超高效液相色谱-质谱联用同时检测乳康胶囊中14种化合物含量的测定方法，其特征在于：所述乳康胶囊中化合物包括哈巴苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、迷迭香酸、丹酚酸b、芒柄花苷、哈巴俄苷、毛蕊异黄酮、黄芪甲苷、黄芪皂苷ⅱ、芒柄花素、黄芪皂苷ⅰ、薯蓣皂苷、白术内酯ⅱ和丹参酮ⅱa。
3.根据权利要求1所述的一种超高效液相色谱-质谱联用同时检测乳康胶囊中14种化合物含量的测定方法，其特征在于：所述甲醇为质量浓度为100％甲醇。
4.根据权利要求2所述的一种超高效液相色谱-质谱联用同时检测乳康胶囊中14种化合物含量的测定方法，其特征在于：所述步骤(1)中，系列标准混合工作液的制备过程具体为：
5.根据权利要求1所述的一种超高效液相色谱-质谱联用同时检测乳康胶囊中14种化合物含量的测定方法，其...
【专利技术属性】
技术研发人员：宿曼筠，杨龙华，郑玉玲，殷世宁，卢京光，杨晓云，
申请(专利权)人：青岛市食品药品检验研究院青岛市药品不良反应监测中心，青岛市实验动物和动物实验中心，
类型：发明
国别省市：
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