【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分子分析与表征，具体而言，涉及一种基于核磁共振技术的稳定同位素标记氨基酸纯度定值方法。
技术介绍
1、在稳定同位素标记氨基酸标准物质的生产和期间核查过程中，对精准定值的需求至关重要。此类标准物质在科研、医学、农业等领域具有举足轻重的作用，其精确度直接影响实验结果的准确性和可靠性。目前，常用的纯度定值方法包括质谱平衡法和比较法。
2、质谱平衡法在测量有机化合物样品纯度时，首先需确认主成分的化学组成与结构，针对不同杂质类型，采用气相色谱、液相色谱、离子色谱、体积排阻色谱、顶空气相色谱/质谱、热重分析、卡尔-费休、电感耦合等离子光谱/质谱、x-射线荧光光谱(xrf)等方法检测各类杂质。通过上述方法对样品中不同类型杂质含量进行分别测量，然后在100％中扣除。然而，质谱平衡法测定纯度存在一定缺陷：每种方法测量过程需严格遵循相关要求，每种方法均消耗待测样品，且过程耗时长、操作复杂、涉及仪器众多，对于稳定同位素标记的氨基酸样品，样品成本较高，测试成本昂贵。
3、比较法测纯度采用一种测量程序，将待测物与一个有证标准物质(非标记物)进行比较，计算确定化学纯度。然而，比较法测纯度也存在不足：对于稳定同位素标记的氨基酸，并非每种氨基酸都能找到相应的非标记氨基酸有证标准物质进行比较。若选用其他标准物质，比较对象对于检测系统的响应可能存在较大误差，导致纯度检测不准确。
4、因此，研究一种特性量值定值准确可靠的稳定同位素标记氨基酸定量核磁氢谱纯度定值方法具有重要意义。
技术实现思
1、鉴于此，本专利技术提出了一种基于核磁共振技术的稳定同位素标记氨基酸纯度定值方法，旨在解决当前技术中对稳定同位素标记氨基酸标准物质生产和期间核查过程中不能精准定值的问题。
2、本专利技术提出了一种基于核磁共振技术的稳定同位素标记氨基酸纯度定值方法，包括：
3、称取稳定同位素标记氨基酸待测物，并记录待测物重量数据，记为稳定同位素标记氨基酸样品的称样量；
4、称取内标物，并记录内标物重量数据，记为内标称重量；
5、将稳定同位素标记氨基酸待测物与氘代试剂混合配置成待测样品；
6、获取待测样品和内标物的核磁共振氢谱，确定待测样品和内标物的定量峰，并对定量峰进行积分处理，根据积分面积最终计算得到待测物的纯度值，计算公式为：
7、
8、其中，ps表示稳定同位素标记氨基酸的纯度；pstd表示内标纯度；mstd表示内标称重量；mstd表示内标的相对分子质量；nstd表示内标定量峰对应的基团上氢原子个数；i std表示内标定量峰的峰面积；ms表示稳定同位素标记氨基酸样品的称样量；ms表示待测物的相对分子质量；ns表示稳定同位素标记氨基酸样品用于定量的峰对应基团上的氢原子个数；i s表示稳定同位素标记氨基酸样品定量峰的积分面积。
9、优选的，所述氘代试剂为重水。
10、优选的，所述内标物为马来酸或肌酐。
11、优选的，获取所述核磁共振氢谱时，包括：
12、测定待测样品和内标物的1hnmr谱图，获得所述核磁共振氢谱。
13、优选的，获取所述核磁共振氢谱时，包括：
14、将1hnmr谱图进行相位校正、基线校正和化学位移校正。
15、优选的，获取所述核磁共振氢谱时，包括：
16、弛豫时间为1t1、3t1、5t1、10t1或15t1；
17、脉冲角度为30°、45°或90°。
18、优选的，获取所述核磁共振氢谱时，包括：
19、当谱宽大于20ppm时，采样时间大于2.5s。
20、与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：
21、目前，还没有稳定同位素标记氨基酸标准物质的相关报道，在稳定同位素标记氨基酸化合物标准物质的定值过程中，原料的纯度是非常关键的参数。
22、本专利技术提出的基于核磁共振技术的稳定同位素标记氨基酸纯度定值方法，有效地解决了这一问题，为稳定同位素标记氨基酸标准物质的制备提供了可靠的技术支持。
23、首先，本专利技术通过称取待测物和内标物，并混合配置成待测样品，为后续纯度测定提供了准确的样品基础。其中，氘代试剂的使用，如重水，有助于消除溶剂峰对定量峰的影响，提高了纯度测定的准确性。
24、其次，本专利技术利用核磁共振技术获取待测样品和内标物的氢谱，通过确定定量峰并进行积分处理，实现了对稳定同位素标记氨基酸纯度的准确计算。这种方法具有高度的灵敏度和特异性，能够准确反映待测物的纯度情况。
25、此外，本专利技术对内标物的选择、核磁共振氢谱的获取条件等进行了优化，进一步提高了纯度测定的准确性和可靠性。例如，选用马来酸或肌酐作为内标物，可以确保内标物与待测物在化学位移上充分分离，从而确保待测物和内标物各自积分准确，互不干扰，减小误差。同时，通过对弛豫时间、脉冲角度等参数的合理设置，以及对谱宽和采样时间的控制，确保了核磁共振氢谱的质量和精度。
26、综上所述，本专利技术提出的基于核磁共振技术的稳定同位素标记氨基酸纯度定值方法，具有操作简便、准确度高、可靠性强的优点，为稳定同位素标记氨基酸标准物质的制备和应用提供了重要的技术支持。
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1.一种基于核磁共振技术的稳定同位素标记氨基酸纯度定值方法，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的基于核磁共振技术的稳定同位素标记氨基酸纯度定值方法，其特征在于，所述氘代试剂为重水。
3.根据权利要求1所述的基于核磁共振技术的稳定同位素标记氨基酸纯度定值方法，其特征在于，所述内标物为马来酸或肌酐。
4.根据权利要求1所述的基于核磁共振技术的稳定同位素标记氨基酸纯度定值方法，其特征在于，获取所述核磁共振氢谱时，包括：
5.根据权利要求4所述的基于核磁共振技术的稳定同位素标记氨基酸纯度定值方法，其特征在于，获取所述核磁共振氢谱时，包括：
6.根据权利要求1所述的基于核磁共振技术的稳定同位素标记氨基酸纯度定值方法，其特征在于，获取所述核磁共振氢谱时，包括：
7.根据权利要求1所述的基于核磁共振技术的稳定同位素标记氨基酸纯度定值方法，其特征在于，获取所述核磁共振氢谱时，包括：
【技术特征摘要】
1.一种基于核磁共振技术的稳定同位素标记氨基酸纯度定值方法，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的基于核磁共振技术的稳定同位素标记氨基酸纯度定值方法，其特征在于，所述氘代试剂为重水。
3.根据权利要求1所述的基于核磁共振技术的稳定同位素标记氨基酸纯度定值方法，其特征在于，所述内标物为马来酸或肌酐。
4.根据权利要求1所述的基于核磁共振技术的稳定同位素标记氨基酸纯度定值方法，其特征在于...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘亚辉，武利庆，杨国武，肖伟敏，
申请(专利权)人：中国计量科学研究院，
类型：发明
国别省市：
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