【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于口服肝靶向制剂，具体涉及一种用于负载抗肝纤维化药物吡非尼酮的口服肝靶向纳米乳剂及其制备方法，且涉及所述吡非尼酮纳米乳剂用于预防或治疗多种因素引起的肝纤维化疾病中的用途。
技术介绍
1、肝纤维化是一个病理生理过程，其主要特征是细胞外基质(特别是胶原)，在肝内过量沉积导致肝脏结构和功能的破坏。如果导致肝脏损伤的因素长期不能去除，可引起肝脏的结构紊乱，肝细胞结节样再生，形成假小叶结构，即肝硬化。肝纤维化在组织学上是可逆的，如果在早期给予积极的治疗，可以被逆转。大量的实验证明，肝星状细胞(hscs)的活化是肝纤维化发生的细胞学基础，活化的hscs可通过增生和分泌细胞外基质(ecm)参与肝纤维化的形成及肝内结构的重建，促进肝纤维化的发生发展。然而，目前还没有批准应用于肝纤维化的临床治疗药物。吡非尼酮(pfd)是首个在临床使用的新型广谱抗纤维化药物，其独特的抗炎、抗纤维化及抗氧化应激机制，不仅对慢性纤维化阶段起到延缓进展的作用，并且可有效减轻特发性肺纤维化(ipf)引起的急性期炎症。美国食品药品监督管理局和欧洲药品管理局已经批准pfd用于ipf患者的临床治疗。
2、临床pfd的给药途径主要为口服给药，在提高患者依从性方面有巨大优势。然而，pfd经口服吸收后，组织分布较广，在肝脏、肾脏、心脏以及肺脏等组织中均能检测到pfd。临床研究发现，口服pfd能引起全身副反应，如出现明显的胃肠道症状、对日光或紫外线等皮肤反应、以及体重减轻等。目前，主要通过降低剂量或者终止治疗来控制pfd引起的副反应。因此，如何增加pfd在肝脏组
3、口服靶向需通过递送系统的表面功能设计来克服胃肠道的阻滞和排斥，提高药物递送系统进入体循环的几率，最终完成其预设的靶向功能。纳米乳液作为一种有前景的口服药物递送系统，已用于多种疾病的治疗。纳米乳液由于易于吸收的特性，可以显著提高药物的生物利用度和疗效。许多食品蛋白质营养丰富、无毒、成本低，具有良好的乳化能力，可作为纳米乳液的乳化剂。玉米醇溶蛋白是从玉米蛋白粉中获得的天然植物蛋白，含有大量的疏水残基和极性基团，是一种典型的两亲性聚合物。然而，蛋白往往带有一定量的电荷，形成蛋白乳的界面较薄，因而蛋白乳液受胃肠道(ph、离子强度和酶解等)内环境因素影响较大。
4、此外，口服纳米递药系统除了需要耐受胃肠道的消化，还要求它们能够突破生物膜屏障，这也需要进一步研究。
技术实现思路
1、专利技术目的：针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种用于负载吡非尼酮的口服肝靶向纳米乳剂及其制备方法和应用。
2、技术方案：为了达到上述专利技术目的，本专利技术采用如下技术方案：
3、一种用于负载吡非尼酮的口服肝靶向纳米乳剂，所述纳米乳剂主要是由玉米醇溶蛋白肽、葡聚糖和叶酸制成的蛋白-多糖-叶酸偶联物负载吡非尼酮所形成。
4、作为具体实施方案，所述吡非尼酮包括吡非尼酮或其衍生物。
5、作为具体实施方案，所述玉米醇溶蛋白肽主要由以下方法制得：
6、首先，将玉米醇溶蛋白溶解于乙醇水溶液中，加入碱进行碱解反应，反应结束后，除去溶液中的乙醇和水，调ph至酸性，静置，弃掉上清，清洗沉淀，再将沉淀溶解，最后将溶液冻干，即得到玉米醇溶蛋白肽；优选的，所述乙醇水溶液的浓度为65-75％，所述碱选自氢氧化钠，玉米蛋白与氢氧化钠的质量比为1：(1-3)；所述碱解反应在搅拌条件下进行，反应温度为35-40℃，反应时间为30-40h。
7、本专利技术还提供了所述的用于负载吡非尼酮的口服肝靶向纳米乳剂的制备方法，包括以下步骤：
8、(1)首先取葡聚糖和叶酸，制备葡聚糖-叶酸偶联物，然后与玉米醇溶蛋白肽反应，合成蛋白-多糖-叶酸聚合物；
9、(2)取蛋白-多糖-叶酸聚合物，加去离子水配制成溶液，作为水相；吡非尼酮溶于油，作为油相；
10、(3)将上述油相和水相混合，制备所述纳米乳剂。
11、作为具体实施方案，步骤(1)中，所述葡聚糖和叶酸的摩尔比为1：(0.2-0.6)，优选1.04：0.4；所述制备葡聚糖-叶酸偶联物的反应，是在有机溶剂中，在edci和dmap存在条件下进行搅拌反应，所述反应的温度为35-40℃，反应时间为20-28h，优选37℃反应24h；反应结束后，透析，冻干，即得所述葡聚糖-叶酸偶联物；优选的，所述有机溶剂选自二甲基亚砜。
12、作为具体实施方案，步骤(1)中，所述玉米醇溶蛋白肽和葡聚糖-叶酸偶联物的质量比是1：(4-8)，优选1：6；所述合成蛋白-多糖-叶酸聚合物采用美拉德反应，包括如下步骤：
13、将玉米醇溶蛋白肽和葡聚糖-叶酸偶联物混合溶解，冻干，将冻干粉置于饱和kbr密闭空间内，在55-65℃、75-85％湿度下反应20-28h，即得。优选在60℃、79％湿度下反应24h。
14、作为具体实施方案，步骤(2)中，所述油选自中链甘油三酯、大豆油、玉米油、花生油、蓖麻油中的一种或几种。优选为中链甘油三酯。
15、作为具体实施方案，步骤(3)中，所述油相和水相混合，其中，蛋白-多糖-叶酸聚合物以其中玉米醇溶蛋白的质量计，水相中蛋白-多糖-叶酸聚合物与油相中吡非尼酮的质量比为1：(1-4)，优选1：2.5。
16、作为具体实施方案，步骤(3)中，制备所述纳米乳剂的方法包括：将油相和水相混合后超声，得初乳液；将初乳液进行高压均质，即得所述纳米乳剂；优选的，所述超声是在60-70w条件下在冰水浴中超声2.5-3.5min(脉冲3s，暂停3s)，进一步优选在65w条件下在冰水浴中超声3min(脉冲3s，暂停3s)；所述高压均质是在5000-7000psi下进行2-4次均质，进一步优选6000psi下进行3次均质。
17、本专利技术最后提供了所述的用于负载吡非尼酮的口服肝靶向纳米乳剂在制备预防或治疗肝纤维化药物中的应用。
18、进一步的，所述肝纤维化为tace术后引起的肝纤维化。
19、本专利技术首先通过酯化反应得到葡聚糖-叶酸(dex-fa)偶联物，并同玉米醇溶蛋白肽(zp)采用绿色安全的美拉德反应合成玉米醇溶蛋白肽-葡聚糖-叶酸(zd-fa)聚合物。口服肝靶向不同于常规的血液循环靶向，口服肝靶向要求不但要能突破胃肠道屏障，还需要有效靶向病灶。因此，本专利技术以玉米醇溶蛋白肽作为纳米乳剂的基础，不但生物相容性好，而且容易和其他配体结合，弥补常规蛋白的缺陷。如采用亲水性较好的葡聚糖(dex)可以在水相中形成伸展的空间网络结构，产生空间位阻，弥补蛋白乳液易受胃肠道(ph、离子强度和酶解等本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于负载吡非尼酮的口服肝靶向纳米乳剂，其特征在于，所述纳米乳剂主要是由玉米醇溶蛋白肽、葡聚糖和叶酸制成的蛋白-多糖-叶酸偶联物负载吡非尼酮所形成。
2.根据权利要求1所述的用于负载吡非尼酮的口服肝靶向纳米乳剂，其特征在于，所述玉米醇溶蛋白肽主要由以下方法制得：
3.权利要求1或2所述的用于负载吡非尼酮的口服肝靶向纳米乳剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的用于负载吡非尼酮的口服肝靶向纳米乳剂的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述葡聚糖和叶酸的摩尔比为1:(0.2-0.6)，所述制备葡聚糖-叶酸偶联物的反应，是在有机溶剂中，在EDCI和DMAP存在条件下进行搅拌反应，所述反应的温度为35-40℃，反应时间为20-28h；反应结束后，透析，冻干，即得所述葡聚糖-叶酸偶联物；优选的，所述有机溶剂选自二甲基亚砜。
5.根据权利要求3所述的用于负载吡非尼酮的口服肝靶向纳米乳剂的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述玉米醇溶蛋白肽与葡聚糖-叶酸偶联物的质量比是1：(4-8)；所述合成蛋白-多糖-叶酸聚合
6.根据权利要求3所述的用于负载吡非尼酮的口服肝靶向纳米乳剂的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述油选自中链甘油三酯、大豆油、玉米油、花生油、蓖麻油中的一种或几种。
7.根据权利要求3所述的用于负载吡非尼酮的口服肝靶向纳米乳剂的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述油相和水相混合，其中，蛋白-多糖-叶酸聚合物以其中玉米醇溶蛋白的质量计，水相中蛋白-多糖-叶酸聚合物与油相中吡非尼酮的质量比为1：(1-4)。
8.根据权利要求3所述的用于负载吡非尼酮的口服肝靶向纳米乳剂的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，制备所述纳米乳剂的方法包括：将油相和水相混合后超声，得初乳液；将初乳液进行高压均质，即得所述纳米乳剂；优选的，所述超声是在60-70W条件下在冰水浴中超声2.5-3.5min(脉冲3s，暂停3s)；所述高压均质是在5000-7000psi下进行2-4次均质。
9.权利要求1或2所述的用于负载吡非尼酮的口服肝靶向纳米乳剂在制备预防或治疗肝纤维化药物中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述肝纤维化为TACE术后引起的肝纤维化。
...【技术特征摘要】
1.一种用于负载吡非尼酮的口服肝靶向纳米乳剂，其特征在于，所述纳米乳剂主要是由玉米醇溶蛋白肽、葡聚糖和叶酸制成的蛋白-多糖-叶酸偶联物负载吡非尼酮所形成。
2.根据权利要求1所述的用于负载吡非尼酮的口服肝靶向纳米乳剂，其特征在于，所述玉米醇溶蛋白肽主要由以下方法制得：
3.权利要求1或2所述的用于负载吡非尼酮的口服肝靶向纳米乳剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的用于负载吡非尼酮的口服肝靶向纳米乳剂的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述葡聚糖和叶酸的摩尔比为1:(0.2-0.6)，所述制备葡聚糖-叶酸偶联物的反应，是在有机溶剂中，在edci和dmap存在条件下进行搅拌反应，所述反应的温度为35-40℃，反应时间为20-28h；反应结束后，透析，冻干，即得所述葡聚糖-叶酸偶联物；优选的，所述有机溶剂选自二甲基亚砜。
5.根据权利要求3所述的用于负载吡非尼酮的口服肝靶向纳米乳剂的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述玉米醇溶蛋白肽与葡聚糖-叶酸偶联物的质量比是1：(4-8)；所述合成蛋白-多糖-叶酸聚合物采用美拉德反应，包括如下步骤...
【专利技术属性】
技术研发人员：张帅，陈艺，程芝梅，徐珊，何慧洲，彭剑青，
申请(专利权)人：贵州医科大学，
类型：发明
国别省市：
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