【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于纳米药物及其制备，尤其涉及核酸药物和疫苗制造，具体涉及一种mrna-lnps纳米递送系统及耐受型mrna-lnps纳米疫苗。
技术介绍
1、信使rna(mrna)疫苗是一种新兴的疫苗，为包括自身免疫病和过敏性疾病等在内的多种免疫稳态破坏相关疾病的防治提供了新的契机。利用mrna疫苗技术开发耐受型疫苗，诱导外周免疫耐受，有望为自身免疫病和过敏性疾病等的防治带来新的技术突破。同时利用体外转录信使rna(in vitro-transcribed mrna，ivt mrna)进行疫苗接种、基于mrna的治疗已经成为医学领域的热点，是对抗疾病强大的和通用的工具。然而，裸mrna易被降解，加之其阴离子特性，使得抗原提呈细胞对mrna的摄取极为困难，导致其体内递送效率低下。突破细胞内递送的障碍是ivt mrna被广泛用于治疗的关键要点。
2、因此，耐受型mrna疫苗的开发有赖于有效的递送载体，既能实现抗原mrna的免疫器官内抗原提呈细胞的靶向递送，又可诱导外周免疫耐受，发挥安全和高效的免疫防治作用。
3、随着技术的迭代，近些年来，脂质纳米粒(lipid nanoparticles,lnps)已成为mrna等核酸类药物分子最先进的递送载体。基于脂质纳米颗粒(lnps)的信使rna疫苗(mrna-lnps疫苗)能够用于诱导抗原特异性免疫原性免疫反应，在恶性肿瘤和感染性疾病治疗方面已表现出巨大的优势，具有肿瘤药物制备、免疫性疾病的预防和治疗的应用前景。另外，基于mrna的疫苗方法用于过敏性疾病或自身免疫性疾病的
4、树突状细胞(dendritic cell,dc)是mrna疫苗进入机体之后唯一能激活初始t细胞的抗原提呈细胞，可通过感知局部环境产生免疫原性或耐受性的特征，并在启动针对mrna疫苗的免疫原性或耐受性免疫应答中发挥关键作用。
5、近年来，越来越多的证据表明dc具有以抗原特异性的方式诱导t细胞产生免疫耐受的能力。改变dc的表型和功能可影响机体对变应原的免疫应答与免疫耐受特征。调控dc的成熟与分化，诱导未成熟dcs分化为耐受型dc，有望通过促进treg介导的免疫耐受来抑制气道炎症，成为治疗哮喘的新策略。然而，lnps中大量的炎性可电离脂质对于开发耐受型mrna-lnps疫苗是十分不利的，尽管其对开发流感等mrna疫苗或有一定帮助。此外，普通lnps在静脉给药后将大部分mrna递送至肝脏，仅有小部分mrna在脾脏翻译。
6、脾脏是机体最大的外周免疫器官，具有造血、贮血和过滤作用，也是接受血源性抗原刺激产生免疫应答的场所，其在维持机体免疫稳态方面发挥关键作用。靶向递送抗原至脾脏可通过诱导耐受型树突状细胞(dcs)启动外周免疫耐受，通过lnps的合理设计或可同时实现负向调控lnps促炎佐剂活性和抗原mrna的脾脏选择性递送，进而启动外周免疫耐受的作用，用于防治自身免疫病、过敏性疾病和器官移植后的免疫排斥等的免疫防治。
7、近年来，从药用植物中提取生物活性化合物用于免疫调节的思路逐步被肯定。雷公藤红素(celastrol,cel)是一种从雷公藤中提取的天然生物活性化合物，具有抗炎和免疫抑制的潜力，可用于治疗多种炎症及免疫性疾病，如哮喘、类风湿性关节炎和系统性红斑狼疮等。cel可通过调节nf-κb和nlrp3等多种信号通路抑制炎性细胞因子如il-6、il-1β等的产生，并通过引发一系列级联反应发挥炎症和自身免疫性疾病的治疗作用。
8、在脾脏靶向性的lnps中掺杂雷公藤红素，有望同时解决雷公藤红素毒性大/水溶性差和lnps佐剂活性的问题，同时共载雷公藤红素和抗原mrna的新型疫苗也能够通过诱导脾脏未成熟dcs分化为耐受型dcs，启动treg介导的免疫耐受，起到过敏性疾病等免疫紊乱相关疾病的防治作用。
9、基于此，本申请拟研究脾脏靶向性lnps的促炎作用及机制，并通过引入具有抗炎活性的天然产物，构建基于lnps的脾脏靶向性耐受型mrna疫苗，进一步研究其诱导耐受型dcs并启动外周免疫耐受的作用，为研发具有自主知识产权的耐受型mrna疫苗提供理论支撑和技术平台。
技术实现思路
1、专利技术人前期构建了一种mrna-lnps纳米疫苗递送系统，并研究了其中免疫抗肿瘤活性。为了解决现有技术中常规的mrna-lnps疫苗由于其促炎作用不利于耐受型dcs诱导以及启动免疫耐受的技术问题，提出一种mrna-lnps纳米递送系统及耐受型mrna-lnps纳米疫苗，通过对mrna进行化学修饰，并通过引入天然抗炎产物作为免疫佐剂负调控mrna-lnps疫苗促炎佐剂活性，构建脾脏靶向的耐受型mrna-lnps纳米疫苗，研究其调节炎性dcs和耐受型dcs平衡，进而诱导耐受型dcs并启动treg介导的免疫耐受，同时研究其对相关疾病的免疫防治作用。
2、为达到上述目的，本专利技术创造的技术方案是这样实现的：
3、一种mrna-lnps纳米递送系统，所述mrna-lnps纳米递送系统包括递送载体、以及免疫佐剂。
4、所述递送载体为脂质纳米颗粒，其包括可离子化阳离子脂质、聚合物结合脂质、靶向性功能脂质和功能性脂肪酸中的两种或多种。
5、具体的，所述递送载体用于递送以脾脏为靶器官的药物、抗原、免疫调节剂、疫苗、其他活性成分，单一成分或任意组合。
6、具体的，所述可离子化阳离子脂质选自sm102、c12-200、dlin-mc3-dma或alc-0315中的至少一种，优选为sm102。
7、具体的，所述聚合物结合脂质选自peg或其衍生物修饰的脂质，优选为dmg-peg。
8、具体的，所述靶向性功能脂质选自dspc、18pa、dotap、胆固醇(chol)、epc、dotma、18ps、18pg、β-sitosterol或campesterol中的至少一种。
9、具体的，所述功能性脂肪酸为硬脂酸和/或其类似物及衍生物，优选为硬脂酸(sa)。
10、具体的，所述功能性脂肪酸同时具备如下生物学和/或药物特性：脾脏靶向性；目标机体自有性；降低目标机体代谢细胞摄取所述递送载体的能力/潜力。
11、具体的，所述免疫佐剂为免疫抑制剂，优选为天然活性化合物，进一步优选为雷公藤红素、雷帕霉素、地塞米松中的至少一种；所述天然活性化合物作为免疫抑制剂，具有抗炎和免疫抑制活性。
12、具体的，所述纳米递送系统中，各组分分别为sm102、dspc、chol、dmg-peg、硬脂酸(sa)和免疫佐剂；其中，各个脂质的摩尔比均与免疫佐剂相关，各组分的摩尔比计算方法如下表所示：
13、
14、以上表中各参数之间是相乘关系，其中，y＝0.5-0.8，优选为，y＝2/3或0.666；
15、x＝0-5，优选为，x＝1、5；其中，a+b+c+d＝1；
16、免疫佐剂为雷公藤红素、雷帕霉素、地塞米松中的至少一种，优选本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种mRNA-LNPs纳米递送系统，其特征在于，所述mRNA-LNPs纳米递送系统包括递送载体、以及免疫佐剂；
2.根据权利要求1所述的mRNA-LNPs纳米递送系统，其特征在于，所述可离子化阳离子脂质选自SM102、C12-200、Dlin-MC3-DMA或ALC-0315中的至少一种；
3.根据权利要求1所述的mRNA-LNPs纳米递送系统，其特征在于，所述免疫佐剂为免疫抑制剂，具体为雷公藤红素、雷帕霉素、地塞米松中的至少一种。
4.根据权利要求1-3任一所述的mRNA-LNPs纳米递送系统，其特征在于，所述纳米递送系统中，各组分分别为SM102、DSPC、Chol、DMG-PEG、硬脂酸、免疫佐剂；其中，各组分的摩尔比计算方法如下表所示：
5.根据权利要求1-3任一所述的mRNA-LNPs纳米递送系统，其特征在于，所述纳米递送系统中，各组分分别为SM102、DSPC、Chol、DMG-PEG、硬脂酸、免疫佐剂；各组分的质量比为：(42-45)：(9-10)：(16-20)：(4-5)：(44-46)：1。
6.
7.权利要求6所述的耐受型mRNA-LNPs纳米疫苗的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
8.权利要求1所述的mRNA-LNPs纳米递送系统或权利要求6所述的耐受型mRNA-LNPs纳米疫苗在精准递送功能性mRNA在特定组织和细胞中表达的应用。
9.权利要求6所述的耐受型mRNA-LNPs纳米疫苗在制备器官靶向药物中的应用。
10.权利要求6所述的耐受型mRNA-LNPs纳米疫苗在制备预防过敏性哮喘药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种mrna-lnps纳米递送系统，其特征在于，所述mrna-lnps纳米递送系统包括递送载体、以及免疫佐剂；
2.根据权利要求1所述的mrna-lnps纳米递送系统，其特征在于，所述可离子化阳离子脂质选自sm102、c12-200、dlin-mc3-dma或alc-0315中的至少一种；
3.根据权利要求1所述的mrna-lnps纳米递送系统，其特征在于，所述免疫佐剂为免疫抑制剂，具体为雷公藤红素、雷帕霉素、地塞米松中的至少一种。
4.根据权利要求1-3任一所述的mrna-lnps纳米递送系统，其特征在于，所述纳米递送系统中，各组分分别为sm102、dspc、chol、dmg-peg、硬脂酸、免疫佐剂；其中，各组分的摩尔比计算方法如下表所示：
5.根据权利要求1-3任一所述的mrna-lnps纳米递送系统，其特征在于，所述纳米递送系统中，各组分分别为sm102、dspc、chol、dmg-peg...
【专利技术属性】
技术研发人员：秦志海，王发展，田美玲，邓文静，雷宁静，姚晓含，张利静，朱琳瑜，娄筱寒，
申请(专利权)人：郑州大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：
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