【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及器官损伤模型构建，具体涉及一种慢性肝损伤模型的构建及应用。
技术介绍
1、良好的动物模型是开发新药和研究疾病治疗方式的基础，国内外学者针对 肝损伤的临床发病因素已研究出了各种造模方式。根据不同的造模方式，可分为化学性肝损伤模型、酒精性肝损伤模型、药物性肝损伤模型、免疫性肝损伤模型和其他类型肝损伤模型。
2、我国南方地区，气候温热潮湿，粮食作物和经济作物等农产品容易受到霉菌的污染。霉菌毒素是谷物中真菌产生的次级代谢产物，常存在于被污染的饲料原料及畜禽饲料中。饲料样品中常见的霉菌毒素主要为黄曲霉毒素b1（aflatoxin b1，afb1），afb1的毒性极强，是氰化钾的10倍，砒霜的68倍，慢性毒性可诱发癌变，致癌能力为二甲基亚硝胺的75倍，比二甲基偶氨苯高900倍。经科学家验证，afb1是已知的化学物质中致癌性最强的一种。afb1作为畜禽饲料污染物导致了动物肝损伤、免疫抑制等多种慢性疾病的发生。研究发现，畜禽afb1中毒后其肝脏酶活、组织形态异常严重影响了肝脏功能。引起严重的肝损伤、黄疸、出血、水肿和死亡；慢性亚致死暴露会引起免疫抑制、营养功能障碍和癌症，损害畜禽机体的健康、生产性能、肠道完整性和免疫系统。同时，研究发现，膳食高糖高脂会引起脂肪变性、空泡化，纤维化等肝病变损伤。
3、现有技术中有采用afb1建立肝损伤模型，但是获得的是急性肝损伤模型，而afb1对于动物肝损伤本身属于慢性过程，因此急性肝损伤对于afb1诱导肝损伤的后续研究没有太大意义，但是在建立慢性肝损伤过程中，又会面临动物自
技术实现思路
1、本专利技术目的在于克服以上技术问题，提供一种高糖高脂和黄曲霉毒素b1致慢性肝损伤动物模型的构建方法，使得建立的模型属于慢性肝损伤，用于高糖高脂和黄曲霉毒素b1双机制诱导的肝脏慢性损伤病理研究。
2、本专利技术目的通过如下技术方案实现：
3、一种慢性肝损伤模型的构建方法，包括如下步骤：
4、（1）取体重为18~20g的km小鼠饲养在22-25℃，相对湿度为50~70%环境中，以12 h/12 h明暗的循环饲养；
5、（2）将小鼠适应性喂养3天后，采用高糖高脂饲料进行喂养，每天给小鼠喂服黄曲霉毒素b1试剂；
6、（3）9周后，将小鼠禁食12h，第二天对小鼠进行称重，然后安乐死，分离血清，同时采集肝脏组织，并用多聚甲醛固定；
7、（4）对小鼠血清进行肝功能相关指标检测，肝脏组织进行病理切片分析肝脏损伤程度。
8、进一步，所述步骤（2）中每天喂养的高糖高脂饲料具体是在普通维持饲料中加入12%猪油和8%蜂蜜组成。
9、进一步，所述普通维持饲料中谷物类原料质量占比为80%，动物性蛋白占比为10%，微量添加剂占比为10%。
10、进一步，所述afb1试剂是将黄曲霉毒素b1加入橄榄油中形成浓度为70~90 μg/ml的试剂，灌胃afb1剂量为0.1 ml/10g小鼠体重，1天灌服一次，现需喂养9周。
11、通过不断研究发现，以km小鼠建立肝损伤模型过程中，若afb1剂量或浓度过高，则会获得的模型中肝损伤严重，属于急性肝损伤，则不具备afb1诱导肝损伤的后续研究没有太大意义，而afb1剂量过低，则由于病理损伤较为轻微且缓慢，小鼠自身的可以不断自我修复，无法形成慢性损伤模型。
12、而本专利技术中将afb1浓度控制在70~90 μg/ml，每天按0.1 ml/10g小鼠体重灌胃，结合高糖高脂饲料喂养诱导，在9周后，获得了具有肝细胞轻度泡变性和轻度脂肪变性症状的复合病症的慢性肝损伤模型。成功构建小鼠慢性肝损伤模型，可为畜禽肝损伤机制和寻找治疗肝损伤药物提供动物模型。
13、上述方法构建的慢性肝损伤模型在筛选预防、诊断和治疗由afb1和高糖高脂诱导的慢性肝损伤的药物中的应用。
14、本专利技术具有如下技术效果：
15、本专利技术中通过高糖高脂饲料和afb1共同诱导小鼠，经过9w时间构建获得了高糖高脂和afb1协同诱导的慢性肝损伤模型，具有肝细胞脂肪变性（++）和肝细胞空泡变性（++）两种病变的慢性肝损伤模型，为筛选预防、诊断和治疗由黄曲霉毒素b1和高糖高脂诱导的慢性肝损伤的药物提供了实验基础。
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1.一种慢性肝损伤模型的构建方法，包括如下步骤：
2.如权利要求1所述的一种慢性肝损伤模型的构建方法，其特征在于：所述步骤（2）中每天喂养的高糖高脂饲料具体是在普通维持饲料中加入12%猪油和8%蜂蜜组成。
3.如权利要求1或2所述的一种慢性肝损伤模型的构建方法，其特征在于：所述AFB1是将黄曲霉毒素B1加入橄榄油中形成浓度为70~90 μg/mL的试剂，灌胃AFB1剂量为0.1mL/10g小鼠体重，1天灌服一次，现需喂养9周。
4.如权利要求3所述的方法构建的慢性肝损伤模型在筛选预防、诊断和治疗由AFB1和高糖高脂诱导的慢性肝损伤的药物中的应用。
【技术特征摘要】
1.一种慢性肝损伤模型的构建方法，包括如下步骤：
2.如权利要求1所述的一种慢性肝损伤模型的构建方法，其特征在于：所述步骤（2）中每天喂养的高糖高脂饲料具体是在普通维持饲料中加入12%猪油和8%蜂蜜组成。
3.如权利要求1或2所述的一种慢性肝损伤模型的构建方法，其特征在...
【专利技术属性】
技术研发人员：闫志强，付利芝，余远迪，陈春林，翟少钦，许国洋，朱买勋，唐红梅，郑华，牟豪，
申请(专利权)人：重庆市畜牧科学院，
类型：发明
国别省市：
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