【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于兽药中有效成分检测领域，具体涉及一种四黄止痢颗粒中11种活性成分的同时测定方法。
技术介绍
1、公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
2、四黄止痢颗粒为中兽药成方制剂，收载于2020版中华人民共和国兽药典二部：四黄止痢颗粒质量标准。原国家标准内容如下：
3、四黄止痢颗粒：
4、【处方】黄连200g黄柏200g大黄100g黄芩200g板蓝根200g甘草100g；
5、【制法】以上6味加水煎煮2次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.32～1.35的稠膏，加蔗糖和糊精适量，制成颗粒，干燥，制成100g，即得。
6、【性状】本品为黄色至黄棕色的颗粒。
7、【鉴别】(1)取本品研细的粉末lg，加甲醇25ml，超声处理30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。另取黄连对照药材0.25g，同法制成对照药材溶液。再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录0502)试验，吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以环己烷－乙酸乙酯－异丙醇－甲醇－水－三乙胺(3：3.5：1：1.5：0，5：1)为展开剂，置氨蒸气预饱和20分钟的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光
8、(2)取本品研细的粉末2g，加甲醇50ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，再加盐酸1ml，置水浴上加热30分钟，立即冷却，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并乙釀液，水浴蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。另取大黄对照药材0.1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(附录0502)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶h薄层板上，以石油醚(30～60℃)－甲酸乙酯－甲酸(15：5：1)的上层溶液为展开剂，展开，取岀，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显木目同的5个橙黄色荧光主斑点；置氨蒸气中熏后，日光下检视，斑点变为红色。
9、(3)取本品研细的粉末lg，加甲醇25ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录0502)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以含4％醋酸钠的羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶g薄层板上，以乙酸乙酯－丁酮－甲酸－水(5：3：1：1)为展开剂，展开，取岀，晾干，喷以2％三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
10、【检查】应符合颗粒剂项下有关的各项规定(附录0106)。
11、【含量测定】照高效液相色谱法(附录0512)测定。
12、色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇－水－磷酸(43：57：0.2)为流动相；检测波长为278nrn。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于20000
13、对照品溶液的制备取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含60μg的溶液，即得。
14、供试品溶液的制备取本品研细的粉末约0.5g，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇适量，超声处理(功率250w，频率40khz)30分钟，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得。
15、测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各l0μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
16、本品每lg含黄芩以黄芩苷(c21h18o11)计，不得少于4.8mg。
17、【功能】清热泻火，止痢。
18、【主治】湿热泻痢，鸡大肠杆菌病。
19、【用法与用量】每1l水，鸡0.5～lg。
20、【贮藏】密闭，防潮。
21、在四黄止痢颗粒质量标准中，对黄连、大黄、黄芩进行薄层鉴别，对黄芩苷进行含量测定；三项薄层鉴别，前处理操作起来非常繁琐。
22、对黄连、大黄、黄芩采用的薄层色谱检测方法中，薄层色谱检测前期准备复杂，需要展开晾干、喷雾显色、检视查看结果等多个步骤，费时费力；检测结果的荧光斑点受环境温湿度、人为操作、边缘效应等因素的干扰比较大，斑点常常不清晰，结果不易判定，重现性差；而且整个检测过程费时、费试剂，操作繁琐。且在实际检验工作中前处理溶媒以及层析用的展开剂等毒性大，例如：环己烷、乙酸乙酯、异丙醇、甲醇、三乙胺、乙醚，三氯甲烷、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、丁酮等，对实验人员的伤害比较大。因此，迫切需要一种新的四黄止痢颗粒检测方法以克服上述问题。
技术实现思路
1、鉴于中国兽药典中对四黄止痢颗粒中活性成分的鉴别测定过程中存在的费时、费试剂，结果重现性差，影响检测人员的安全等问题，本专利技术提出了一种采用uplc-pda同时测定四黄止痢颗粒中5味药多组分的方法。
2、为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
3、本专利技术的第一个方面，提供了一种采用uplc-pda同时测定四黄止痢颗粒中多种活性成分和指纹图谱的方法，包括：
4、分别取各活性成分的对照品，用有机溶剂配置成同时含有各对照品的混合对照储备溶液；
5、将四黄止痢颗粒溶解，水浴加热，然后进行超声萃取，离心、过滤后得待测液；
6、采用超高效液相色谱法分别对混合对照储备溶液和待测液进行检测，对待测液中的活性成分进行定性和定量分析，即得；
7、其中，萃取剂选自甲醇、无水乙醇、体积分数为50％的甲醇、体积分数为50％的乙醇、体积分数为70％的乙醇、体积分数为70％乙醇和盐酸的混合液，二者的比例为100:1～2、甲醇和盐酸的混合液，二者的比例为100:1～2。
8、本专利技术的第二个方面，提供了一种采用uplc-pda同时测定四黄止痢颗粒中多种活性成分和指纹图谱的系统，包括：超高效液相色谱仪，
9、所述系统采用上述的方法对四黄止痢颗粒中多种活性成分和指纹图谱进行测定。
10、本专利技术的第三个方面，提供了上述系统在兽药中有效成分检测领域中的应用。
11、本专利技术的有益效果
12、(1)本专利技术通过超高效液相色谱法同时把四黄止痢颗粒中黄连和黄柏(盐酸药根碱、盐酸小檗碱)，黄芩(黄芩苷、黄芩素)，大黄(没食子酸、芦荟大黄素、大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚)，甘草(甘草酸)等5种中药组分中的多种主要成分一次测定出来，方法简便快速、分离效果好，测定精度高，结果重现性好，易于观察，专属性强，色谱峰峰形良好，既达到中国兽药典的要求，又节省时间、试剂。
13、(2)本专利技术的测定方法，经过对甲醇、乙本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种采用UPLC-PDA同时测定四黄止痢颗粒中多种活性成分和指纹图谱的方法，其特征在于，包括：
2.如权利要求1所述的采用UPLC-PDA同时测定四黄止痢颗粒中多种活性成分和指纹图谱的方法，其特征在于，所述活性成分为：没食子酸，黄芩苷，黄芩素，盐酸药根碱，盐酸小檗碱，甘草酸，芦荟大黄素，大黄酸，大黄素，大黄酚，大黄素甲醚。
3.如权利要求1所述的采用UPLC-PDA同时测定四黄止痢颗粒中多种活性成分和指纹图谱的方法，其特征在于，四黄止痢颗粒与萃取剂的质量体积比为1g:20-80mL。
4.如权利要求1所述的采用UPLC-PDA同时测定四黄止痢颗粒中多种活性成分和指纹图谱的方法，其特征在于，萃取条件为超声萃取，萃取时间为10-20min，超声的功率为400w，频率40KHz。
5.如权利要求1所述的采用UPLC-PDA同时测定四黄止痢颗粒中多种活性成分和指纹图谱的方法，其特征在于，离心条件为转速10000-15000rpm/min，离心时间为10-20min；
6.如权利要求1所述的采用UPLC-PDA同时测定四黄止痢
7.如权利要求1所述的采用UPLC-PDA同时测定四黄止痢颗粒中多种活性成分和指纹图谱的方法，其特征在于，检测条件：PDA检测器，3D扫描波长范围190-400nm；检测波长为225nm、220nm、251nm、278nm、264nm、290nm、291nm、346nm多通道。
8.如权利要求1所述的采用UPLC-PDA同时测定四黄止痢颗粒中多种活性成分和指纹图谱的方法，其特征在于，梯度洗脱程序为：
9.一种采用UPLC-PDA同时测定四黄止痢颗粒中多种活性成分和指纹图谱的系统，其特征在于，包括：超高效液相色谱仪，
10.权利要求9所述系统在兽药中有效成分检测领域中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种采用uplc-pda同时测定四黄止痢颗粒中多种活性成分和指纹图谱的方法，其特征在于，包括：
2.如权利要求1所述的采用uplc-pda同时测定四黄止痢颗粒中多种活性成分和指纹图谱的方法，其特征在于，所述活性成分为：没食子酸，黄芩苷，黄芩素，盐酸药根碱，盐酸小檗碱，甘草酸，芦荟大黄素，大黄酸，大黄素，大黄酚，大黄素甲醚。
3.如权利要求1所述的采用uplc-pda同时测定四黄止痢颗粒中多种活性成分和指纹图谱的方法，其特征在于，四黄止痢颗粒与萃取剂的质量体积比为1g:20-80ml。
4.如权利要求1所述的采用uplc-pda同时测定四黄止痢颗粒中多种活性成分和指纹图谱的方法，其特征在于，萃取条件为超声萃取，萃取时间为10-20min，超声的功率为400w，频率40khz。
5.如权利要求1所述的采用uplc-pda同时测定四黄止痢颗粒中多种活性成分和指纹图谱的方法，其特征在于，离心条件为转速10000-15000rpm/min，离心时间为10-20min；
...
【专利技术属性】
技术研发人员：魏秀丽，刘华阳，李有志，魏秀青，杨志昆，张传津，郭玉秋，魏茂莲，李传溥，张志民，章安源，邹明，
申请(专利权)人：山东省饲料兽药质量检验中心，
类型：发明
国别省市：
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