【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医药，涉及一种蝎毒蛋白p0dmr8，编码该蛋白质的核酸分子，含有该核酸分子的表达载体，以及含有该表达载体或基因组整合该核酸分子的宿主细胞，以及蝎毒蛋白p0dmr8的制备方法，含有这种蛋白的药物组合物，以及这种蛋白质和所述药物组合物在抗癫痫、免疫抑制、抗炎、镇痛、心血系统疾病(如心律失常、心力衰竭等)、糖尿病、抗微生物、抗病毒等药物研发中的应用。
技术介绍
1、动物毒素是动物用于自身防御和进行捕食的工具，大部分为多肽类物质。研究发现，由于基因突变、片段的缺失或插入、编码框的移位等，所致的多肽毒素肽链的长短、二硫键的数目与配对方式、部分氨基酸残基的不同修饰等，使得这些动物毒素存在惊人的分子多样性。多肽毒素能够特异地作用于多种靶受体，如离子通道受体、烟碱型乙酰胆碱受体、去甲肾上腺素受体、神经紧张素受体等，成为研究这些受体结构和功能的有利分子工具。同时，由于动物毒素对靶点的高度选择性，以动物毒素为模板设计的药物在治疗慢性疼痛，糖尿病，惊厥以及心血管疾病方面已经显示出了广阔的前景。
2、蝎子在我国有15个品种，主要为东亚钳蝎(mesobuthus martensii)。东亚钳蝎是一种传统的药用动物，系钳蝎科(family buthidae)正钳蝎属(genus mesobuthus)动物，属节肢动物门蛛形纲蝎目，又名马氏正钳蝎或马氏中杀牛蝎。据估计，蝎毒毒素共有100000种之多，而目前为止最多只有1％得到研究。在中医学理论中，东亚钳蝎的干燥品全蝎具有息风镇痉、通络止痛、攻毒散结的功效。现代药理研究表明，蝎毒毒素
3、东亚钳蝎来源的蝎毒蛋白p0dmr8，首次通过二维高效液相色谱——串联质谱技术鉴定得到，截止目前，无其它合成、表达或活性、应用等方面的相关研究。通过序列并对发现，p0dmr8可能激动钾离子通道，并与一种推断的防御素类多肽的序列具有一定的相似性。利用蛋白表达系统制备目的蝎毒蛋白p0dmr8，进而研究其作用，具有新颖性和创造性。
4、参考文献
5、[1]xu j,zhang x,et al.short-chain peptides identification of scorpionbuthus martensi karsch venom by employing high orthogonal 2d-hplc system andtandem mass spectrometry[j].proteomics,2012,12,19-20.
6、[2]jie z,ping l,et al.peptides with therapeutic potential in thevenom ofthe scorpion buthus martensii karsch[j].peptides,2019,115,43-50.
7、[3]王燕平,吕欣然.东亚钳蝎蝎毒分离纯化及药理作用的研究进展[j].中草药,
8、2000,31(1),3.
9、[4]曹征宇.东亚钳蝎蝎毒多肽的分离纯化,结构鉴定,活性测定以及基因表达研
10、究[d].中国协和医科大学,2004.
技术实现思路
1、本专利技术解决的技术问题是提供一种蝎毒蛋白p0dmr8，编码该蛋白质的核酸分子，含有该核酸分子的表达载体，以及含有该表达载体的宿主细胞，以及蝎毒蛋白p0dmr8的制备方法，含有这种蝎毒蛋白的药物组合物，以及这种蛋白质和所述药物组合物在抗癫痫、免疫抑制、抗炎、镇痛、心血系统疾病(如心律失常、心力衰竭等)、糖尿病、抗微生物、抗病毒等药物中的应用。
2、为实现本专利技术之目的，本专利技术采用的技术方案为：
3、本专利技术技术方案的第一方面是提供一种来源于东亚钳蝎的蝎毒蛋白p0dmr8，其特征在于，其氨基酸序列为：
4、(1)序列表中seq id no.1所示的氨基酸序列；
5、(2)序列表中seq id no.1所示的氨基酸序列经替换、缺失或添加1-31个氨基酸形成的生物学功能基本相同的氨基酸序列。
6、进一步在蝎毒蛋白p0dmr8上可进行常规修饰或连接利于检测或纯化的标签和蛋白酶识别位点。
7、更进一步的，所述常规修饰包括乙酰化、酰胺化、烷基化、磷酸化、硫酸化、氧化、甲基化、糖基化、生物素化、荧光基团修饰、聚乙二醇修饰、形成二硫键或二硫键断裂；所述标签包括his标签、gst标签、mbp标签、nus标签、ha标签、igg标签、c-myc标签、sumo标签、flag标签；所述的蛋白酶识别位点包括凝血酶、肠激酶、xa因子、烟草蚀纹病毒蛋白酶、prescission蛋白酶、标记酶、内含肽、3c蛋白酶、sumo蛋白酶、kex-2。
8、本专利技术技术方案的第二方面是提供一种编码第一方面所述蝎毒蛋白的核酸分子。
9、进一步的，所述核酸分子的核苷酸序列为：
10、(1)序列表中seq id no.2所示的核苷酸序列；
11、(2)基于seq id no.2所示的核苷酸序列进行序列优化得到的核苷酸序列；
12、(3)与上述(1)或(2)中的核苷酸序列互补的核苷酸序列。
13、本专利技术技术方案的第三方面是提供一种含第二方面所述核酸分子的表达载体。
14、进一步的，表达载体可以为pet系列、pgex系列、puc系列、pqe系列、pbv系列、pmal系列、ppic9、ppic9k、phil-s1、ppiczα/a、pyam75p，phil-d2、pa0815、ppic3k、ppicz、phwo10、pgapz、pgapza、ppic3.5k、psypu等；优选的表达载体为pgex系列载体和pet系列载体，其中pet-30a(+)载体和pgex-4t-3载体均实现同时可溶性表达和包涵体表达。
15、本专利技术技术方案的第四方面是提供了一种宿主细胞，其特征在于，所述的宿主细胞含有第三方面所述的表达载体或者基因组中整合有第二方面所述的核酸分子。
16、进一步的，所述的宿主细胞包括细菌、酵母、链霉菌、植物细胞或昆虫细胞。
17、更进一步的，所述细菌包括大肠杆菌。
18、感受态宿主细胞可以为bl21系列、transetta系列、rosetta系列、dh5α系列、jm系列、top系列、orgami系列、trans1-t1、tg1、tb1；y11430、mg1003、gs115(aox1)、km71、smd1168等；优选的表达感受态细胞为bl21(de3)。
19、本专利技术技术方案的第五方面是提供了一种高效制备第一方面所述蝎毒蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：
20、a.合成第一方面所述的蝎毒蛋白p0dmr8对应的核酸分子，将核酸分子连入相应的表本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种东亚钳蝎来源的蛋白，其特征在于，所述蝎毒蛋白氨基酸序列为：
2.根据权利要求1的蝎毒蛋白，其特征在于，在蝎毒蛋白氨基酸残基上可进行常规修饰；或在蝎毒蛋白上连接利于检测或纯化的标签和蛋白酶识别位点。
3.根据权利要求2的蝎毒蛋白，其特征在于，所述常规修饰包括乙酰化、酰胺化、烷基化、磷酸化、硫酸化、氧化、甲基化、糖基化、生物素化、荧光基团修饰、聚乙二醇修饰、形成二硫键或二硫键断裂；所述标签包括His标签、GST标签、MBP标签、Nus标签、HA标签、IgG标签、c-Myc标签、SUMO标签、FLAG标签；所述的蛋白酶识别位点包括凝血酶、肠激酶、Xa因子、烟草蚀纹病毒蛋白酶、PreScission蛋白酶、标记酶、内含肽、3c蛋白酶、SUMO蛋白酶、Kex-2。
4.一种编码权利要求1-3任一项所述蝎毒蛋白的核酸分子。
5.根据权利要求4所述的核酸分子，其特征在于，其核苷酸序列为：
6.一种含有权利要求4-5任一项所述核酸分子的表达载体。
7.一种宿主细胞，其特征在于，所述的宿主细胞含有权利要求6所述的表达载
8.根据权利要求7的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包括细菌、酵母、链霉菌、植物细胞或昆虫细胞。
9.根据权利要求8的宿主细胞，其特征在于，所述的细菌包括大肠杆菌。
10.一种制备生产权利要求1-3任一项所述蝎毒蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：
11.根据权利要求10的方法，其特征在于，在步骤A中，所述宿主细胞为大肠杆菌，所述发酵设备包括但不限于摇瓶或发酵罐。
12.根据权利要求10的方法，其特征在于，通过改变载体实现该蝎毒蛋白的包涵体表达或可溶性表达，使用载体pET-30a(+)和载体pGEX-4T-3可同时实现可溶性表达和包涵体表达。
13.根据权利要求10的方法，其特征在于，在步骤B中，所述分离纯化方法包括色谱纯化方法、盐析方法、微滤膜技术纯化方法、透析方法。
14.一种药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物含有权利要求1-3任一项所述的蝎毒蛋白以及药学上可接受的载体或赋形剂。
15.根据权利要求1-3任一项所述的蝎毒蛋白或权利要求4-5任一项所述的核酸分子或权利要求6所述的表达载体或权利要求7-9所述的宿主细胞或权利要求14所述的药物组合物在制备抗癫痫、免疫抑制、抗炎、镇痛、预防或治疗心脑血管系统疾病或糖尿病、抗微生物、抗病毒药物中的应用。
16.根据权利要求15的应用，其特征在于，所述的心脑血管系统疾病包括但不限于脑卒中、心律失常、心力衰竭、心肌炎、高血压性心脏病。
...【技术特征摘要】
1.一种东亚钳蝎来源的蛋白，其特征在于，所述蝎毒蛋白氨基酸序列为：
2.根据权利要求1的蝎毒蛋白，其特征在于，在蝎毒蛋白氨基酸残基上可进行常规修饰；或在蝎毒蛋白上连接利于检测或纯化的标签和蛋白酶识别位点。
3.根据权利要求2的蝎毒蛋白，其特征在于，所述常规修饰包括乙酰化、酰胺化、烷基化、磷酸化、硫酸化、氧化、甲基化、糖基化、生物素化、荧光基团修饰、聚乙二醇修饰、形成二硫键或二硫键断裂；所述标签包括his标签、gst标签、mbp标签、nus标签、ha标签、igg标签、c-myc标签、sumo标签、flag标签；所述的蛋白酶识别位点包括凝血酶、肠激酶、xa因子、烟草蚀纹病毒蛋白酶、prescission蛋白酶、标记酶、内含肽、3c蛋白酶、sumo蛋白酶、kex-2。
4.一种编码权利要求1-3任一项所述蝎毒蛋白的核酸分子。
5.根据权利要求4所述的核酸分子，其特征在于，其核苷酸序列为：
6.一种含有权利要求4-5任一项所述核酸分子的表达载体。
7.一种宿主细胞，其特征在于，所述的宿主细胞含有权利要求6所述的表达载体或者基因组中整合有权利要求4-5任一项所述的核酸分子。
8.根据权利要求7的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包括细菌、酵母、链霉菌、植物细胞或昆虫细胞。
9.根...
【专利技术属性】
技术研发人员：屈晶，杨婉琪，符江，徐勇，孟腾腾，刘凯东，秦云鹏，
申请(专利权)人：中国医学科学院药物研究所，
类型：发明
国别省市：
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