【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及动物模型构建，尤其涉及一种自发性胰腺癌小鼠模型及其构建方法和应用。
技术介绍
1、胰腺癌是最致命的消化道恶性肿瘤类型之一，是癌症相关的高发病率和死亡率，5年生存率仅为11％。胰腺属后腹膜器官，早期无明显特异性症状，同时缺乏高灵敏度的生物标志物，因此大多数患者在确诊时已丧失手术机会，这为胰腺癌的诊治带来了极大的困难。目前国际指南对于胰腺癌的治疗主要还是停留在手术和化疗等方式，但治疗效果并不乐观，因此探究胰腺癌微环境的形成机制并寻找新的治疗靶点成为诊治胰腺癌急需解决的问题。
2、近年来许多研究表明rna结合基序蛋白-10(rbm10)对胰腺癌的发展及维持起到至关重要的作用。rbm10主要通过选择性剪接来调控相关基因的转录，从而调控肿瘤细胞的增殖、分化、凋亡及代谢，通常与良好预后相关。kras在胰腺癌患者中突变率能达到95％，是最常见的高度扩增的癌基因之一。kras不仅调控肿瘤细胞本身也可对肿瘤微环境中的各类细胞产生影响，在多种癌症的发生发展中都发挥着重要作用。因此，可以构建新基因型的胰腺癌模型小鼠，为胰腺癌成瘤机制研究和靶向药物研发提供基础。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是针对现有技术中的不足，提供一种自发性胰腺癌小鼠模型及其构建方法和应用。
2、为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案是：
3、第一方面是提供一种自发性胰腺癌小鼠模型的构建方法，包括如下步骤：将rbm10flox/+杂合阳性鼠与胰腺特异性突变kras的小鼠进行杂交
4、进一步地，rbm10flox/+杂合阳性鼠的构建方法包括：将c57bl/6j-rbm10flox/+条件性敲除小鼠与c57bl/6品系鼠杂交，得到rbm10flox/+杂合阳性鼠。
5、更进一步地，所述c57bl/6j-rbm10flox/+条件性敲除小鼠的构建方法包括：在rbm10基因的exon3两侧非编码区将loxp插入，得到c57bl/6j-rbm10flox/+条件性敲除小鼠。
6、进一步地，所述胰腺特异性突变kras的小鼠的构建方法包括：将c57bl/6j-lsl-krasg12d小鼠与胰腺特异性打靶的pdx1-cre工具鼠杂交，f1代为胰腺特异性突变kras的小鼠。
7、更进一步地，所述c57bl/6j-lsl-krasg12d小鼠的构建方法包括：在kras基因将loxp-long stop–loxp插入intron 1，并在exon2中引入g12d点突变，得到kras基因定点敲入lsl-g12d的转基因小鼠c57bl/6j-lsl-krasg12d。
8、进一步地，对自发性胰腺癌小鼠模型的鉴定方法为：使用pcr对rbm10flox/+杂合阳性鼠与胰腺特异性突变kras的小鼠杂交得到的f1代的鼠尾dna进行鉴定。
9、第二方面是提供一种自发性胰腺癌小鼠模型，采用上述的构建方法构建。
10、第三方面是提供上述自发性胰腺癌小鼠模型在筛选治疗胰腺癌药物中的应用。
11、进一步地，自发性胰腺癌优选为胰腺导管癌。
12、第四方面是提供上述自发性胰腺癌小鼠模型在研究胰腺癌致病机理中的应用。
13、进一步地，自发性胰腺癌优选为胰腺导管癌。
14、本专利技术采用以上技术方案，与现有技术相比，具有如下技术效果：
15、本专利技术提供的自发性胰腺癌小鼠模型的构建方法，同时将rbm10基因敲除和kras基因突变两个特征应用于同一小鼠个体上，构建出能够自发且迅速形成胰腺癌的小鼠模型，更好地为胰腺癌成瘤机制研究和靶向药物研发提供基础。
16、本专利技术提供的自发性胰腺癌小鼠模型重复性高、可控性好，是推动胰腺癌研究进展及最终向临床转化的重要桥梁。
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1.一种自发性胰腺癌小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：将RBM10flox/+杂合阳性鼠与胰腺特异性突变Kras的小鼠进行杂交，F1代为所述自发性胰腺癌小鼠模型。
2.根据权利要求1所述的自发性胰腺癌小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述RBM10flox/+杂合阳性鼠的构建方法包括：将C57BL/6J-RBM10flox/+条件性敲除小鼠与C57BL/6品系鼠杂交，得到RBM10flox/+杂合阳性鼠。
3.根据权利要求2所述的自发性胰腺癌小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述C57BL/6J-RBM10flox/+条件性敲除小鼠的构建方法包括：在RBM10基因的exon3两侧非编码区将Loxp插入，得到C57BL/6J-RBM10flox/+条件性敲除小鼠。
4.根据权利要求1所述的自发性胰腺癌小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述胰腺特异性突变Kras的小鼠的构建方法包括：将C57BL/6J-LSL-KrasG12D小鼠与胰腺特异性打靶的Pdx1-Cre工具鼠杂交，F1代为胰腺特异性突变Kras的小鼠。
5.根据权利要求
6.根据权利要求1所述的自发性胰腺癌小鼠模型的构建方法，其特征在于，对所述自发性胰腺癌小鼠模型的鉴定方法为：使用PCR对RBM10flox/+杂合阳性鼠与胰腺特异性突变Kras的小鼠杂交得到的F1代的鼠尾DNA进行鉴定。
7.一种自发性胰腺癌小鼠模型，其特征在于，根据权利要求1-6任一项所述的构建方法构建。
8.如权利要求7所述的自发性胰腺癌小鼠模型在筛选治疗胰腺癌药物中的应用。
9.如权利要求7所述的自发性胰腺癌小鼠模型在研究胰腺癌致病机理中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种自发性胰腺癌小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：将rbm10flox/+杂合阳性鼠与胰腺特异性突变kras的小鼠进行杂交，f1代为所述自发性胰腺癌小鼠模型。
2.根据权利要求1所述的自发性胰腺癌小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述rbm10flox/+杂合阳性鼠的构建方法包括：将c57bl/6j-rbm10flox/+条件性敲除小鼠与c57bl/6品系鼠杂交，得到rbm10flox/+杂合阳性鼠。
3.根据权利要求2所述的自发性胰腺癌小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述c57bl/6j-rbm10flox/+条件性敲除小鼠的构建方法包括：在rbm10基因的exon3两侧非编码区将loxp插入，得到c57bl/6j-rbm10flox/+条件性敲除小鼠。
4.根据权利要求1所述的自发性胰腺癌小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述胰腺特异性突变kras的小鼠的构建方法包括：将c57bl/6j-lsl-krasg12d小鼠与胰腺特异性打靶的pdx1-cre...
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