【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于多糖。更具体地，涉及软珊瑚多糖在促进双歧杆菌增殖中的应用。
技术介绍
1、双歧杆菌(bifidobacterium)为革兰氏阳性厌氧细菌，广泛存在于人体肠道内，是一种重要的益生菌。双歧杆菌可以在肠道内发酵产生短链脂肪酸等有益代谢产物，有助于维持肠道环境稳定，对健康有着多方面的积极影响。《伯杰氏系统细菌学手册》中提到，双歧杆菌含32个种，包括动物双歧杆菌(bifidobacterium animalis)、长双歧杆菌(bifidobacterium longum)、青春双歧杆菌(bifidobacterium adolescentis)以及短双歧杆菌(bifidobacterium breve)等。现常通过摄入含双歧杆菌的酸奶等饮品来促进人体自身固有双歧杆菌的生长繁殖。但酸奶中所含双歧杆菌的种类相对单一，其活性也无法保证。因此，有必要挖掘可有效促进双歧杆菌增殖的益生元。
2、海洋中的珊瑚礁资源丰富，但对珊瑚提取物，如珊瑚多糖等的研究却相对较少。豆荚软珊瑚(lobophytum sp.)是一种海洋低等无脊椎动物，广泛分布于热带和亚热带海域中，在适宜生存条件下，其寿命长达数百年。技术人员对从豆荚软珊瑚中提取到的多糖进行试验发现，所得多糖能够促进raw264.7巨噬细胞增殖，促进细胞分泌no以及il-1β、tnf-α、il-6等细胞因子，提高细胞吞噬能力，具有免疫调节活性。但目前尚未见有关于软珊瑚多糖可以促进双歧杆菌增殖的报道。
技术实现思路
1、本专利技术为丰富
2、本专利技术的第一个目的是提供软珊瑚多糖在促进双歧杆菌增殖中的应用。
3、本专利技术的第二个目的是提供所述软珊瑚多糖在制备用于促进双歧杆菌增殖的产品中的应用。
4、本专利技术的第三个目的是提供软珊瑚多糖在调节肠道菌群平衡中的应用。
5、本专利技术的第四个目的是提供所述软珊瑚多糖在制备用于调节肠道菌群平衡的产品中的应用。
6、本专利技术的第五个目的是提供所述软珊瑚多糖在制备用于改善与双歧杆菌丰度下降相关的疾病的药物中的应用。
7、本专利技术上述目的通过以下技术方案实现：
8、本专利技术利用从豆荚软珊瑚中提取得到的软珊瑚多糖分别对动物双歧杆菌、青春双歧杆菌、短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌和长双歧杆菌进行培养发现，所述软珊瑚多糖可以促进上述双歧杆菌的增殖。因此，本专利技术请求保护所述软珊瑚多糖在促进双歧杆菌增殖中的应用。
9、具体地，所述软珊瑚多糖提取自豆荚软珊瑚。
10、具体地，所述双歧杆菌包括动物双歧杆菌、青春双歧杆菌、短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌和长双歧杆菌。
11、具体地，本专利技术所述软珊瑚多糖的提取包括以下步骤：
12、s1.除去豆荚软珊瑚样品中的脂质类成分和色素；
13、s2.对步骤s1所得产物依次进行加热水提和醇沉，收集醇沉沉淀，得软珊瑚粗提多糖；
14、s3.将步骤s2所得软珊瑚粗多糖复溶除蛋白，得脱蛋白软珊瑚粗多糖；
15、s4.取步骤s3所得脱蛋白软珊瑚粗多糖，使用deae-52纤维素离子交换柱分离，以水或氯化钠溶液洗脱，得软珊瑚多糖。
16、具体地，本专利技术所述软珊瑚多糖的提取还包括以下步骤：
17、s5.取用水洗脱得到的软珊瑚多糖，使用葡聚糖凝胶色谱柱分离，以氯化钠溶液洗脱。
18、具体地，步骤s2醇沉所用醇溶液为乙醇溶液。
19、具体地，步骤s3所述除蛋白方法为：在复溶所得溶液中加蛋白酶酶解，离心除去沉淀的蛋白质，再加脱蛋白试剂除尽剩余的蛋白。
20、具体地，所述蛋白酶为木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶或碱性蛋白酶。
21、具体地，所述脱蛋白试剂为sevag试剂、三氟三氯乙烷或三氯醋酸；所述sevag试剂由体积比为4：1的氯仿与正丁醇组成。
22、其中，步骤s1具体包括：将新鲜豆荚软珊瑚自然晾干粉碎后过40目筛，得豆荚软珊瑚粉末；称取豆荚软珊瑚粉末至滤纸筒内，加入4倍体积的石油醚进行索氏提取，去除软珊瑚中的脂质类成分和部分色素分子；85℃虹吸7～9次后结束反应，将处理过的豆荚软珊瑚粉末烘干。
23、步骤s2具体包括：将步骤s1中所得豆荚软珊瑚粉末按料液比为1g：20ml的比例加水混合，90℃提取4h；重复提取2次，过滤，合并2次的滤液；60℃减压浓缩，得浓缩液；浓缩液中加4倍体积的95％乙醇，得到含75％乙醇的醇沉溶液，4℃冰箱放置过夜；5000rpm离心20min，弃去上清，所得沉淀即为软珊瑚粗提多糖。
24、步骤s3具体包括：用去离子水复溶所得软珊瑚粗提多糖，加入终浓度为1mg/ml的木瓜蛋白酶，在60℃下持续搅拌反应4h；反应结束后，100℃加热15min，冷却至室温(25～30℃)后，5000rpm离心20min，取上清；
25、在上清中按10:1的体积比(上清：sevag试剂＝10：1)加入sevag试剂(氯仿与正丁醇的体积比为4：1)，涡旋5min，5000rpm离心15min；离心后的溶液分三层，下层为有机试剂层，中层为蛋白质层，上层为软珊瑚多糖层；取软珊瑚多糖层，再次按10:1的体积比(软珊瑚多糖层：sevag试剂＝10：1)加入sevag试剂，重复提取4～5次，除尽溶液中的蛋白质；将除尽蛋白质的软珊瑚多糖层溶液用旋转蒸发仪旋干，除去其中含有的有机试剂，用少量去离子水复溶，用分子截留量为8000da的透析袋透析24h，每3h换一次水；真空冷冻干燥，得脱蛋白软珊瑚粗多糖(lcps)。
26、步骤s4具体包括：取所得脱蛋白软珊瑚粗多糖加水复溶，使其终浓度为80mg/ml；以5ml上样量，用deae-52纤维素离子交换柱进行分离，用水进行洗脱。
27、步骤s5具体包括：取deae-52纤维素离子交换柱分离所得软珊瑚多糖，加水配制为终浓度为12mg/ml的软珊瑚多糖溶液；以5ml上样量，用sephacryl300hr葡聚糖凝胶柱分离，用0.1m的nacl溶液进行洗脱，每个组分的软珊瑚多糖分别用自动收样器收集60管，收样速度为0.5ml/min，每管10min，保留第17～23管所得组分。
28、具体地，按质量比计，本专利技术所述软珊瑚多糖中的单糖组分为：鼠李糖：葡萄糖醛酸：葡萄糖：半乳糖：木糖＝(0.15～0.20)：(0.20～0.25)：(0.01～0.05)：(98.5～99.0)：(0.45～0.50)：(0.25～0.30)。
29、在本专利技术的一些优选的实施方式中，按质量比计，所述软珊瑚多糖中的单糖组分为：鼠李糖：葡萄糖醛酸：葡萄糖：半乳糖：木糖＝0.19：0.21：0.05：98.8：0.46：0.26。
30、具体地，本专利技术所述软珊瑚多糖的分子量为(4.90±0.2)×106da。
31、在本专利技术的一些优选的实施方式中本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.软珊瑚多糖在促进双歧杆菌增殖中的应用，其特征在于，所述软珊瑚多糖提取自豆荚软珊瑚；所述双歧杆菌包括动物双歧杆菌、青春双歧杆菌、短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌和长双歧杆菌。
2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述软珊瑚多糖的提取包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述应用，其特征在于，所述软珊瑚多糖的提取还包括以下步骤：
4.根据权利要求2所述应用，其特征在于，步骤S2醇沉所用醇溶液为乙醇溶液。
5.根据权利要求2所述应用，其特征在于，步骤S3所述除蛋白方法为：在复溶所得溶液中加蛋白酶酶解，离心除去沉淀的蛋白质，再加脱蛋白试剂除尽剩余的蛋白。
6.根据权利要求5所述应用，其特征在于，所述蛋白酶为木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶或碱性蛋白酶；所述脱蛋白试剂为Sevag试剂、三氟三氯乙烷或三氯醋酸。
7.权利要求1中所述的软珊瑚多糖在制备用于促进双歧杆菌增殖的产品中的应用，其特征在于，所述双歧杆菌包括动物双歧杆菌、青春双歧杆菌、短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌和长双歧杆菌。
8.权利要求1中所述的软珊瑚多糖在调
9.权利要求1中所述的软珊瑚多糖在制备用于调节肠道菌群平衡的产品中的应用，其特征在于，所述调节肠道菌群平衡是通过促进双歧杆菌的增殖实现的；所述双歧杆菌包括动物双歧杆菌、青春双歧杆菌、短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌和长双歧杆菌。
10.权利要求1中所述的软珊瑚多糖在制备用于改善与双歧杆菌丰度下降相关的疾病的药物中的应用，其特征在于，所述双歧杆菌包括动物双歧杆菌、青春双歧杆菌、短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌和长双歧杆菌。
...【技术特征摘要】
1.软珊瑚多糖在促进双歧杆菌增殖中的应用，其特征在于，所述软珊瑚多糖提取自豆荚软珊瑚；所述双歧杆菌包括动物双歧杆菌、青春双歧杆菌、短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌和长双歧杆菌。
2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述软珊瑚多糖的提取包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述应用，其特征在于，所述软珊瑚多糖的提取还包括以下步骤：
4.根据权利要求2所述应用，其特征在于，步骤s2醇沉所用醇溶液为乙醇溶液。
5.根据权利要求2所述应用，其特征在于，步骤s3所述除蛋白方法为：在复溶所得溶液中加蛋白酶酶解，离心除去沉淀的蛋白质，再加脱蛋白试剂除尽剩余的蛋白。
6.根据权利要求5所述应用，其特征在于，所述蛋白酶为木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶或碱性蛋白酶；所述脱蛋白试剂为sevag试剂、三氟三氯乙烷或三氯醋酸。
7.权利要求1中所述的软...
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