【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医药领域，具体涉及一种用于精准递送化疗药和核酸药的抗肿瘤纳米药物及其制备方法。
技术介绍
1、前列腺癌(pca)是男性发病率最高的癌症之一，目前治疗pca的主要采用激素治疗，首先采用内分泌治疗(adt)，以及进一步的新内分泌治疗(nht)，然而大多数pca后期会失去对激素治疗的敏感性。随后，针对激素治疗治疗无效的晚期pca的主要治疗方案变成了以多西他赛为基础的化疗。
2、多西他赛是一种基于紫杉类药物的抗癌药物，自2004年首次证明其可延长患者生命以来，被广泛用于治疗晚期前列腺癌。虽然多西他赛全身化疗在前列腺治疗中占据重要地位，但静脉用药时低下的细胞内化效率，频繁高剂量药物使用会导致全身严重副反应，包括免疫系统抑制、神经毒性等，进而使患者更快进入化疗耐药阶段，影响治疗效果，降低生活质量。
3、因此近年来，纳米材料因为其精准靶向性和特异性，在肿瘤诊疗等领域备受关注。然而，在纳米药物领域常用的同源靶向策略，其靶向前列癌的效率并不令人满意；同时单纯递送多西他赛也会存在治疗机制单一的问题。
4、psma是一种ii型整体膜蛋白，许多实体肿瘤特别是在雄激素非依赖型、转移性和晚期pca中特异性高表达，因此psma靶向放疗得到广泛应用。同时，基因沉默药物如sirna等在肿瘤治疗中也得到了广泛的应用。
5、所以目前迫切需要一种具有良好靶向性以及协同抗肿瘤能力的治疗手段。
6、细胞膜伪装技术被广泛用来构建纳米药物制剂，用于肿瘤等疾病的诊断与治疗。借其同源识别和归巢特性，癌细胞膜
7、小干扰rna(sirna)，也被称为沉默rna、短干扰rna或非编码rna。属于核酸药物的一种，其拥有特定长度和序列，sirna的特定长度为21～25bp。这些sirna可以通过rna干扰作用特异性沉默目标基因的表达来改善化疗药物的抗癌效果。但由于sirna的阴离子电荷，以及它们对存在于血液和组织中的rna酶的易感性，使得治疗性rna难以有效地进入细胞并单独发挥作用。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种用于精准递送化疗药和核酸药的抗肿瘤纳米药物及其制备方法。
2、本专利技术提供了一种纳米药物，所述抗肿瘤纳米药物是以介孔聚多巴胺纳米颗粒为载体，携载多西他赛以及抑制pttg1 mrna表达的sirna，再用聚乙二醇化脂质体包裹后，连接与psma蛋白特异性结合的适配体制备而成的纳米材料。
3、进一步地，所述抑制pttg1 mrna表达的sirna为sirna1，其核苷酸序列如seq idno.1所示；与psma蛋白特异性结合的适配体其核酸序列如seq id no.2所示。
4、进一步地，所述介孔聚多巴胺是向乙醇水混合溶液中加入f127和间三甲苯，室温搅拌，然后加入多巴胺和tris溶液，室温搅拌，离心后，用乙醇/丙酮混合液萃取，离心得到介孔聚多巴胺纳米粒。
5、进一步地，所述聚乙二醇化脂质体由总脂质体在缓冲溶液中水合后，经超声制备得到，优选地，总脂质体由卵磷脂酰胆碱、胆固醇和马来酰亚胺聚乙二醇磷脂制备得到，其摩尔比5-10:2-4:1-2；
6、优选地，所述卵磷脂酰胆碱、胆固醇和马来酰亚胺聚乙二醇磷脂摩尔比7:3:1.55。
7、进一步地，所述聚乙二醇化脂质体制备方法如下：将卵磷脂酰胆碱、胆固醇和马来酰亚胺聚乙二醇磷脂溶于有机溶剂中，蒸发有机溶剂后，加入缓冲液水合、超声即得；
8、优选地，所述有机溶剂为体积比为1:1的氯仿和乙醇的混合溶液；所述缓冲液为ph7.4的4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液；超声条件为超声功率480w，温度达到30摄氏度时，停止超声，温度降到20摄氏度时，继续超声，总接受超声时间15min。
9、进一步地，所述纳米药物按照如下方法制备：
10、1)将介孔聚多巴胺与多西他赛溶于有机溶剂中，搅拌，洗涤，离心即得负载有多西他赛的介孔聚多巴胺md，多西他赛的负载率为48±4％；
11、2)取md与抑制pttg1 mrna表达的sirna溶于缓冲溶液中，搅拌孵育，离心，得到负载有多西他赛和抑制pttg1 mrna表达的sirna的介孔聚多巴胺mds；
12、3)将聚乙二醇化脂质体加入到mds的pbs溶液后，使用脂质体挤出机挤出，离心得到得到聚乙二醇化脂质体包裹的负载有多西他赛和抑制pttg1 mrna表达的sirna的介孔聚多巴胺mds@l；
13、4)取mds@l羧基活化后与psma蛋白特异性结合的适配体的磷酸盐缓冲溶液混合，孵育，离心即得；
14、优选地，所述挤出机使用的100nm过滤器。
15、本专利技术还提供了一种制备上述的纳米药物的方法，制备方法如下：
16、1)将介孔聚多巴胺与多西他赛溶于有机溶剂中，搅拌，洗涤，离心即得负载有多西他赛的介孔聚多巴胺md，多西他赛的负载率为48±4％；
17、2)取md的缓冲溶液与抑制pttg1 mrna表达的sirna的缓冲溶液混合后，搅拌，孵育，得到负载有多西他赛和抑制pttg1 mrna表达的sirna的介孔聚多巴胺mds；
18、3)将聚乙二醇化脂质体加入到mds的pbs溶液后，使用脂质体挤出机加100nm过滤器挤出，离心得到得到聚乙二醇化脂质体包裹的负载有多西他赛和抑制pttg1 mrna表达的sirna的介孔聚多巴胺mds@l；
19、4)取羧基活化后的mds@l与psma蛋白特异性结合的适配体的磷酸盐缓冲溶液混合，孵育，离心即得。
20、进一步地，步骤1)中介孔聚多巴胺与多西他赛比例为100±10mg：200mg；所述有机溶剂为甲醇，md中多西他赛的负载率为48±2％；
21、步骤2)中，所述md的缓冲溶液与抑制pttg1 mrna表达的sirna的缓冲溶液体积比为1ml:5μl，md的缓冲溶液中md的浓度以介孔聚多巴胺为标准的200微克/毫升，抑制pttg1mrna表达的sirna的缓冲溶液中抑制pttg1 mrna表达的sirna的浓度为100nm；
22、步骤3)mds的pbs溶液中mds浓度为0.5mg/ml，聚乙二醇化脂质体与mds的pbs溶液体积比为1:0.5-2；优选为1:1；
23、步骤4)中所述psma蛋白特异性结合的适配体与羧基活化后的mds@l的质量比为10:10-10000，离心条件为8000-12000rpm 12-17min；优选的psma蛋白特异性结合的适配体与羧基活化后的mds@l的质量比为10：50±30，离心条件为10000rpm 15min。
24、本专利技术还提供了一种上述的纳米药物在制备抗肿瘤的药物中的用途。
25、进一步地，上述抗肿瘤的药物为抗前列腺肿瘤的药物。
2本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种纳米药物，其特征在于，所述抗肿瘤纳米药物是以介孔聚多巴胺纳米颗粒为载体，携载多西他赛以及抑制PTTG1 mRNA表达的siRNA，再用聚乙二醇化脂质体包裹后，连接与PSMA蛋白特异性结合的适配体制备而成的纳米材料。
2.根据权利要求1所述的纳米药物，其特征在于，所述抑制PTTG1mRNA表达的siRNA为siRNA1，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；与PSMA蛋白特异性结合的适配体其核酸序列如SEQ ID NO.2所示。
3.根据权利要求1所述的纳米药物，其特征在于，所述介孔聚多巴胺是向乙醇水混合溶液中加入F127和间三甲苯，室温搅拌，然后加入多巴胺和Tris溶液，室温搅拌，离心后，用乙醇/丙酮混合液萃取，离心得到介孔聚多巴胺纳米粒。
4.根据权利要求1所述的纳米药物，其特征在于，所述聚乙二醇化脂质体由总脂质体在缓冲溶液中水合后，经超声制备得到，优选地，总脂质体由卵磷脂酰胆碱、胆固醇和马来酰亚胺聚乙二醇磷脂制备得到，其摩尔比5-10:2-4:1-2；
5.根据权利要求1所述的纳米药物，其特征在于，
6.
7.制备权利要1-6任一项所述的纳米药物的方法，其特征在于，制备方法如下：
8.制备权利要1-7任一项所述的纳米药物的方法，其特征在于，步骤1)中介孔聚多巴胺与多西他赛比例为100±10mg：200mg；所述有机溶剂为甲醇，MD中多西他赛的负载率为48±2％；
9.根据权利要求1-6任一项所述的纳米药物在制备抗肿瘤的药物中的用途。
10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于，所述抗肿瘤的药物为抗前列腺肿瘤的药物。
...【技术特征摘要】
1.一种纳米药物，其特征在于，所述抗肿瘤纳米药物是以介孔聚多巴胺纳米颗粒为载体，携载多西他赛以及抑制pttg1 mrna表达的sirna，再用聚乙二醇化脂质体包裹后，连接与psma蛋白特异性结合的适配体制备而成的纳米材料。
2.根据权利要求1所述的纳米药物，其特征在于，所述抑制pttg1mrna表达的sirna为sirna1，其核苷酸序列如seq id no.1所示；与psma蛋白特异性结合的适配体其核酸序列如seq id no.2所示。
3.根据权利要求1所述的纳米药物，其特征在于，所述介孔聚多巴胺是向乙醇水混合溶液中加入f127和间三甲苯，室温搅拌，然后加入多巴胺和tris溶液，室温搅拌，离心后，用乙醇/丙酮混合液萃取，离心得到介孔聚多巴胺纳米粒。
4.根据权利要求1所述的纳米药物，其特征在于，所述聚乙二醇化脂质体由...
【专利技术属性】
技术研发人员：王益民，代亮，宋紫暄，马王腾，高大威，
申请(专利权)人：秦皇岛市第一医院，
类型：发明
国别省市：
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