【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及艾塞那肽纯化，具体涉及一种艾塞那肽的纯化方法。
技术介绍
1、胰高血糖素样肽-1(glucagon-likepeptide-1，glp-1)是由人胰高血糖素基因编码，并由肠道l细胞分泌的一种肽类激素，有两种生物活性形式，分别为glp-1(7-37)和glp-1(7-36)酰胺，glp-1约80％的循环活性来自glp-1(7-36)酰胺。目前已知的glp-1具有促进胰岛素基因的转录，增加胰岛素的生物合成和分泌等作用。艾塞那肽(exenatide)为胰高血糖素样肽-1(glp-1)类似物exendin-4的人工合成品，由39个氨基酸组成，其在体外显示可以结合并活化已知的人类glp-1受体，能够通过包括camp或其他细胞内信号传导机制使葡萄糖依赖性胰岛素合成及胰岛β细胞在体内分泌胰岛素增加，在葡萄糖浓度升高的情况下，艾塞那肽可促进胰岛素从β细胞中释放，体内给药后艾塞那肽模拟glp-1的某种抗高血糖药作用，因此艾塞那肽注射液具有降低ⅱ型糖尿病患者糖化血红蛋白(hba1c)和餐后血糖，并能减轻体重的作用，目前，艾塞那肽的制备大多采用固相合成方法合成，但产生了大量不易分离的缺失肽和氧化肽。
2、现有技术公开了一种醋酸艾塞那肽的分离纯化方法，采用磷酸为流动相纯化艾塞那肽，提高了艾塞那肽的收率，但得到的艾塞那肽纯度低。
技术实现思路
1、因此，本专利技术要解决的技术问题在于克服现有技术中的艾塞那肽纯度低的缺陷，从而提供一种艾塞那肽的纯化方法。
2、本专利技术提
3、在其中一些实施例中，所述艾塞那肽粗品的来源为采用固相合成方法合成得到的。
4、可选的，所述艾塞那肽粗品采用苏州默迪夫生物科技有限公司合成得到的。
5、在其中一些实施例中，所述碳酸氢铵水溶液的浓度为5～15mm，优选的，所述碳酸氢铵水溶液的浓度为10mm。
6、在其中一些实施例中，所述乙腈水溶液的浓度为5～15v/v％。
7、在其中一些实施例中，第二次洗脱为梯度洗脱。
8、可选的，所述第二次洗脱的程序为，
9、0-30min，流动相a和流动相b的体积比为(70～80)：(20～30)；30-45min，流动相a和流动相b的体积比为(65～75)：(25～35)；45-55min，流动相a和流动相b的体积比为(45～55)：(45～55)；55-60min，流动相a和流动相b的体积比为(5～15)：(85～95)。
10、在其中一些实施例中，所述第二次洗脱的流速为10～30ml/min。
11、所述第二次洗脱中上样的样品为第一次洗脱得到的洗脱液与水的混合液，其中，洗脱液的浓度为25～40v/v％。
12、在其中一些实施例中，第一次洗脱的流动相a包括磷酸水溶液，流动相b包括乙腈。
13、在其中一些实施例中，所述磷酸水溶液的浓度为0.05～0.2v/v％。
14、在其中一些实施例中，第一次洗脱为梯度洗脱，
15、所述第一次洗脱的程序为，0-5min，流动相a和流动相b的体积比为(90～95)：(5～10)；5-6min，流动相a和流动相b的体积比为(70～75)：(25～30)；6-46min，流动相a和流动相b的体积比为(60～70)：(30～40)；46-86min，流动相a和流动相b的体积比为(50～60)：(40～50)。
16、在其中一些实施例中，所述第一次洗脱的流速为10-30ml/min。
17、在其中一些实施例中，所述第一次洗脱中艾塞那肽粗品的浓度为10～30mg/ml。
18、在其中一些实施例中，第一次洗脱的艾塞那肽粗品上样量为100～200mg。
19、在其中一些实施例中，所述第一次洗脱后，第二次洗脱前，还包括对色谱柱平衡的步骤。
20、可选的，对色谱柱平衡时，采用5～10v/v％的乙腈水溶液为平衡液。
21、在其中一些实施例中，所述反相填料包括硅胶键合十八烷基硅烷、丁烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷中的至少一种。所述反相填料的粒径为8～12μm，孔径为
22、在其中一些实施例中，色谱柱的柱温为20～30℃，所述色谱柱的规格为(10～30)mm×250mm。
23、可选的，检测波长为230nm。
24、本专利技术技术方案，具有如下优点：
25、本专利技术提供的艾塞那肽的纯化方法，以反相填料为固定相，采用高效液相色谱法对艾塞那肽粗品至少进行两次洗脱，其中，第二次洗脱的流动相a为碳酸氢铵水溶液，流动相b为乙腈水溶液。由于艾塞那肽分子中有两性基团，采用反相填料对艾塞那肽进行纯化时，缓冲体系的选择决定着艾塞那肽的纯化效果，本专利技术采用至少两次洗脱的方式对艾塞那肽进行纯化，其中，第二次洗脱时采用的流动相分别为碳酸氢铵水溶液和乙腈水溶液，能够去除第一次洗脱得到的洗脱液中无法去除的氧化肽和缺失肽等杂质，提高艾塞那肽纯度。
26、本专利技术提供的艾塞那肽的纯化方法，所述碳酸氢铵水溶液中碳酸氢铵的摩尔浓度为5-15mm，优选为10mm。本专利技术提供以10mm碳酸氢铵水溶液为第二次洗脱的洗脱相，不仅能够提高艾塞那肽的纯度，还能够提高艾塞那肽的收率。
27、本专利技术提供的艾塞那肽的纯化方法，工艺简单，适宜于工业化生产。
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1.一种艾塞那肽的纯化方法，其特征在于，以反相填料为固定相，采用高效液相色谱法对艾塞那肽粗品进行至少两次洗脱，其中，第二次洗脱的流动相A为碳酸氢铵水溶液，流动相B为乙腈水溶液。
2.根据权利要求1所述的艾塞那肽的纯化方法，其特征在于，所述碳酸氢铵水溶液的浓度为5～15mM；和/或，
3.根据权利要求2所述的艾塞那肽的纯化方法，其特征在于，所述第二次洗脱的程序为，
4.根据权利要求3所述的艾塞那肽的纯化方法，其特征在于，所述碳酸氢铵水溶液的浓度为10mM；和/或，
5.根据权利要求4所述的艾塞那肽的纯化方法，其特征在于，第一次洗脱的流动相A为磷酸水溶液，流动相B为乙腈；
6.根据权利要求5所述的艾塞那肽的纯化方法，其特征在于，所述磷酸水溶液的浓度为0.05～0.2v/v％；和/或，
7.根据权利要求6所述的艾塞那肽的纯化方法，其特征在于，所述第一次洗脱的程序为，
8.根据权利要求6所述的艾塞那肽的纯化方法，其特征在于，所述第一次洗脱的流速为10～30mL/min；和/或，
9.根据权利要
10.根据权利要求9所述的艾塞那肽的纯化方法，其特征在于，色谱柱的柱温为20～30℃；和/或，
...【技术特征摘要】
1.一种艾塞那肽的纯化方法，其特征在于，以反相填料为固定相，采用高效液相色谱法对艾塞那肽粗品进行至少两次洗脱，其中，第二次洗脱的流动相a为碳酸氢铵水溶液，流动相b为乙腈水溶液。
2.根据权利要求1所述的艾塞那肽的纯化方法，其特征在于，所述碳酸氢铵水溶液的浓度为5～15mm；和/或，
3.根据权利要求2所述的艾塞那肽的纯化方法，其特征在于，所述第二次洗脱的程序为，
4.根据权利要求3所述的艾塞那肽的纯化方法，其特征在于，所述碳酸氢铵水溶液的浓度为10mm；和/或，
5.根据权利要求4所述的艾塞那肽的纯化方法，其特征在于，第一次洗脱的流动相a为磷酸水溶液，流动相b为...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈玉琛，秦超，李乐，
申请(专利权)人：苏州默迪夫生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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