【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域。具体地说，本专利技术涉及一种具有抑制atg4b蛋白酶活性的抑制剂及包含其的纳米制剂的应用。
技术介绍
1、atg4b是自噬体形成过程中调控lc3成熟及去脂化的关键蛋白。细胞自噬是人体内普遍存在的一种生物学现象，对于维持细胞稳态及调节细胞物质能量代谢具有重要意义。自噬紊乱可导致多种人类重大疾病的发生，如肿瘤、神经退行性疾病、衰老及微生物感染等。自噬是一个动态变化的过程，该过程的发生发展需要一系列自噬相关基因(autophagy-related genes，atgs)编码的自噬相关蛋白(autophagy-related proteins，atgs)的参与。其中，atg4b在自噬体的形成和成熟过程中发挥着关键作用，因为atg4b同时参与lc3的脂化与去脂化处理过程。atg4已被报道与肿瘤、神经退行性疾病、肺纤维化、感染等多种疾病密切相关。特别在肿瘤治疗领域，atg4b与结直肠癌、乳腺癌、肺癌、胃癌等常见的癌症的关系均有报道，在多种癌症中都被认为是致癌基因，敲低atg4b或使用atg4b的小分子抑制剂可以降低肿瘤细胞的存活率。以上研究表明，atg4b可能是肿瘤治疗中的潜在靶点。目前已有多篇关于atg4b抑制剂的报道，但这些报道的atg4b小分子抑制剂存在特异性差、结构各异、抗肿瘤效价低等缺点，限制了其临床应用。因此，atg4b抑制剂的开发对各类肿瘤治疗具有重要意义。
2、申请号为cn201710071824.1的中国专利，公开了一种自噬关键蛋白atg4b酶抑制剂及其应用，该抑制剂在100μm的条
技术实现思路
1、本专利技术解决的问题在于通过前期铜配合物类atg4b抑制剂的筛选，提供一种铜配合物类atg4b酶抑制剂及其类似物，可用于肿瘤治疗药物的制备。
2、本专利技术的技术方案如下：
3、一种铜配合物作为atg4b酶抑制剂的应用，所述铜配合物的化学结构如式(i)所示：
4、
5、其中，其中，r1，r2独立地选自氢、卤素、c1～6烷氧基、取代或未取代的苯基、取代或未取代的c1～6烷基中的一种。
6、优选地，所述苯基、c1～6烷基含有如下取代基：卤素、c1～3烷基、c1～3烷氧基中的一种或多种。
7、优选地，所述铜配合物的化学结构式为：
8、
9、所述的抑制剂或包含其的纳米制剂在制备治疗肿瘤药物中的应用。
10、优选地，所述肿瘤为宫颈癌、结肠癌、结直肠腺癌和肺癌中的一种或两种以上。
11、优选地，所述肺癌为egfr-tki耐药的非小细胞肺癌或者耐药小细胞肺癌。
12、优选地，所述egfr-tki耐药的非小细胞肺癌为a549 egfr-tki耐药细胞，所述耐药小细胞肺癌为h69ar细胞。
13、优选地，所述纳米制剂是将抑制剂与脂质体复合得到。
14、优选地，所述脂质体为dspe-peg-2k，通过乳化-溶剂挥发法制备得到纳米制剂。
15、优选地，所述纳米制剂是将抑制剂与dspe-peg-2k混合，通过乳化-溶剂挥发法制备得到。
16、本专利技术通过原核表达和亲和纯化技术获得高纯度的酶atg4b蛋白及其底物fret-gate-16，通过荧光共振能量转移和sds-page的方法来判断铜配合物cubpt对atg4b酶活性的影响。
17、本专利技术利用cck8法来检测细胞水平该铜配合物及包含其的纳米制剂处理对各肿瘤细胞的存活率的影响。
18、本专利技术利用cck8法来检测细胞水平该铜配合物及包含其的纳米制剂处理对egfr-tki耐药a549细胞存活率的影响。
19、本专利技术利用cck8法来检测细胞水平该铜配合物及包含其的纳米制剂处理对耐药小细胞肺癌细胞(h69ar细胞)存活率的影响。
20、本专利技术通过建立结肠癌荷瘤裸鼠模型来检测该铜配合物及包含其的纳米制剂的体内抗肿瘤活性及安全性。
21、与现有技术相比，本专利技术具有如下优点：
22、(1)本专利技术首次发现铜配合物cubpt可高效抑制atg4b的酶活性，ic50值为250.9nm。
23、(2)本专利技术的铜配合物类atg4b抑制剂cubpt抗瘤谱广，且其原型及包含其的纳米制剂对多种肿瘤细胞的增殖均具有良好的抑制活性。
24、(3)本专利技术的铜配合物类atg4b抑制剂cubpt及包含其的纳米制剂np-cubpt对egfr-tki耐药的非小细胞肺癌(a549 egfr-tki耐药细胞)和耐药小细胞肺癌细胞(h69ar细胞)的增殖也具有良好的抑制活性。
25、(4)本专利技术中的铜配合物类atg4b抑制剂可以通过抑制atg4b来阻断自噬流，该抑制剂及包含其的纳米制剂在体外和体内都具有良好的抗肿瘤活性，且安全性高，具有良好的肿瘤治疗应用前景。
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1.一种铜配合物作为ATG4B酶抑制剂的应用，其特征在于，所述铜配合物的结构如式(I)所示：
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述苯基、C1～6烷基含有如下取代基：卤素、C1～3烷基、C1～3烷氧基中的一种或多种。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述铜配合物的化学结构式为：
4.根据权利要求1或2或3所述的应用，其特征在于，所述的抑制剂或包含其的纳米制剂在制备治疗肿瘤药物中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为宫颈癌、结肠癌、结直肠腺癌和肺癌中的一种或两种以上。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述肺癌为EGFR-TKI耐药的非小细胞肺癌或者耐药小细胞肺癌。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述EGFR-TKI耐药的非小细胞肺癌为A549EGFR-TKI耐药细胞，所述耐药小细胞肺癌为H69AR细胞。
8.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述纳米制剂是将抑制剂与脂质体复合得到。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述纳米制剂是将抑制剂与DSPE-PEG-2K混合，通过乳化-溶剂挥发法制备得到。
...【技术特征摘要】
1.一种铜配合物作为atg4b酶抑制剂的应用，其特征在于，所述铜配合物的结构如式(i)所示：
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述苯基、c1～6烷基含有如下取代基：卤素、c1～3烷基、c1～3烷氧基中的一种或多种。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述铜配合物的化学结构式为：
4.根据权利要求1或2或3所述的应用，其特征在于，所述的抑制剂或包含其的纳米制剂在制备治疗肿瘤药物中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为宫颈癌、结肠癌、结直肠腺癌和肺癌中的一种或两种以上。
6.根据权利要求5所述的应用，其...
【专利技术属性】
技术研发人员：伏园园，李民，强鹏飞，张东阳，赵漫，
申请(专利权)人：广州医科大学，
类型：发明
国别省市：
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