【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分子生物学技术，进一步的说是一种条石鲷septin7基因内含子区插入变异的特异性标记、引物、检测方法、试剂盒及应用。
技术介绍
1、条石鲷（ oplegnathus fasciatus）隶属于鲈形目（perciformes）、石鲷科（oplegnathidae）及石鲷属（ oplegnathus），主要分布于西太平洋的温热带海域，尤其在岩礁和珊瑚礁环境中表现出较强的适应性。2004年，中国成功突破了条石鲷的生殖调控与苗种全人工繁育技术，使其成为海水网箱和工厂化养殖的重要对象，标志着该鱼类的养殖技术取得了重要进展。目前，条石鲷的市场销售价格已攀升至每斤200元，显示出其显著的经济价值和养殖潜力。作为我国本土的自然种类，条石鲷的资源开发与可持续利用具有深远的重要意义，养殖前景广阔。条石鲷具有典型的x1x1x2x2/x1x2y性别决定类型，其中雄鱼比雌鱼少一条染色体，但拥有一条异形染色体y，雄性性别类型为x1x2y。石鲷科鱼类在养殖过程中展现出显著的雌雄生长二态性，雄鱼的生长速度通常快于雌鱼，这一特性为遗传育种研究提供了良好的方向。因此，发展高雄苗种及全雄苗种的制备技术，将为条石鲷养殖产业的提质增效提供有力支持。此外，开展条石鲷苗种遗传性别快速鉴定技术的研发，不仅有助于高效储备优良雄性种质，还能提升养殖决策的科学性与针对性，从而促进条石鲷产业的可持续发展和市场竞争力的提高。
2、septin7 基因是 gtp 结合蛋白 septin
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于克服了现有条石鲷septin7基因内含子区dna插入变异检测技术不足，提供了一种条石鲷septin7基因内含子区插入变异的特异性标记、引物、检测方法、试剂盒及在雌雄遗传性别鉴定中的应用。
2、为实现上述目的，本专利技术采用技术方案为：
3、一种条石鲷基因内含子区插入变异的特异性标记，条石鲷septin7基因内含子区插入变异的特异性标记为条石鲷septin7基因内含子区非插入与插入特异性标记的dna片段，所述 dna片段的核苷酸序列为seq id no:1和seq id no:2所示。
4、所述条石鲷septin7基因内含子区dna片段非插入与插入特异性标记的核苷酸序列seq id no:1所示碱基为条石鲷雌、雄鱼x1染色体共有septin7基因内含子区未发生dna插入变异的同源片段，其为条石鲷septin7基因内含子区碱基非插入与插入个体共有dna特征标记；且，所述seq id no:1所示碱基序列第277位点和281位点之间缺失片段（3bp）以及第350位点和351位点之间插入序列片段（674bp），即为seq id no:2所示碱基序列。
5、一种所述的条石鲷基因内含子区插入变异的特异性标记的应用，所述特异性标记在鉴定条石鲷雌雄遗传性别中的应用。
6、一种利用所述的条石鲷基因内含子区插入变异的特异性标记鉴定条石鲷雌雄遗传性别的方法，
7、1）pcr扩增：取待测条石鲷，提取基因组dna；以所得基因组dna为模板，采用条石鲷septin7基因内含子区特异性引物，进行pcr扩增，并将所得pcr扩增产物与所述的特异性标记进行对比；
8、2）结果判断：从待测条石鲷的基因组dna中扩增出374bp和1045bp两个dna片段，即为判断该待测条石鲷为septin7基因内含子区发生dna片段插入变异个体；374bp为seq idno:1所示碱基，1045bp为seq id no:2所示碱基；
9、3）待测条石鲷的基因组dna中仅扩增出374bp的单一dna片段，即为判断该待测条石鲷为条石鲷septin7基因内含子区未发生dna片段插入变异个体；374bp为seq id no:1所示碱基。
10、所述步骤1）中特异性引物为：
11、chseptin7_f:1 : 5’- ggaccggggcaagggacccacac-3’；
12、chseptin7_r:2 : 5’- ctaacatctgagtgcagggaggct-3’；
13、所述步骤2）中待测条石鲷个体为雄鱼x1x2y；
14、所述步骤3）中待测条石鲷个体为雌性x1x1x2x2。
15、一种检测所述的检测条石鲷基因内含子区插入变异的特异性标记的引物：
16、chseptin7_f:1 : 5’- ggaccggggcaagggacccacac-3’；
17、chseptin7_r:2 : 5’- ctaacatctgagtgcagggaggct-3’。
18、一种所述的所述的检测条石鲷基因内含子区插入变异的特异性标记的引物的应用，所述引物在检测条石鲷雌雄遗传性别中的应用。
19、一种鉴定条石鲷雌雄遗传性别的试剂盒，试剂盒含所述的引物。
20、本专利技术所具有的优点：
21、本专利技术通过条石鲷雄鱼融合染色体y上的septin7基因与位于雌鱼同源染色体x上的septin7基因内含子相比较发生了大片段的序列插入，进而高效、快速精准鉴定条石鲷septin7基因内含子是否发生dna插入变异，对于揭示条石鲷的雌、雄细胞分裂、细胞骨架组织和膜动力学等多种细胞过程功能异质性，实现雌、雄遗传性别的快速鉴定，提升条石鲷遗传育种进程和优质苗种规模化生产具有重要的意义和应用价值。
22、本专利技术从条石鲷全基因组序列中筛选并获得了条石鲷x和y染色体septin7基因内含子同源区段且有大片段dna插入标记序列，进一步建立了条石鲷septin7基因内含子dna插入变异快速检测方法，采用该方法可以快速、准确和高效的鉴定待检测条石鲷septin7基因内含子是否发生dna插入。该方法利用一对引物在septin7基因内含子dna插入个体中扩增出374bp和1045bp两个相差671bp的条带，在septin7基因内含子未发生dna插入个体中仅扩增出1045bp的单一条带，并可以通过琼脂糖凝胶电泳本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种条石鲷septin7基因内含子区插入变异的特异性标记，其特征在于：条石鲷septin7基因内含子区插入变异的特异性标记为条石鲷septin7基因内含子区非插入与插入特异性标记的DNA片段，所述 DNA片段的核苷酸序列为SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示。
2.根据权利要求1所述的条石鲷septin7基因内含子区插入变异的特异性标记，其特征在于：所述条石鲷septin7基因内含子区DNA片段非插入与插入特异性标记的核苷酸序列SEQ ID NO:1所示碱基为条石鲷雌、雄鱼X1染色体共有septin7基因内含子区未发生DNA插入变异的同源片段，其为条石鲷septin7基因内含子区碱基非插入与插入个体共有DNA特征标记；且，所述SEQ ID NO:1所示碱基序列第277位点和281位点之间缺失片段（3bp）以及第350位点和351位点之间插入序列片段（674bp），即为SEQ ID NO:2所示碱基序列。
3.一种权利要求1所述的条石鲷基因内含子区插入变异的特异性标记的应用，其特征在于：所述特异性标记在鉴定条石鲷雌雄遗传性别中的应用。>
4.一种利用权利要求1所述的条石鲷septin7基因内含子区插入变异的特异性标记鉴定条石鲷雌雄遗传性别的方法，其特征在于，
5.根据权利要求4所述的鉴定条石鲷雌雄遗传性别的方法，其特征在于，步骤1）中特异性引物为：
6.一种检测权利要求1所述的检测条石鲷基因内含子区插入变异的特异性标记的引物，其特征在于：
7.一种权利要求6所述的检测条石鲷基因内含子区插入变异的特异性标记的引物的应用，其特征在于：所述引物在检测条石鲷雌雄遗传性别中的应用。
8.一种鉴定条石鲷雌雄遗传性别的试剂盒，其特征在于：试剂盒含权利要求6所述的引物。
...【技术特征摘要】
1.一种条石鲷septin7基因内含子区插入变异的特异性标记，其特征在于：条石鲷septin7基因内含子区插入变异的特异性标记为条石鲷septin7基因内含子区非插入与插入特异性标记的dna片段，所述 dna片段的核苷酸序列为seq id no:1和seq id no:2所示。
2.根据权利要求1所述的条石鲷septin7基因内含子区插入变异的特异性标记，其特征在于：所述条石鲷septin7基因内含子区dna片段非插入与插入特异性标记的核苷酸序列seq id no:1所示碱基为条石鲷雌、雄鱼x1染色体共有septin7基因内含子区未发生dna插入变异的同源片段，其为条石鲷septin7基因内含子区碱基非插入与插入个体共有dna特征标记；且，所述seq id no:1所示碱基序列第277位点和281位点之间缺失片段（3bp）以及第350位点和351位点之间插入序列片段...
【专利技术属性】
技术研发人员：肖永双，肖志忠，李军，徐平蕊，吴燕铎，陈少华，
申请(专利权)人：中国科学院海洋研究所，
类型：发明
国别省市：
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