【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于免疫学检测，具体涉及一种检测nk大颗粒淋巴细胞的抗体组合、试剂盒及其应用。
技术介绍
1、nk大颗粒淋巴细胞白血病(nk-lgll)是一种克隆性nk淋巴细胞增生性疾病，患者多为中老年(中位年龄60岁)，其重要诊断指标是外周血nk细胞不明原因的持续增多(通常＞2*109/l)达6个月以上，外周血形态中常见成熟颗粒淋巴比例升高。此病常累计外周血、骨髓、肝脏、脾脏等，并可导致血细胞减少相关症状。在一些老年人中，尤其是粒细胞减少的患者中，进行nk大颗粒淋巴细胞白血病(nk-lgll)筛查，可以较早识别克隆性nk大颗粒淋巴细胞，便于临床更好的对本病进行早期识别及诊疗。
2、nk大颗粒淋巴细胞白血病(nk-lgll)需要与反应性nk增高相区别，反应性nk细胞增高常继发于病毒感染、自身免疫病、恶性肿瘤等，诱因解除后，nk细胞可自行降低。但这两种情况在血常规中均可以表现淋巴细胞绝对值增加，外周血细胞形态中颗粒淋巴细胞占比增高，很难鉴别。在who造血与淋巴组织肿瘤中提到大颗粒淋巴细胞白血病(nk-lgll)通过流式细胞术免疫表型分析显示出独特的特征。表面cd3阴性、cd16是阳性的、弱cd56表达、可能存在cd2,cd7和cd57的表达减少或丧失,以及cd8的异常均匀表达。在nk-lgll中，nk细胞受体的杀伤细胞免疫球蛋白样受体(kir)家族的表达是异常的；可以看到受限的kir同种型表达或完全缺乏可检测的kir。因此可以通过流式细胞术检测kir的表达情况来进行精准鉴别。
3、目前检测nk细胞的kir指标有c
4、因此，市面上需要一种成体系的检测nk大颗粒淋巴细胞的抗体组合及检测试剂盒，有标准的检测方案、操作流程及分析思路，来确保结果的准确性及可比性，助力于临床上nk大颗粒淋巴细胞白血病(nk-lgll)的精准诊断。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种能够快速检测且准确nk大颗粒淋巴细胞的抗体组合。
2、实现上述目的包括如下技术方案。
3、本专利技术第一方面提供一种检测nk大颗粒淋巴细胞的抗体组合，包括第一组抗体、第二组抗体和第三组抗体；
4、所述第一组抗体包括cd158a、cd159c(nkg2c)、cd3、cd56、cd159a(nkg2a)、cd158b、cd7、cd5、cd158e和cd45抗体；
5、所述第二组抗体包括：cd94、cd161、cd16、cd56、cd45ko、cd3、cd8、cd45ra、cd57和cd45抗体；
6、所述第三组抗体包括：granzyme b、perforin、cd3、cd56、ki67、cd2和cd45抗体；每种所述抗体均为标记有检测标记物的单克隆抗体。
7、在其中一些实施例中，所述cd158a、cd94和granzyme b抗体标记同一种荧光素；
8、所述cd159c(nkg2c)、cd161和perforin抗体标记同一种荧光素；
9、所述cd3和cd16抗体标记同一种荧光素；
10、所述cd56抗体标记一种荧光素；
11、所述cd159a(nkg2a)、cd45ro和ki67抗体标记同一种荧光素；
12、所述cd158b和cd3抗体标记同一种荧光素；
13、所述cd7和cd8抗体标记同一种荧光素；
14、所述cd5、cd45ra和cd2抗体标记同一种荧光素；
15、所述cd158e和cd57抗体标记同一种荧光素；
16、所述cd45抗体标记一种荧光素；
17、所述荧光素选自：fitc、pe、ecd、pe-cytm5.5、pe-cy7、apc、apc-700、apc-750、pb、ko。
18、在其中一些实施例中，所述cd158a、cd94和granzyme b抗体标记荧光素fitc；所述cd159c(nkg2c)、cd161和perforin抗体标记荧光素pe；所述cd3和cd16抗体标记荧光素ecd；所述cd56抗体标记荧光素pe-cytm5.5；所述cd159a(nkg2a)、cd45ro和ki67抗体标记荧光素pe-cy7；所述cd158b和cd3抗体标记荧光素apc；所述cd7和cd8抗体标记荧光素apc-700；所述cd5、cd45ra和cd2抗体标记荧光素apc-750；所述cd158e和cd57抗体标记荧光素pb；所述cd45抗体标记荧光素ko；
19、其中，cd3抗体标记荧光素ecd的货号为a07748、cd56抗体标记荧光素pe-cytm5.5的货号为b49189、cd7抗体标记荧光素apc700的货号为b36290、cd5抗体标记荧光素apc750的货号为b92413、cd45抗体标记荧光素ko的货号为b36294、cd16抗体标记荧光素ecd的货号为b49216、cd45ro抗体标记荧光素pecy7的货号为b13648、cd3抗体标记荧光素apc的货号为im2467、cd45ra抗体标记荧光素apc750的货号为b49194、granzymeb抗体标记荧光素fitc的货号为b46038、cd2抗体标记荧光素apc750的货号为b01681，厂家beckmancoulter；
20、cd158a抗体标记荧光素fitc的货号为339504、cd159c(nkg2c)抗体标记荧光素pe的货号为375004、cd159a(nkg2c)抗体标记荧光素pecy7的货号为375114、cd158b抗体标记荧光素apc的货号为312612、cd158e抗体标记荧光素pb的货号为312714、cd94抗体标记荧光素fitc的货号为305504、cd161抗体标记荧光素pe的货号为339904、cd57抗体标记荧光素pb的货号为393326，厂家biolegend；
21、ki67抗体标记荧光素apc的货号为561283，厂家bd；
22、perforin抗体标记荧光素pe的货号为1p-765-t100，厂家exbio。
23、本专利技术第二方面提供一种检测nk大颗粒淋巴细胞的试剂盒，所述试剂盒包括如上所述的检测nk大颗粒淋巴细胞的抗体组合。
24、在其中一些实施例中，所述试剂盒还包括用于流式细胞术检测的试剂。
25、在其中一些实施例中，所述流式细胞术的检测中，通过将待测样本的单细胞悬液分为三份，分别加入第一组抗体、第二组抗体和第三组抗体进行孵育后，进行流式细胞术检测。
26、在其中一些实施例中，所述单细胞悬液与第一组抗体的体积比100μl：35μl～36μl，其中第一组抗体中各抗体的用量为1.5μl～5μl，所述单细胞悬液中的细胞数浓度本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种检测NK大颗粒淋巴细胞的抗体组合，其特征在于，包括第一组抗体、第二组抗体和第三组抗体；
2.如权利要求1所述的抗体组合，其特征在于，所述CD158a、CD94和Granzyme B抗体标记同一种荧光素；
3.如权利要求2所述的抗体组合，其特征在于，所述CD158a、CD94和Granzyme B抗体标记荧光素FITC；所述CD159c(NKG2C)、CD161和Perforin抗体标记荧光素PE；所述CD3和CD16抗体标记荧光素ECD；所述CD56抗体标记荧光素PE-CyTM5.5；所述CD159a(NKG2A)、CD45RO和Ki67抗体标记荧光素PE-Cy7；所述CD158b和CD3抗体标记荧光素APC；所述CD7和CD8抗体标记荧光素APC-700；所述CD5、CD45RA和CD2抗体标记荧光素APC-750；所述CD158e和CD57抗体标记荧光素PB；所述CD45抗体标记荧光素KO；
4.一种检测NK大颗粒淋巴细胞的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1-3任一项所述的检测NK大颗粒淋巴细胞的抗体组合。
5
6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述流式细胞术的检测中，通过将待测样本的单细胞悬液分为三份，分别加入第一组抗体、第二组抗体和第三组抗体进行孵育后，进行流式细胞术检测。
7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述单细胞悬液与第一组抗体的体积比100μl：35μl～36μl，其中第一组抗体中各抗体的用量为1.5μl～5μl，所述单细胞悬液中的细胞数浓度为1×105个/ml～1×106个/ml；和/或，
8.权利要求1-3任一项所述的抗体组合或权利要求4-7任一项所述的试剂盒在辅助检测NK大颗粒淋巴细胞中的应用。
9.一种检测NK大颗粒淋巴细胞的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，对待测样本细胞进行流式细胞术检测后，还包括：
...【技术特征摘要】
1.一种检测nk大颗粒淋巴细胞的抗体组合，其特征在于，包括第一组抗体、第二组抗体和第三组抗体；
2.如权利要求1所述的抗体组合，其特征在于，所述cd158a、cd94和granzyme b抗体标记同一种荧光素；
3.如权利要求2所述的抗体组合，其特征在于，所述cd158a、cd94和granzyme b抗体标记荧光素fitc；所述cd159c(nkg2c)、cd161和perforin抗体标记荧光素pe；所述cd3和cd16抗体标记荧光素ecd；所述cd56抗体标记荧光素pe-cytm5.5；所述cd159a(nkg2a)、cd45ro和ki67抗体标记荧光素pe-cy7；所述cd158b和cd3抗体标记荧光素apc；所述cd7和cd8抗体标记荧光素apc-700；所述cd5、cd45ra和cd2抗体标记荧光素apc-750；所述cd158e和cd57抗体标记荧光素pb；所述cd45抗体标记荧光素ko；
4.一种检测nk大颗粒淋巴细胞的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒...
【专利技术属性】
技术研发人员：韦杰，董苹，王佳佳，李海艳，李亚如，王青，范昌军，卞孟姣，
申请(专利权)人：济南金域医学检验中心有限公司，
类型：发明
国别省市：
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