【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体地说，是一组与胶霉毒素特异性结合的高亲和力核酸适体及其应用。
技术介绍
1、胶霉毒素(gliotoxin,gtx)是多种真菌生长过程中产生的毒性代谢物之一。其中，烟曲霉菌产量最高。gtx对不同物种的各类型细胞都具有广泛的促凋亡作用，包括人类、猴子、猪、大鼠、小鼠、鱼类和昆虫等，对人类和动物的健康和食品安全构成严重威胁。它还可以通过降低免疫功能，导致身体直接损伤、真菌感染的感染和传播，甚至侵袭性真菌病。烟曲霉菌的体外培养实验表明，gtx在24小时内可以被检测到，浓度在48-72小时达到峰值。此外，在患有侵袭性曲霉菌病(invasive aspergillosis,ia)的小鼠和人类的血清中检测到gtx存在，且水平随着抗真菌治疗而降低，这表明gtx可以作为ia的新诊断指标。因此，有必要开发一种可行的检测gtx的方法进行安全监测，不仅保障食品安全，还有助于真菌感染，特别是ia的早期诊断。
2、目前，用于gtx检测的方法主要有hplc、hplc-ms/ms和生物法等。然而，由于样品处理过程复杂、灵敏度有限等问题，这些方法无法满足gtx的便携式快速检测需要。同时，胶霉毒素是一个非蛋白结构的小分子真菌毒素，其产生识别配体(例如抗体)的能力甚微，从而进一步限制了相应检测方法的发展。因此，目前迫切需要研发与胶霉毒素特异性结合的识别分子，从而为复杂体系中胶霉毒素的分离与去除，体内外胶霉毒素的快速检测与早期诊断，以及相关疾病中胶霉毒素的中和或拮药物的开发和制备等提供有效的工具。
3、核酸适体，又被称为
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供通过定点突变和截短策略的组合应用，获得的一组与gtx特异性结合的高亲和力核酸适体。本专利技术的另一目的是提供该组核酸适体在制备gtx检测试剂、试剂盒或传感器中，在制备gtx捕获、分离和纯化的制剂中，在制备ia诊断工具、靶向给药系统、中和或阻断药物中等多方面的应用。
2、为了实现上述目的，本专利技术的主要技术方案是：(1)通过对核酸适体apt16进行定点突变，促使其结构由包含三个g-四面体平面的g-四链体结构转变为包含四个g-四面体平面的g四链体结构，亲和力基本保持不变，结构稳定性明显提高；(2)进一步通过截短优化，获得了核酸适体的核心序列，靶向亲和力明显提高，结构稳定性进一步大幅提升，为胶霉毒素相关的实验室技术的开发、临床诊断方法的发展和核酸药物的制备提供了一组特异性强、稳定性高、易于生产和修饰的高亲和力生物识别分子。
3、本专利技术的第一方面，提供一组特异性结合胶霉毒素(gtx)的高亲和力核酸适体，其核苷酸序列分别如seq id no.2～seq id no.3(表1)所示。
4、表1核酸适体序列及其参数
5、
6、本专利技术的第二方面，提供一组如上所述的核酸适体在制备胶霉毒素(gtx)检测试剂、试剂盒或传感器中的应用。
7、本专利技术的第三方面，提供一组如上所述的核酸适体在制备胶霉毒素(gtx)捕获、分离和纯化制剂中的应用。
8、本专利技术的第四方面，提供一组如上所述的核酸适体在开发侵袭性曲霉菌病(ia)诊断方法中的应用。所述的诊断方法是基于上述核酸适体对gtx高亲和力的结合作用，可用于ia的早期快速诊断。
9、本专利技术第五方面，提供一组如上所述的核酸适体在构建体内靶向给药系统中的应用；所述的靶向给药系统是基于所述的核酸适体对gtx强特异性的识别作用，可用于药物的靶向运输和定点释放等。
10、本专利技术第六方面，提供一组如上所述的核酸适体在制备中和或阻断胶霉毒素(gtx)的核酸药物中的应用。所述的药物通过中和或阻断gtx，可以缓解或者治疗gtx所介导的相关临床疾病。
11、本专利技术优点在于：
12、1、通过对核酸适体apt16进行定点突变，促使其结构由包含三个g-四面体平面的正向平行g-四链体结构转变为包含四个g-四面体平面的反向平行g四链体结构，显著改善了核酸适配体的结构稳定性。
13、2、通过对核酸适体apt16m进行截短优化，获得其核心序列，显著改善了核酸适配体的结合亲和力和结构稳定性。
14、3、本专利技术的核酸适体作为靶向gtx的分子工具，具有亲和力高、特异性强、稳定性好、免疫原性低、制备成本低、易修饰和标记等优势。可用于系统中gtx的捕获、体内外gtx的检测以及在相关疾病中gtx治疗药物的开发和靶向给药系统的构建等，具有广阔的应用前景。
15、因此，本专利技术的核酸适体面向实际应用具有巨大的潜力。
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1.一组特异性结合胶霉毒素的核酸适体，其核苷酸序列分别如SEQ IDNo.2、SEQ IDNo.3所示。
2.一组如权利要求1所述的核酸适体在制备胶霉毒素检测试剂、试剂盒或传感器中的应用。
3.一组如权利要求1所述的核酸适体在制备胶霉毒素捕获、分离和纯化制剂中的应用。
4.一组如权利要求1所述的核酸适体在构建体内靶向给药系统中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的靶向给药系统是基于所述的核酸适体对胶霉毒素强特异性的识别作用，用于药物的靶向运输和定点释放。
6.一组如权利要求1所述的核酸适体在制备中和或阻断胶霉毒素的核酸药物中的应用。
【技术特征摘要】
1.一组特异性结合胶霉毒素的核酸适体，其核苷酸序列分别如seq idno.2、seq idno.3所示。
2.一组如权利要求1所述的核酸适体在制备胶霉毒素检测试剂、试剂盒或传感器中的应用。
3.一组如权利要求1所述的核酸适体在制备胶霉毒素捕获、分离和纯化制剂中的应用。
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【专利技术属性】
技术研发人员：郑欣，刘维薇，江爱民，
申请(专利权)人：上海中医药大学附属龙华医院，
类型：发明
国别省市：
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