【技术实现步骤摘要】
本申请涉及生物医药领域，具体为一种肝素钠样品的琼脂糖凝胶电泳检测方法及胶板。
技术介绍
1、肝素、硫酸软骨素、硫酸皮肤素、硫酸乙酰肝素等等，均属于粘多醣类化合物，此类大分子化合物有不同的生物药理作用，从根本上讲，粘多醣类化学物的结构类似，均为不同程度硫酸化、乙酰化的糖胺-糖醛酸类化合物。
2、目前针对肝素样品，主要的分离分析方法有电泳法、毛细管电泳法、核磁共振法、纤维薄膜电泳法、hplc法。一般来说，核磁共振法检测设备投入较大，而且杂质含量小于1％时不易被检出，而薄膜电泳法分离效果很差，也不易于观察。琼脂糖凝胶电泳是生物学领域最常见的技术，兼具分子筛和电泳双重作用，主要用于核酸的分离和鉴定以及提纯，核酸本身是一种五碳糖类，因此琼脂糖凝胶电泳也可以用于分离和鉴定肝素类粘多醣化合物。琼脂糖凝胶电泳拥有以下优点：结果重复性好、设备简单、性价比高等。
3、肝素的琼脂糖凝胶电泳对制胶的要求是凝胶厚度尽可能的薄，因此目前市面上的琼脂糖凝胶电泳制胶板并不是很适合用来制备用于肝素电泳的薄凝胶，本专利技术针对该问题对琼脂糖电泳的制胶板进行了重新设计和优化。
4、申请内容
5、本申请的目的在于提供一种肝素钠样品的琼脂糖凝胶电泳检测方法及胶板,以解决上述技术问题。
6、为实现上述目的，本申请提供一种肝素钠样品的琼脂糖凝胶电泳检测方法，包括：
7、步骤一：制作胶板，称取0.3-0.6g琼脂糖，用ph为5.8-7.8的0.001-0.04m乙酸钡ph5.8-7.8溶解至100ml，溶
8、步骤二：点样，向孔里小心加注样品，在第一个孔和最后一个孔加入甲酚红溶液，其他孔依次加入对照品及样品，各4-10μl；
9、步骤三：第一次跑胶，采用冰浴跑胶，将电泳槽外沿浸泡在冰水混合物中，在170-200ml乙酸钡溶液中跑胶，恒压80-100v，电流40-53ma，跑胶时长20-40min，电压及电流根据不同仪器有一定变化；
10、步骤四：第二次跑胶，在170-200ml的1，3-丙二胺乙酸缓冲液中跑胶，恒压70-100v，电流70-100ma，跑胶时长60-90min，电压及电流根据不同仪器有一定变化；
11、步骤五：固定，用0.1％-1％的十六烷基三甲基溴化铵固定30-60min；
12、步骤六：干燥，吹干或烘干至一张皮厚度并冷却到室温；
13、步骤七：染色，用0.1％-1％甲苯胺蓝染色1-2h，染色液可重复用；
14、步骤八：脱色，先用纯水洗涤，再用脱色液脱色。
15、优选的，步骤一中配制的胶所用的琼脂糖质量是0.3g，乙酸钡浓度为0.01m，ph为6.5，每块胶用40g琼脂糖凝胶制作，凝固时间为60min。
16、优选的，步骤二中点样体积为6μl，甲酚红溶液是称取0.1g甲酚红，用5.3ml的0.05m naoh溶解，加纯水950ml，搅拌混匀得到。
17、优选的，步骤三中乙酸钡体积为200ml，恒压100v，电流40ma，跑胶时长40min。
18、优选的，步骤四中1，3-丙二胺乙酸缓冲液的体积为200ml，恒压100v，电流100ma，跑胶时长90min。
19、优选的，步骤五中十六烷基三甲基溴化铵浓度为0.5％，用纯水溶解，固定时长为60min。
20、优选的，步骤七中甲苯胺蓝浓度为0.5％，染色时长为2h。
21、优选的，步骤八中脱色液为纯水：乙醇：冰醋酸＝7：7：0.3。
22、一种的肝素钠样品的琼脂糖凝胶电泳检测用胶板，包括：前挡板、后挡板、可拆卸立方插板、梳齿盖板和底座，底座左右两侧开设有凹槽，可拆卸立方插板可拆卸置于凹槽内，底座上下两侧分别连接前挡板和后挡板，可拆卸立方插板远离底座一端设置有可自由安放的梳齿盖板，梳齿盖板方便形成琼脂糖凝胶的加样孔，前挡板和后挡板的高度远高于两侧，方便更换两侧可拆卸立方体插板后，凝胶不会从前后溢出，凝胶的高度取决于两侧较矮的插板。本胶板可以提高凝胶制备过程中的凝胶制备效率，可以通过更换不同高度的立方体插板来控制凝胶的厚度，快速的制备不同厚度的琼脂糖凝胶，以适应肝素样品电泳对凝胶厚度的要求，可以快速制备很薄的凝胶。
23、与现有技术相比，本申请的有益效果是：
24、1、本专利技术是一种快速分离慢移动肝素、快移动肝素、硫酸软骨素和硫酸皮肤素的琼脂糖凝胶电泳检测方法，实现了对肝素钠中含量较低的杂质进行相关检测，灵敏度达到0.3％以上；
25、2、本专利技术所制备的琼脂糖凝胶的样品扩散性好，对样品几乎无吸收，而且琼脂糖凝胶置于玻璃器皿上，也易于观测，电泳结果与核酸电泳一样，可以直接用紫外光进行检测，也可以用肉眼观测，更容易判断；
26、3、本专利技术的胶板进行琼脂糖凝胶的制备时，可以灵活控制琼脂糖凝胶的厚度、打孔、以及凝固时间，采用该胶板所制备的琼脂糖凝胶进行电泳，可以对慢移动肝素、快移动肝素、硫酸皮肤素、硫酸软骨素进行清晰有效的分离和鉴定，即使肝素钠样品中的慢移动肝素含量低于3％、或者硫酸软骨素含量低于1％也能被检测出来；
27、4、本专利技术的胶板，导入融化的凝胶后，待胶凝固后，拔掉两侧的体插板，即可从底盘的两侧任意一边取出制备好的凝胶；
28、5、本专利技术检测结果清晰可辨别，检测灵敏度高；
29、6、本专利技术琼脂糖凝胶电泳后条带的染色脱色更简便，可以用于软件定量测定；
30、7、本专利技术参照核酸的琼脂糖电泳进行改进，整个操作流程简便易行，电泳速度也更快。
技术实现思路
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1.一种肝素钠样品的琼脂糖凝胶电泳检测方法，其特征在于，包括:
2.根据权利要求1所述的肝素钠样品的琼脂糖凝胶电泳检测方法，其特征在于，步骤一中配制的胶所用的琼脂糖质量是0.3g，乙酸钡浓度为0.01M，pH为6.5，每块胶用40g琼脂糖凝胶制作，凝固时间为60min。
3.根据权利要求2所述的肝素钠样品的琼脂糖凝胶电泳检测方法，其特征在于，步骤二中点样体积为6μL，甲酚红溶液是称取0.1g甲酚红，用5.3ml的0.05M NaOH溶解，加纯水950ml，搅拌混匀得到。
4.根据权利要求3所述的肝素钠样品的琼脂糖凝胶电泳检测方法，其特征在于，步骤三中乙酸钡体积为200mL，恒压100v，电流40mA，跑胶时长40min。
5.根据权利要求4所述的肝素钠样品的琼脂糖凝胶电泳检测方法，其特征在于，步骤四中1，3-丙二胺乙酸缓冲液的体积为200mL，恒压100v，电流100mA，跑胶时长90min。
6.根据权利要求5所述的肝素钠样品的琼脂糖凝胶电泳检测方法，其特征在于，步骤五中十六烷基三甲基溴化铵浓度为0.5％，用纯水溶解，
7.根据权利要求6所述的肝素钠样品的琼脂糖凝胶电泳检测方法，其特征在于，步骤七中甲苯胺蓝浓度为0.5％，染色时长为2h。
8.根据权利要求7所述的肝素钠样品的琼脂糖凝胶电泳检测方法，其特征在于，步骤八中脱色液为纯水：乙醇：冰醋酸＝7：7：0.3。
9.一种肝素钠样品的琼脂糖凝胶电泳检测用胶板，用于如权利要求1-8任一所述的肝素钠样品的琼脂糖凝胶电泳检测方法，其特征在于，包括：前挡板(1)、后挡板(4)、可拆卸立方插板(3)、梳齿盖板(2)和底座(5)，底座(5)左右两侧开设有凹槽，可拆卸立方插板(3)可拆卸置于凹槽内，底座(5)上下两侧分别连接前挡板(1)和后挡板(4)，可拆卸立方插板(3)远离底座(5)一端设置有可自由安放的梳齿盖板(2)。
...【技术特征摘要】
1.一种肝素钠样品的琼脂糖凝胶电泳检测方法，其特征在于，包括:
2.根据权利要求1所述的肝素钠样品的琼脂糖凝胶电泳检测方法，其特征在于，步骤一中配制的胶所用的琼脂糖质量是0.3g，乙酸钡浓度为0.01m，ph为6.5，每块胶用40g琼脂糖凝胶制作，凝固时间为60min。
3.根据权利要求2所述的肝素钠样品的琼脂糖凝胶电泳检测方法，其特征在于，步骤二中点样体积为6μl，甲酚红溶液是称取0.1g甲酚红，用5.3ml的0.05m naoh溶解，加纯水950ml，搅拌混匀得到。
4.根据权利要求3所述的肝素钠样品的琼脂糖凝胶电泳检测方法，其特征在于，步骤三中乙酸钡体积为200ml，恒压100v，电流40ma，跑胶时长40min。
5.根据权利要求4所述的肝素钠样品的琼脂糖凝胶电泳检测方法，其特征在于，步骤四中1，3-丙二胺乙酸缓冲液的体积为200ml，恒压100v，电流100ma，跑胶时长90min。...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴彦，罗志波，曲茂华，马牧青，章雪琦，
申请(专利权)人：杭州微远生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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