【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及一种用于细胞常温运输的细胞营养液及其应用。
技术介绍
1、细胞培养是指在体外模拟体内环境，使之生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法。不论对于整个生物工程技术，还是其中之一的生物克隆技术来说，细胞培养都是一个必不可少的过程。细胞培养技术是细胞生物学研究方法中重要和常用技术，通过细胞培养既可以获得大量细胞，又可以借此研究细胞的信号转导、细胞的合成代谢、细胞的生长增殖等。
2、不论购买细胞、交换细胞、赠送细胞都涉及细胞的运输。在运输过程中，温度和湿度条件、运输液、以及震动和物理损伤等都会影响细胞状态。目前运输细胞主要有以下几种方式：
3、一、常温运输：此种方法较为简单。一般选择生长良好的细胞，以细胞长满但不致密为宜，去掉旧培养液，补充新的培养液至瓶颈部，保留微量空气，拧紧瓶盖，并用胶带密封，放在一运送盒内，用棉花等做防震防压处理。运输时间需2-3天，一般放在贴身口袋即可，到达目的地后倒出多余的培养液，只需保留维持生长所需的培养液置37℃培养，次日传代。细胞可以在培养瓶中灌满培养液后进行常温运输。在运输过程中，应确保培养瓶密封，避免震动和温度变化，以维持细胞的生存环境。然而这种方法通常存在如下缺点：1、容易发生细胞瓶漏液、污染的情况；2、由于运输过程中防震防压处理不合理，容易引起贴壁弱的细胞脱落，造成细胞状态差；3、如果遇到寒冷或酷热天气时通常细胞会大量或全部死亡。
4、二、干冰运输：适用于需要低温保存的细胞。在运输前，细胞会被冷冻，并使用干冰作为冷却剂。较为常用
5、三、液氮运输：适用于需要更深度冷冻的细胞。在运输前，细胞同样需要被冷冻，并使用液氮进行冷却。保存效果好，但缺点是比较麻烦，不宜长时间运输，多需空运，代价较大，安全性也相对差些。
6、因此，急需开发一种简便易行、运输过程中能有效维持细胞活性的细胞营养液，以方便细胞常温运输和细胞重新培养。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于克服现有技术的缺点和不足而提供一种用于细胞常温运输的细胞营养液及其应用，以便于细胞常温运输和后续细胞重新培养。
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案为：
3、第一方面，本专利技术提供了一种用于细胞常温运输的细胞营养液，所述细胞营养液由以下组分组成：胶原0.5-10mg/ml、明胶0.5-10mg/ml、细胞外基质0.5-10mg/ml、蔗糖0-50mg/ml、以及占细胞营养液总体积2-10％的胎牛血清、5-15％的甘油、75-93％的基础培养基。
4、本专利技术根据细胞生长、保存的营养需求和细胞运输要求，开发了一种能有效维持细胞活力的细胞营养液，实现了细胞的常温运输和重新培养。将本专利技术所述细胞营养液加入经消化后的生长状态良好的细胞中，能够实现细胞在不贴壁的情况下，细胞运输超过3天，细胞活性仍能保持70％以上，并且运输后直接把细胞和营养液放入细胞瓶中，加入完全培养基培养，不需进行额外的细胞复苏或重新冻存细胞过程，方法简便易行，细胞状态保持良好。
5、其中，明胶、胶原和细胞外基质有助于细胞的黏附和扩增，在细胞运输过程中，其可以在培养基表面形成支持细胞附着和生长的基质，从而增强细胞的存活率和健康状态，以维持细胞正常形态和功能，并且避免运输过程中因振动或温度变化而带来的不利影响。胎牛血清中富含生长因子、细胞黏附因子等营养物质，能够提供细胞在培养期间所需的基本营养，提高细胞在运输过程中的存活率。甘油能够在运输过程中帮助细胞保持水合状态，减少各种应激引起的损伤。
6、优选地，所述细胞营养液由以下组分组成：胶原2-10mg/ml、明胶1-5mg/ml、细胞外基质2-10mg/ml、蔗糖0.5-20mg/ml、以及占细胞营养液总体积8-10％的胎牛血清、5-15％的甘油、77-82％的基础培养基。
7、经试验探究发现，当所述细胞营养液采用上述优选用量的组分时，各组分间相互配合，能够使绝大多数细胞在不贴壁的情况下，更大程度的维持细胞的活性和健康状态，保证运输过程中细胞的有效性和稳定性。
8、优选地，所述基础培养基包括但不限于dmem、rpmi1640、mem、demd/f12或m199。
9、优选地，所述细胞培养液的适用细胞包括但不限于293细胞、pk-1细胞、bhk-21细胞、df1细胞、vero细胞和st细胞。
10、经实验探究发现，本专利技术提供的细胞营养液适用于上述不同类型细胞的常温运输，细胞在所述营养液中经超过3天的长时间运输后，在不贴壁培养的情况下仍能维持良好的细胞活性，且运输结束后直接向细胞中加入完全培养基即可使细胞正常生长。
11、第二方面，本专利技术提供了一种细胞常温运输的方法，包括以下步骤：
12、(1)将细胞进行消化后，加入所述的细胞营养液，混合后置于细胞冻存管中，冻存管里体积加到90％以上，密封，进行运输；
13、(2)运输完成后，把细胞和细胞营养液加入细胞培养瓶中，再添加完全培养基直接培养。
14、优选地，所述步骤(1)中，细胞在细胞营养液中的密度为0.5×106-10×106个/ml。
15、优选地，所述步骤(1)中，细胞进行运输过程中温度控制范围为2-37℃。
16、优选地，所述步骤(1)中，细胞包括但不限于293细胞、pk-15细胞、bhk-21细胞、df1细胞、vero细胞和st细胞。
17、第三方面，本专利技术提供了所述的细胞营养液在细胞运输中的应用。
18、与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
19、本专利技术根据细胞生长、保存的营养需求和细胞运输要求，开发了一种低成本且能有效维持细胞活力的细胞营养液，实现了细胞的常温运输和细胞重新培养。将本专利技术所述细胞营养液加入经消化后的生长状态良好的细胞中，能够实现细胞在不贴壁的情况下，细胞运输超过3天，细胞活性仍能保持70％以上，并且运输后直接把细胞和营养液放入细胞瓶中，再加入完全培养基就可以培养，不需进行额外的细胞复苏或重新冻存细胞过程，方法简便易行，细胞状态保持良好。
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1.一种用于细胞常温运输的细胞营养液，其特征在于，所述细胞营养液由以下组分组成：胶原0.5-10mg/mL、明胶0.5-10mg/mL、细胞外基质0.5-10mg/mL、蔗糖0-50mg/mL、以及占细胞营养液总体积2-10％的胎牛血清、5-15％的甘油、75-93％的基础培养基。
2.如权利要求1所述的细胞营养液，其特征在于，所述细胞营养液由以下组分组成：胶原2-10mg/mL、明胶1-5mg/mL、细胞外基质2-10mg/mL、蔗糖0.5-20mg/mL、以及占细胞营养液总体积8-10％的胎牛血清、5-15％的甘油、77-82％的基础培养基。
3.如权利要求1所述的细胞营养液，其特征在于，所述基础培养基包括但不限于DMEM、RPMI1640、MEM、DEMD/F12或M199。
4.如权利要求1所述的细胞营养液，其特征在于，所述细胞培养液的适用细胞包括但不限于293细胞、PK-1 5细胞、BHK-21细胞、DF1细胞、Vero细胞和ST细胞。
5.一种细胞常温运输的方法，其特征在于，包括以下步骤：
6.如权利要求5所
7.如权利要求5所述的细胞常温运输的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，细胞进行运输过程中温度控制范围为2-37℃。
8.如权利要求5所述的细胞常温运输的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，细胞包括但不限于293细胞、PK-15细胞、BHK-21细胞、DF1细胞、Vero细胞和ST细胞。
9.如权利要求1-4任一项所述的细胞营养液在细胞运输中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种用于细胞常温运输的细胞营养液，其特征在于，所述细胞营养液由以下组分组成：胶原0.5-10mg/ml、明胶0.5-10mg/ml、细胞外基质0.5-10mg/ml、蔗糖0-50mg/ml、以及占细胞营养液总体积2-10％的胎牛血清、5-15％的甘油、75-93％的基础培养基。
2.如权利要求1所述的细胞营养液，其特征在于，所述细胞营养液由以下组分组成：胶原2-10mg/ml、明胶1-5mg/ml、细胞外基质2-10mg/ml、蔗糖0.5-20mg/ml、以及占细胞营养液总体积8-10％的胎牛血清、5-15％的甘油、77-82％的基础培养基。
3.如权利要求1所述的细胞营养液，其特征在于，所述基础培养基包括但不限于dmem、rpmi1640、mem、demd/f12或m199。
4.如权利要求1所述的细...
【专利技术属性】
技术研发人员：冯少珍，陈崴，李志坚，
申请(专利权)人：中山大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：
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