本发明专利技术涉及免疫分析检测技术领域，特别是涉及一种测定甲胎蛋白含量的均相化学发光试剂盒。试剂盒包括探针D标记的甲胎蛋白特异性抗体1和探针K标记的甲胎蛋白特异性抗体2，探针D标记的甲胎蛋白特异性抗体1的制备方法包括步骤：将聚合物和纳米凝胶溶液混合，得到探针D，将甲胎蛋白特异性抗体1和探针D混合，得到探针D标记的甲胎蛋白特异性抗体1；探针K标记的甲胎蛋白特异性抗体2的制备方法包括步骤：将聚合物和MOF溶液混合，得到探针K，将甲胎蛋白特异性抗体2和探针K混合，得到探针K标记的甲胎蛋白特异性抗体2。本发明专利技术试剂盒有效提高了测定的准确性和灵敏度。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及免疫分析检测，特别是涉及一种测定甲胎蛋白含量的均相化学发光试剂盒。
技术介绍
1、甲胎蛋白(afp)作为一种重要的肿瘤标志物，在肝癌、生殖腺胚胎肿瘤等多种疾病的早期筛查和诊断中扮演着关键角色。因此，对甲胎蛋白含量的准确、快速测定具有极高的医学价值。传统的甲胎蛋白测定方法如酶联免疫吸附法(elisa)虽然应用广泛，但存在操作繁琐、灵敏度低、易受干扰等问题。因此，开发一种简便、准确、快速的甲胎蛋白测定方法具有重要的现实意义。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种测定甲胎蛋白含量的均相化学发光试剂盒，本专利技术试剂盒有效提高了测定的准确性和灵敏度。
2、为实现上述目的及其他相关目的，本专利技术提供以下技术方案：
3、一种测定甲胎蛋白含量的均相化学发光试剂盒，包括探针d标记的甲胎蛋白特异性抗体1和探针k标记的甲胎蛋白特异性抗体2，
4、探针d标记的甲胎蛋白特异性抗体1的制备方法包括如下步骤：
5、将聚合物和纳米凝胶溶液混合，得到探针d，将甲胎蛋白特异性抗体1和探针d混合，得到探针d标记的甲胎蛋白特异性抗体1；
6、探针k标记的甲胎蛋白特异性抗体2的制备方法包括如下步骤：
7、将聚合物和mof溶液混合，得到探针k，将甲胎蛋白特异性抗体2和探针k混合，得到探针k标记的甲胎蛋白特异性抗体2。
8、优选的，将聚乙烯亚胺溶解在水中，搅拌，然后加入戊二醛，搅拌，得到所述纳米凝胶溶液。
>9、优选的所述聚合物包括peg-sh，所述peg-sh包括4arm-peg-sh。10、优选的，将peg-sh溶解在水中，得到聚合物。
11、优选的，探针d标记的甲胎蛋白特异性抗体1的制备方法包括如下步骤：
12、将聚合物和纳米凝胶溶液按1:10～50的体积比混合，得到所述探针d。
13、优选的，探针d标记的甲胎蛋白特异性抗体1的制备方法包括如下步骤：
14、将甲胎蛋白特异性抗体1和探针d按1～8:1的质量比混合，在10～50℃条件下用500～1000rpm震荡孵育30～90min，孵育后，500～1000rpm离心1～5min，得到探针d标记的甲胎蛋白特异性抗体1。
15、优选的，将zif-8溶解在水中，搅拌至完全溶解，得到所述mof溶液。
16、优选的，探针k标记的甲胎蛋白特异性抗体2的制备方法包括如下步骤：
17、将聚合物和mof溶液按1:10～50的体积比混合，得到所述探针k。
18、优选的，探针k标记的甲胎蛋白特异性抗体2的制备方法包括如下步骤：
19、将甲胎蛋白特异性抗体2和探针k按1～8:1的质量比混合，在10～50℃条件下用500～1000rpm震荡孵育30～90min，再次加入探针k，此时加入的探针k的质量和甲胎蛋白特异性抗体2质量的比例为0.5～1:1，然后10～50℃避光静置5～10min，静置后，500～1000rpm离心1～5min，得到探针k标记的甲胎蛋白特异性抗体2。
20、一种测定甲胎蛋白含量的均相化学发光试剂盒，包括试剂1、试剂2、待测样本；
21、试剂1包括用缓冲液稀释抗体1制得的抗体，抗体1包括前述的测定甲胎蛋白含量的均相化学发光试剂盒的探针d标记的甲胎蛋白特异抗体1；
22、试剂2包括用缓冲液稀释抗体2制得的抗体，抗体2包括前述的测定甲胎蛋白含量的均相化学发光试剂盒的探针k标记的甲胎蛋白特异性抗体2；
23、反应体系包括20～100μl待测样本20～100μl，20～100μl试剂1，20～100μl试剂2；孵育温度20～50℃，孵育时间10～20min。
24、本专利技术的有益效果是：
25、第一，本专利技术提供一种基于均相化学发光法的甲胎蛋白含量测定方法。该方法利用标记有化学发光标记物的两种特异性抗体，与待测样本中的甲胎蛋白结合形成夹心免疫复合物，然后外界给予激发光从而诱导化学发光反应的发生，释放大量光子并形成化学发光信号，通过检测发光信号的强度从而达到定量分析甲胎蛋白含量的目的。具体而言，本专利技术的测定方法包括以下步骤：
26、1、将化学发光标记物分别结合到两种特异性抗体上，并分散至合适的保存缓冲体系中，配制成试剂1和试剂2；
27、2、将标记好的试剂1、试剂2与待测样本混合、孵育、结合，形成“特异性抗体1-甲胎蛋白-特异性抗体2”复合物；
28、3、利用化学发光分析仪给予激发光并检测发光信号强度，根据信号强度与甲胎蛋白浓度的线性关系，计算得出待测样本中甲胎蛋白的含量。
29、第二，本专利技术与传统的化学发光方法相比具有许多优势，反应过程中无需清洗分离，避免磁珠清洗过程中磁珠破裂或丢失等情况造成的结果偏差，大幅提升准确度的同时还能显著提高检测效率。此外，本专利技术不含生物素、链酶亲和素等物质，降低检测成本，且节能环保。
30、第三，本专利技术制备新型结构，1.探针d标记的甲胎蛋白特异性抗体1为纳米凝胶-抗体复合物，通过聚乙烯亚胺与戊二醛交联形成的纳米凝胶，表面修饰有4arm-peg-sh，进一步与甲胎蛋白特异性抗体1结合。纳米凝胶结构提供了较大的表面积和多功能的表面化学性质，有助于提高抗体的标记效率和稳定性。2.探针k标记的甲胎蛋白特异性抗体2为mof-抗体复合物，基于zif-8的金属有机框架，表面修饰有4arm-peg-sh，进一步与甲胎蛋白特异性抗体2结合。mof结构提供了高比表面积和孔隙结构，有助于增强抗体的负载能力和标记效率。
31、第四，本专利技术制备中的机理：1.多功能表面修饰：通过peg-sh对纳米凝胶和mof的表面修饰，不仅提高了探针的生物相容性和稳定性，还提供了功能化的结合位点，确保抗体在探针表面的高效结合和均匀分布。2.协同作用：在检测时需要将试剂1和试剂2孵育，纳米凝胶和mof结构与抗体结合后，形成的复合物在检测过程中表现出协同作用。纳米凝胶的柔性和mof的刚性相结合，提供了稳定且灵活的检测平台，增强了探针与目标抗原的特异性结合能力。3.增强信号放大效应：在检测时需要将试剂1和试剂2孵育，纳米凝胶和mof的多孔结构有助于捕获和浓缩更多的目标抗原分子，提高化学发光信号的强度。此外，纳米凝胶的高分散性和mof的高比表面积进一步放大了检测信号，使得检测灵敏度显著提升。4.降低背景干扰：peg-sh修饰通过减少非特异性吸附和背景噪音，进一步提高了检测的准确性和特异性。多功能表面修饰的探针能够在复杂样本环境中稳定存在，保证了检测结果的可靠性。
32、综上所述，本专利技术提供了一种测定甲胎蛋白含量的均相化学发光法，通过优化反应条件等手段，有效提高了测定的准确性和灵敏度，为医学诊断和治疗提供了更加准确、可靠的支持。总之均相化学发光法试剂盒是一种高效、灵敏的甲胎蛋白含量测定工具，在癌症筛查、肝炎诊断等领域具有广泛的应用前景。
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【技术保护点】
1.一种测定甲胎蛋白含量的均相化学发光试剂盒，其特征在于，包括探针D标记的甲胎蛋白特异性抗体1和探针K标记的甲胎蛋白特异性抗体2，
2.根据权利要求1所述的测定甲胎蛋白含量的均相化学发光试剂盒，其特征在于，将聚乙烯亚胺溶解在水中，搅拌，然后加入戊二醛，搅拌，得到所述纳米凝胶溶液。
3.根据权利要求1所述的测定甲胎蛋白含量的均相化学发光试剂盒，其特征在于，所述聚合物包括PEG-SH，所述PEG-SH包括4arm-PEG-SH。
4.根据权利要求1所述的测定甲胎蛋白含量的均相化学发光试剂盒，其特征在于，将PEG-SH溶解在水中，得到聚合物。
5.根据权利要求1所述的测定甲胎蛋白含量的均相化学发光试剂盒，其特征在于，探针D标记的甲胎蛋白特异性抗体1的制备方法包括如下步骤：
6.根据权利要求1所述的测定甲胎蛋白含量的均相化学发光试剂盒，其特征在于，探针D标记的甲胎蛋白特异性抗体1的制备方法包括如下步骤：
7.根据权利要求1所述的测定甲胎蛋白含量的均相化学发光试剂盒，其特征在于，将ZIF-8溶解在水中，搅拌至完全溶解，得到所述MOF溶液。
8.根据权利要求1所述的测定甲胎蛋白含量的均相化学发光试剂盒，其特征在于，探针K标记的甲胎蛋白特异性抗体2的制备方法包括如下步骤：
9.根据权利要求1所述的测定甲胎蛋白含量的均相化学发光试剂盒，其特征在于，探针K标记的甲胎蛋白特异性抗体2的制备方法包括如下步骤：
10.一种测定甲胎蛋白含量的均相化学发光试剂盒，其特征在于，包括试剂1、试剂2、待测样本；
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【技术特征摘要】
1.一种测定甲胎蛋白含量的均相化学发光试剂盒，其特征在于，包括探针d标记的甲胎蛋白特异性抗体1和探针k标记的甲胎蛋白特异性抗体2，
2.根据权利要求1所述的测定甲胎蛋白含量的均相化学发光试剂盒，其特征在于，将聚乙烯亚胺溶解在水中，搅拌，然后加入戊二醛，搅拌，得到所述纳米凝胶溶液。
3.根据权利要求1所述的测定甲胎蛋白含量的均相化学发光试剂盒，其特征在于，所述聚合物包括peg-sh，所述peg-sh包括4arm-peg-sh。
4.根据权利要求1所述的测定甲胎蛋白含量的均相化学发光试剂盒，其特征在于，将peg-sh溶解在水中，得到聚合物。
5.根据权利要求1所述的测定甲胎蛋白含量的均相化学发光试剂盒，其特征在于，探针d标记的甲胎蛋白特异性抗体1的制备...
【专利技术属性】
技术研发人员：常俊骏，周会敏，
申请(专利权)人：威特曼医学检验南京有限公司，
类型：发明
国别省市：
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