【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及食品科学中天然产物开发和食品添加剂的。更具体地说，本专利技术涉及一种乳酸菌胞外多糖与多酚复合物的制备方法。
技术介绍
1、近年来富含有益健康成分的功能性食品越来越受欢迎。多酚是在各种新鲜农产品和食品中发现的最重要的功能和生物活性分子之一，表现出强大的生物活性，如抗氧化、抗癌、抗突变、抗肿瘤、降血糖等，还可作为天然防腐剂。多酚中的黄酮类和酚酸，如槲皮素、儿茶素、表没食子儿茶素没食子酸酯（egcg）、绿原酸、咖啡酸、阿魏酸等，是最常见的研究对象。然而，大多数多酚在水中的溶解度有限，会显著影响其生物利用度，从而降低其潜在的健康益处。为了克服这一限制，多糖和多酚的组合被认为是改善多酚理化性质的有效方法，对最终食品的营养方面产生重大影响。
2、目前对乳酸菌的研究主要集中在菌株资源的开发、活性代谢产物的益生特性和功能特性，乳酸菌胞外多糖作为大多数乳酸菌的次生代谢产物，主要集中在其结构鉴定、功能特性和构效关系等方面。
3、然而，乳酸菌胞外多糖与多酚制备复合物的功能特性仍不清楚。因此，探究乳酸菌的胞外多糖与多酚的制备方法及其复合物的功能特性，对促进和丰富乳酸菌胞外多糖类-多酚复合物在功能食品领域的应用具有重要意义。
技术实现思路
1、本专利技术提供一种乳酸菌胞外多糖与多酚复合物的制备方法，其具有制备方法简单方便、过程安全可控、可实现连续化和低成本绿色生产等优点，乳酸菌胞外多糖与多酚复合物能够协同发挥优良的抗氧化和抗菌活性，充分利用乳酸菌菌种资源，为拓展乳酸菌胞
2、为了实现根据本专利技术的这些目的和其它优点，提供了一种乳酸菌胞外多糖与多酚复合物的制备方法，包括：
3、采用离心醇沉法制备乳酸菌胞外多糖，分别配制浓度为1.5~2.5 mg/ml乳酸菌胞外多糖溶液与0.5~1.5 mg/ml的多酚溶液，以体积比1~3:1混合，调节ph至5.5～7.5，添加nacl至其浓度0～40 mmol/l，先在0～25℃下搅拌，再在20~30 khz、20~60 w的超声条件下处理5~10 min，转移到分子截留量800~1200 da透析袋中，用去离子水在25~40℃下透析12~24 h以去除游离多酚，将透析液依次进行预冷冻处理、冷冻干燥处理，得到乳酸菌胞外多糖与多酚复合物。
4、优选的是，透析液的预冷冻处理条件为：将透析液置于-20℃预冷冻16~24 h，透析液的冷冻干燥的条件为：真空条件下-60~-50℃冷冻干燥40~60 h。
5、优选的是，多酚为槲皮素、egcg、儿茶素、绿原酸、咖啡酸、阿魏酸中的至少一种。
6、优选的是，采用离心醇沉法制备乳酸菌胞外多糖，具体包括：
7、步骤一、将乳酸菌发酵剂添加到巴氏灭菌牛乳中进行传代活化，将活化的乳酸菌发酵剂添加到新鲜牛乳培养基中进行发酵培养，直至发酵乳凝固；
8、步骤二、用去离子水稀释发酵乳，通过冷冻离心处理获得含有胞外多糖的上清液；
9、步骤三、向含有胞外多糖的上清液中加入三氯乙酸溶液，在2~8℃下沉淀蛋白4~10h，通过冷冻离心处理去除蛋白质沉淀，获得胞外多糖上清液；
10、步骤四、将胞外多糖上清液进行旋蒸浓缩处理，然后与乙醇混合，放置在2~8℃过夜醇沉，通过离心处理收集沉淀的胞外多糖样品。
11、优选的是，采用离心醇沉法制备乳酸菌胞外多糖，具体包括：
12、步骤一、将乳酸菌发酵剂按添加量1~7% (w/w)添加到巴氏灭菌牛乳中进行传代活化4~24 h，反复活化2~3次，将活化的乳酸菌发酵剂按添加量3~7%（w/w）添加到新鲜牛乳培养基中进行发酵培养，直至发酵乳凝固；
13、步骤二、用去离子水稀释发酵乳，稀释倍数为1~1.5倍，通过冷冻离心处理获得含有胞外多糖的上清液；
14、步骤三、向含有胞外多糖的上清液中加入浓度为70~90% (w/w)三氯乙酸溶液，使其浓度达到2~6%（w/v），在2~8℃下沉淀蛋白4~10 h，通过冷冻离心处理去除蛋白质沉淀，获得胞外多糖上清液；
15、步骤四、将胞外多糖上清液进行旋蒸浓缩处理至原体积的0.1~0.15倍，与浓度为90~99%（v/v）乙醇按体积比(2.0~3.5):1混合，放置在2~8℃过夜醇沉12~36 h，通过离心处理收集沉淀的胞外多糖样品。
16、优选的是，还包括：
17、步骤五、用去离子水溶解胞外多糖样品，转移到分子截留量8000~14000 da透析袋中，在2~8℃下透析36~60 h，依次进行预冷冻处理、冷冻干燥处理，获得高纯度乳酸菌胞外多糖样品。
18、优选的是，乳酸菌发酵剂为嗜热链球菌、保加利亚杆菌、植物乳杆菌、双歧杆菌、瑞士乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、发酵乳杆菌、副干酪乳杆菌、乳酸乳球菌中的至少一种。
19、所述的制备方法得到的乳酸菌胞外多糖与多酚复合物。
20、本专利技术至少包括以下有益效果：
21、第一、本专利技术具有制备方法简单方便、过程安全可控、可实现连续化和低成本绿色生产等优点，充分利用乳酸菌菌种资源，为拓展乳酸菌胞外多糖的应用提供思路。
22、第二、本专利技术制备的乳酸菌胞外多糖与多酚复合物能够促进胞外多糖与多酚的结合及相互作用，协同发挥优良的抗氧化和抗菌活性，并显著增强了多酚在消化吸收中的生物可及性。
23、本专利技术的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本专利技术的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
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1.乳酸菌胞外多糖与多酚复合物的制备方法，其特征在于，包括：
2.如权利要求1所述的乳酸菌胞外多糖与多酚复合物的制备方法，其特征在于，透析液的预冷冻处理条件为：将透析液置于-20℃预冷冻16~24 h，透析液的冷冻干燥的条件为：真空条件下-60~-50℃冷冻干燥40~60 h。
3.如权利要求1所述的乳酸菌胞外多糖与多酚复合物的制备方法，其特征在于，多酚为槲皮素、EGCG、儿茶素、绿原酸、咖啡酸、阿魏酸中的至少一种。
4.如权利要求1所述的乳酸菌胞外多糖与多酚复合物的制备方法，其特征在于，采用离心醇沉法制备乳酸菌胞外多糖，具体包括：
5.如权利要求4所述的乳酸菌胞外多糖与多酚复合物的制备方法，其特征在于，采用离心醇沉法制备乳酸菌胞外多糖，具体包括：
6.如权利要求4或5所述的乳酸菌胞外多糖与多酚复合物的制备方法，其特征在于，还包括：
7.如权利要求6所述的乳酸菌胞外多糖与多酚复合物的制备方法，其特征在于，乳酸菌发酵剂为嗜热链球菌、保加利亚杆菌、植物乳杆菌、双歧杆菌、瑞士乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、发酵乳杆菌、副干酪
8.如权利要求1~7任一项所述的制备方法得到的乳酸菌胞外多糖与多酚复合物。
...【技术特征摘要】
1.乳酸菌胞外多糖与多酚复合物的制备方法，其特征在于，包括：
2.如权利要求1所述的乳酸菌胞外多糖与多酚复合物的制备方法，其特征在于，透析液的预冷冻处理条件为：将透析液置于-20℃预冷冻16~24 h，透析液的冷冻干燥的条件为：真空条件下-60~-50℃冷冻干燥40~60 h。
3.如权利要求1所述的乳酸菌胞外多糖与多酚复合物的制备方法，其特征在于，多酚为槲皮素、egcg、儿茶素、绿原酸、咖啡酸、阿魏酸中的至少一种。
4.如权利要求1所述的乳酸菌胞外多糖与多酚复合物的制备方法，其特征在于，采用离心醇沉法制备乳酸菌胞外...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵晓燕，葛志文，王丹，秦培友，赵文婷，王盼，
申请(专利权)人：北京市农林科学院，
类型：发明
国别省市：
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