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外泌体制备系统技术方案

技术编号:42783435 阅读:14 留言:0更新日期:2024-09-21 00:43
本申请涉及一种外泌体制备系统,包括依次连接的细胞反应器、第一滤器、第二滤器和外泌体储存罐,细胞反应器与第一滤器连通,用于将细胞混合液输送至第一滤器,经过第一滤器分离的包含外泌体的无细胞溶液输送至第二滤器,经过第二滤器分离的包含外泌体的目标溶液输入至外泌体储存罐进行外泌体富集。本申请提供的方案,能够实现外泌体的制备、分离和富集,降低外泌体产品中的杂质,提高外泌体产品的纯度,并确保外泌体产品满足外泌体制剂含量标准。

【技术实现步骤摘要】

本申请涉及生物医药,尤其涉及一种外泌体制备系统


技术介绍

1、外泌体(exosome)是一种可以由各种细胞分泌的含有该种细胞特有的mrna、蛋白质及多肽等大分子的囊泡体,直径在30-150nm。由于外泌体兼具来源细胞的特征和纳米级的直径,这使得外泌体极易穿过微小血管和血脑屏障,在疾病诊断检测、疾病治疗、药物递送等方面展现出巨大的应用潜力,并成为近年来新兴的热门研究赛道。

2、可产生外泌体的细胞很多,目前比较常用且临床成功的有干细胞。干细胞外泌体含有主要功效成分:egf、hegf、bfgf、afgf、tgfβ、pdgf、kgf等生长因子,可通过局部注射或将其用于护肤品等领域,起到祛皱、美白等作用。另外,还有很多公司或机构利用干细胞外泌体做疾病治疗研究,如:aegle therapeutics(治疗皮肤病);aruna bio(治疗神经系统疾病);mdimune(治疗呼吸系统疾病)等。nk细胞同样可以产生大量的外泌体,其含有的主要功效成分有:il-2、il-21、il-10、il-8、ifn-γ、tnf-α、tnf-β、其他趋化因子包括mipα、mipβ、mdc、mcp-2等。

3、由于外泌体分布在极其复杂的细胞培养溶液中,这使得外泌体分离成为目前限制外泌体临床应用的关键。


技术实现思路

1、为解决或部分解决相关技术中存在的问题,本申请提供一种在无菌条件下的外泌体制备系统,能够实现外泌体制备过程中的分步分离,去除各种细胞,降低外泌体产品中的杂质,提高外泌体产品的纯度和质量,同时还可以实现外泌体的富集,确保外泌体产品满足外泌体制剂含量标准。

2、本申请第一方面提供一种外泌体制备系统,包括:

3、细胞反应器,所述细胞反应器用于细胞接种、生长、扩增以及用于短时储存细胞混合液;

4、第一滤器,所述第一滤器设有第一入口、第一过滤口和第一出口;所述细胞反应器与所述第一滤器的第一入口连通,用于将细胞混合液输送至所述第一滤器;所述第一出口用于输出细胞溶液,所述第一过滤口用于滤出无细胞溶液,无细胞溶液包含外泌体;

5、第二滤器,所述第二滤器设有第二入口、第二过滤口和第二出口;所述第一滤器的第一过滤口与所述第二滤器的第二入口连通,用于将无细胞溶液输送至所述第二滤器;所述第二出口用于输出目标溶液,目标溶液包含外泌体;输出含有杂质的废液,所述第二过滤口用于滤出含有杂质的废液;

6、外泌体储存罐,所述第二滤器的第二出口与所述外泌体储存罐连通,用于将含有外泌体的目标溶液输送至所述外泌体储存罐进行外泌体富集。

7、在本申请中,第一滤器主要用于分离细胞和外泌体,细胞需要使用可以回输至细胞反应器,或者,将使用过的细胞当做废液处理;第二滤器主要用于纯化外泌体,去除溶液中所含有小分子的杂质,同时富集外泌体。

8、在本申请的一些实施方式中,所述系统还包括外泌体制剂储罐,用于盛装外泌体制剂缓冲液;所述外泌体制剂储罐与所述外泌体储存罐相连,用于将所述外泌体制剂缓冲液输送所述外泌体储存罐。

9、在本申请的一些实施方式中,所述系统还包括第三滤器,所述第三滤器设有第三入口、第三过滤口和第三出口;所述第三滤器的第三入口与所述外泌体储存罐连通,用于将外泌体溶液输送至第三滤器;所述第三出口与所述外泌体储存罐连通,用于输出经过浓缩的外泌体溶液并使经过浓缩的外泌体溶液回流至所述外泌体储存罐;所述第三过滤口用于滤出无外泌体溶液。

10、在本申请中,第三滤器主要用于外泌体富集和溶液置换,使得所需要的外泌体在彻底置换后的制剂溶液内形成终产品,然后进行产品灌装。

11、在本申请的一些实施方式中,所述系统还包括产品储存袋,所述产品储存袋与所述外泌体储存罐连通,用于储存所述外泌体储存罐排出的外泌体。

12、在本申请的一些实施方式中,所述产品储存袋有多个,各个所述产品储存袋分别与所述外泌体储存罐连通。

13、在本申请的一些实施方式中,所述第一滤器中滤膜的孔径为1-3μm。

14、在本申请的一些实施方式中,所述第二滤器中滤膜的截留分子量为100-300kd。

15、在本申请的一些实施方式中,所述第三滤器中滤膜的截留分子量为100-300kd。

16、在本申请的一些实施方式中,所述系统还包括流体调节机构,所述流体调节机构分布在第一滤器的第一入口和第一出口、第二滤器的第二入口和第二出口处,分别用于调节细胞混合液通过所述第一滤器、无细胞溶液通过所述第二滤器的流速。

17、在本申请的一些实施方式中,所述系统还包括培养基储罐,所述培养基储罐与所述细胞反应器连通以用于向所述细胞反应器输送培养基。

18、本申请提供的技术方案可以包括以下有益效果:

19、待细胞反应器内的细胞培养到一定阶段,细胞分泌出大量外泌体时,本申请将细胞反应器内的细胞混合液从排液口通入第一滤器,经由第一滤器的分离作用截留细胞溶液,并将无细胞溶液输送至第二滤器,经过第二滤器的分离作用截留包含外泌体的目标溶液并输送至外泌体储存罐进行外泌体富集,完成外泌体的生产、制备、分离和富集。

20、进一步地,外泌体制剂储罐内的外泌体制剂缓冲液通入外泌体储存罐可以使外泌体保持稳定性;外泌体储存罐内的外泌体溶液输送至第三滤器,经由第三滤器的分离作用可以将外泌体截留实现外泌体的浓缩,并将截留的浓缩的外泌体溶液再次回流至外泌体储存罐内实现外泌体的进一步富集,并且可以将细胞培养液彻底清除,同时置换外泌体制剂缓冲液,提高外泌体产品的纯度。

21、应当理解的是,以上的一般描述和后文的细节描述仅是示例性和解释性的,并不能限制本申请。

本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种外泌体制备系统,其特征在于,包括:

2.根据权利要求1所述的系统,其特征在于,所述系统还包括外泌体制剂储罐(10),用于盛装外泌体制剂缓冲液;所述外泌体制剂储罐(10)与所述外泌体储存罐(4)相连,用于将所述外泌体制剂缓冲液输送所述外泌体储存罐(4)。

3.根据权利要求1所述的系统,其特征在于,所述系统还包括第三滤器(11),所述第三滤器(11)设有第三入口、第三过滤口和第三出口;所述第三滤器(11)的第三入口与所述外泌体储存罐(4)连通,用于将外泌体溶液输送至第三滤器(11);所述第三出口与所述外泌体储存罐(4)连通,用于输出经过浓缩的外泌体溶液并使经过浓缩的外泌体溶液回流至所述外泌体储存罐(4);所述第三过滤口用于滤出无外泌体溶液。

4.根据权利要求1所述的系统,其特征在于,所述系统还包括产品储存袋(9),所述产品储存袋(9)与所述外泌体储存罐(4)连通,用于储存所述外泌体储存罐(4)排出的外泌体。

5.根据权利要求4所述的系统,其特征在于,所述产品储存袋(9)有多个,各个所述产品储存袋(9)分别与所述外泌体储存罐(4)连通。

6.根据权利要求1至5任意一项所述的系统,其特征在于,所述第一滤器(2)中滤膜的孔径为1-3μm。

7.根据权利要求1至5任意一项所述的系统,其特征在于,所述第二滤器(3)中滤膜的截留分子量为100-300kD。

8.根据权利要求3所述的系统,其特征在于,所述第三滤器(11)中滤膜的截留分子量为100-300kD。

9.根据权利要求1所述的系统,其特征在于,所述系统还包括流体调节机构(13),所述流体调节机构(13)分布在第一滤器(2)的第一入口和第一出口、第二滤器(3)的第二入口和第二出口处,分别用于调节细胞混合液通过所述第一滤器(2)、无细胞溶液通过所述第二滤器(3)的流速。

10.根据权利要求1所述的系统,其特征在于,所述系统还包括培养基储罐(5),所述培养基储罐(5)与所述细胞反应器(1)连通以用于向所述细胞反应器(1)输送培养基。

...

【技术特征摘要】

1.一种外泌体制备系统,其特征在于,包括:

2.根据权利要求1所述的系统,其特征在于,所述系统还包括外泌体制剂储罐(10),用于盛装外泌体制剂缓冲液;所述外泌体制剂储罐(10)与所述外泌体储存罐(4)相连,用于将所述外泌体制剂缓冲液输送所述外泌体储存罐(4)。

3.根据权利要求1所述的系统,其特征在于,所述系统还包括第三滤器(11),所述第三滤器(11)设有第三入口、第三过滤口和第三出口;所述第三滤器(11)的第三入口与所述外泌体储存罐(4)连通,用于将外泌体溶液输送至第三滤器(11);所述第三出口与所述外泌体储存罐(4)连通,用于输出经过浓缩的外泌体溶液并使经过浓缩的外泌体溶液回流至所述外泌体储存罐(4);所述第三过滤口用于滤出无外泌体溶液。

4.根据权利要求1所述的系统,其特征在于,所述系统还包括产品储存袋(9),所述产品储存袋(9)与所述外泌体储存罐(4)连通,用于储存所述外泌体储存罐(4)排出的外泌体。

5.根据权利要求4所述的系统,其特...

【专利技术属性】
技术研发人员:周新华
申请(专利权)人:周新华
类型:新型
国别省市:

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