【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
1、胞外基质(extracellular matrix，ecm)和ecm蛋白在生长、伤口愈合、细胞迁移和分化等过程中发挥重要的生理作用。此外，在疾病状态下，ecm的组成发生变化并且先前的观察表明胞外基质(ecm)蛋白的这些变化在癌症进展和转移中、在心血管疾病中和在纤维化中发挥重要作用。需要靶向ecm蛋白的新的分子，以用于成像和靶向疾病状态。
技术实现思路
1、本公开内容的一些方面提供了与细胞因子偶联的抗ecm纳米抗体，其可用于将细胞因子靶向至肿瘤微环境，以刺激针对肿瘤的局部免疫应答。本文中认识到数个参数影响效力，包括提高纳米抗体对肿瘤ecm的亲和力、ecm靶标的表达水平和递送途径(全身性或瘤内)。本文中所述的亲和力提高的纳米抗体提供了优于现有技术抗体(包括“亲本njb2”抗体)的显著优势。亲本纳米抗体njb2对纤连蛋白的eiiib结构域具有特异性，所述纤连蛋白的eiiib结构域在疾病部位例如肿瘤、转移瘤和纤维化等中显示出选择性表达。本文中所述的亲和力提高的纳米抗体保留了其对eiiib的特异性。
2、在一个方面中，本公开内容提供了与纤连蛋白的eiiib结构域特异性结合并且包含以下的纳米抗体：a)互补决定区(complementarity-determining region，cdr)1，其包含g(s/r/i/n)tfsh(n/s/y/k)ag(g/s)；b)cdr2，其包含(g/r)(i/v)(s/r/g/n)s(d/a/y)gni(n/s)；和c)cdr3，
3、在一些实施方案中，纳米抗体包含：a)cdr1，其选自
4、gstfshnagg(seq td no：54)，gstfshsagg(seq td no：57)，gstfshyagg(seq idno：107)，gstfshkagg(seq id no：106)，grtfshnagg(seq id no：105)，gstfshnags(seq idno：104)，gitfshnagg(seq id no：103)，grtfshsagg(seq id no：63)和gntfshsagg(seq idno：102)；
5、b)cdr2，其选自
6、gissdgnin(seq id no：55)，girsdgnin(seq id no：58)，gigsdgnin(seq id no：59)，gissagnin(seq id no：60)，rissdgnin(seq id no：108)，ginsygnin(seq id no：109)，gigsagnin(seq id no：62).girsdgnis(seq id no：101)和gvrsdgnin(seq id no：61)；；
7、以及c)cdr3，其选自
8、nirgsygntyysr(seq id no：56)，nirgtygntyysr(seq id no：100)，
9、nirgsygntyyrr(seq id no：99)和nirgsygstyysr(seq id no：98)。
10、在一些实施方案中，纳米抗体包含cdr1、cdr2和cdr3，a)所述cdr1、cdr2和cdr3分别包含：
11、gstfshsagg(seq id no：57)，girsdgnin(seq id no：58)
12、和nirgsygntyysr(seq id no：56)；(b)所述cdr1、cdr2和cdr3分别包含：
13、gstfshsagg(seq id no：57)，
14、gigsdgnin(seq id no：59)和nirgsygntyysr(seq id no：56)；(c)所述cdr1、cdr2和cdr3分别包含：
15、gstfshsagg(seq id no：57)，gissagnin(seq id no：60)
16、和nirgsygntyysr(seq id no：56)；(d)所述cdr1、cdr2和cdr3分别包含：gstfshsagg(seq id no：57)
17、gigsagnin(seq id no：62)和nirgsygntyysr(seq id no：56)；(e)所述cdr1、cdr2和cdr3分别包含：
18、gstfshsagg(seq id no：57)，gvrsdgnin(seq id no：61)
19、和nirgsygntyysr(seq id no：56)；或f)所述cdr1、cdr2和cdr3分别包含：grtfshsagg(seq id no：63)，
20、girsdgnin(seq id no：58)和nirgsygntyysr(seq id no：56)。
21、在一些实施方案中，纳米抗体包含cdr1、cdr2和cdr3，所述cdr1、cdr2和cdr3分别包含
22、gstfshsagg(seq id no：57)，girsdgnin(seq id no：58)
23、和nirgsygntyysr(seq id no：56)。
24、在一些实施方案中，纳米抗体还包含框架1，所述框架1包含：
25、a)qvqlvetggglvqaggslrlscaas(seq id no：64)；b)
26、qvqlvgtggglvqaggslrlscaas(seq id no：68)；c)
27、rvqlvetggglvqaggslrlscaas(seq id no：85)；d)
28、qvrlvetggglvqaggslrlscavs(seq id no：86)；e)
29、rvqlvetggglvqaggslrlscavs(seq id no：66)；f)
30、qvqlvetggglvqaggslrlscavs(seq id no：71)；g)
31、qvqlvetrgglvqaggslrlscavs(seq id no：72)；h)
32、qvqlvetegglvqaggslrlscaas(seq id no：70)；i)
33、rvqlvetegglvqaggslrlscaas(seq id no：87)；j)
34、qvrlvetggglvqaggslrlscaas(seq id no：88)；k)
35、qvqlveaggglvqaggslrlscaas(seq id no：73)；l)
36、qvqlvetrgglvqaggslrlscaas(seq id no：89)；m)
37、rvqlvetrgg本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.纳米抗体，其与纤连蛋白的EIIIB结构域特异性结合并且包含以下：
2.权利要求1所述的纳米抗体，其包含：
3.权利要求1或2所述的纳米抗体，其包含CDR1、CDR2和CDR3，
4.权利要求3所述的纳米抗体，其中所述纳米抗体包含CDR1、CDR2和CDR3，所述CDR1、CDR2和CDR3分别包含GSTFSHSAGG(SEQ ID NO：57)，GIRSDGNIN(SEQ ID NO：58)和NIRGSYGNTYYSR(SEQ ID NO：56)。
5.权利要求1至4中任一项所述的纳米抗体，其还包含框架1，所述框架1包含：
6.权利要求5所述的纳米抗体，其包含框架1，所述框架1包含：
7.权利要求1至6中任一项所述的纳米抗体，其还包含框架4，所述框架4包含：
8.权利要求7所述的纳米抗体，其包含框架4，所述框架4包含：
9.权利要求1至8中任一项所述的纳米抗体，其中所述纳米抗体包含SEQ ID No.2至53中任一者的氨基酸序列。
10.权利要求9所述的纳米抗体，其中所
11.权利要求1至10中任一项所述的纳米抗体，其中所述纳米抗体与载物分子缀合。
12.权利要求11所述的纳米抗体，其中所述载物分子与所述纳米抗体的N端或C端连接。
13.权利要求11所述的纳米抗体，其中所述载物分子是分子成像探针、药物、毒素、抗体、细胞因子、酶(例如，ECM修饰酶)、CAR-T细胞、放射性同位素、蛋白质或纳米粒。
14.权利要求12所述的纳米抗体，其中所述载物分子是选自IL-2、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-18、TNF、lFNg、IFNb、IFNa和趋化因子或者其突变体的细胞因子。
15.权利要求1至10中任一项所述的纳米抗体，其中所述纳米抗体与载体连接或与载体缔合。
16.权利要求15所述的纳米抗体，其中所述载体是纳米粒。
17.权利要求15至16中任一项所述的纳米抗体，其中所述载体还包含载物分子。
18.权利要求17所述的纳米抗体，其中所述载物分子选自药物、毒素、抗体、细胞因子、核酸、siRNA、shRNA、经修饰mRNA、DNA、CRISPR Cas9试剂、寡核苷酸和成像探针。
19.药物组合物，其包含权利要求1至18中任一项所述纳米抗体以及可药用载体。
20.核酸，其包含编码权利要求1至18中任一项所述纳米抗体的核酸序列。
21.载体，其包含权利要求19所述核酸。
22.细胞，其包含权利要求16所述核酸或权利要求21所述载体。
23.用于产生纳米抗体的方法，其包括(i)在适于允许表达所述纳米抗体的条件下培养权利要求22所述细胞，和(ii)回收所表达纳米抗体。
24.治疗与纤连蛋白相关的疾病或病症的方法，其包括向有此需要的对象施用有效量的权利要求1至18中任一项所述纳米抗体或权利要求19所述药物组合物。
25.方法，其包括向患有与纤连蛋白相关的疾病或病症的对象施用有效量的权利要求11至14或17至18中任一项所述纳米抗体，以将载物分子递送至病变组织的胞外基质。
26.权利要求25所述的方法，其中所述方法包括在对象中确定纤连蛋白的EIIIB结构域的存在或不存在，以及确定所述对象是否患有与纤连蛋白相关的疾病或病症。
27.权利要求25所述的方法，其中所述方法包括通过随时间推移测量纤连蛋白的EIIIB结构域的存在或不存在来追踪与纤连蛋白相关的疾病或病症的进展。
28.权利要求25所述的方法，其中所述方法包括在第一时间点和在第二时间点测量从对象中分离的组织样品中纤连蛋白的EIIIB结构域的存在或不存在，以及基于在第一时间点和第二时间点纤连蛋白的EIIIB结构域的存在或不存在的变化来确定所述疾病或病症向晚期阶段的进展，其中：
29.权利要求24至28中任一项所述的方法，其中所述疾病或病症是癌症、心血管疾病、炎性障碍或纤维化。
30.权利要求29所述的方法，其中所述癌症是转移性癌症。
31.权利要求29或30所述的方法，其中所述癌症是黑素瘤、乳腺癌或胰腺癌。
32.权利要求24至31中任一项所述的方法，其中所述施用是静脉内、瘤内、皮下、肌内、皮内、腹膜内、鼻内、气管内、鞘内、颅内、腹膜内、经直肠、经鼻或经口。
33.纳米抗体细胞因子融合蛋白，其包含与细胞因子融合的特异性结合纤连蛋白...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.纳米抗体，其与纤连蛋白的eiiib结构域特异性结合并且包含以下：
2.权利要求1所述的纳米抗体，其包含：
3.权利要求1或2所述的纳米抗体，其包含cdr1、cdr2和cdr3，
4.权利要求3所述的纳米抗体，其中所述纳米抗体包含cdr1、cdr2和cdr3，所述cdr1、cdr2和cdr3分别包含gstfshsagg(seq id no：57)，girsdgnin(seq id no：58)和nirgsygntyysr(seq id no：56)。
5.权利要求1至4中任一项所述的纳米抗体，其还包含框架1，所述框架1包含：
6.权利要求5所述的纳米抗体，其包含框架1，所述框架1包含：
7.权利要求1至6中任一项所述的纳米抗体，其还包含框架4，所述框架4包含：
8.权利要求7所述的纳米抗体，其包含框架4，所述框架4包含：
9.权利要求1至8中任一项所述的纳米抗体，其中所述纳米抗体包含seq id no.2至53中任一者的氨基酸序列。
10.权利要求9所述的纳米抗体，其中所述纳米抗体包含seq id no：3的氨基酸序列。
11.权利要求1至10中任一项所述的纳米抗体，其中所述纳米抗体与载物分子缀合。
12.权利要求11所述的纳米抗体，其中所述载物分子与所述纳米抗体的n端或c端连接。
13.权利要求11所述的纳米抗体，其中所述载物分子是分子成像探针、药物、毒素、抗体、细胞因子、酶(例如，ecm修饰酶)、car-t细胞、放射性同位素、蛋白质或纳米粒。
14.权利要求12所述的纳米抗体，其中所述载物分子是选自il-2、il-6、il-8、il-10、il-12、il-15、il-18、tnf、lfng、ifnb、ifna和趋化因子或者其突变体的细胞因子。
15.权利要求1至10中任一项所述的纳米抗体，其中所述纳米抗体与载体连接或与载体缔合。
16.权利要求15所述的纳米抗体，其中所述载体是纳米粒。
17.权利要求15至16中任一项所述的纳米抗体，其中所述载体还包含载物分子。
18.权利要求17所述的纳米抗体，其中所述载物分子选自药物、毒素、抗体、细胞因子、核酸、sirna、shrna、经修饰mrna、dna、crispr cas9试剂、寡核苷酸和成像探针。
19.药物组合物，其包含权利要求1至18中任一项所述纳米抗体以及可药用载体。
20.核酸，其包含编码权利要求1至18中任一项所述纳米抗体的核酸序列。
21.载体，其包含权利要求19所述核酸。
22.细胞，其包含权利要求16所述核酸或权利要求21所述载体。
23.用于产生纳米抗体的方法，其包括(i)在适于允许表达所述纳米抗体的条件下培养权利要求22所述细胞，和(ii)回收所表达纳米抗体。
24.治疗与纤连蛋白相关的疾病或病症的方法，其包括向有此需要的对象施用有效量...
【专利技术属性】
技术研发人员：理查德·O·海因斯，卡尔·戴恩·维特鲁普，努尔·扎伊尔哈尼，努尔·莫明，埃米·卢茨，
申请(专利权)人：麻省理工学院，
类型：发明
国别省市：
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