【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于免疫检测领域，具体涉及胰岛素样生长因子结合蛋白-1和胎儿纤维连接蛋白双联检测体系及其应用和试剂盒。
技术介绍
1、早产是指妊娠达到28周但不足37周就分娩的情况，此时娩出的新生儿称为早产儿。早产是临床上常见的分娩并发症，此时娩出的早产儿各器官发育尚不够健全，出生孕周越小，体重越轻，预后越差。早产占分娩总数的5%～15%，是早产儿死亡的首要原因。早产的原因很多，其发动机制也较为复杂，对早产进行准确预测是临床诊疗中的难点。
2、早产预测中最具共识的预测指标是宫颈长度、胎儿纤维连接蛋白、胰岛素样生长因子结合蛋白-1的测量。
3、胎儿连接纤维蛋白是一种因胎膜与绒毛膜连接未闭合，而可在阴道及分泌物中可检测到的一种糖蛋白，在正常妊娠过程中胎儿连接纤维蛋白只能在妊娠22周前被检测到，自22周期至分娩前，因胎膜和绒毛膜的闭合，胎儿连接纤维蛋白应呈现阴性状态。研究显示胎儿连接纤维蛋白测定的临床意义在于阴性预测价值，对于胎儿连接纤维蛋白定性检测呈阴性（浓度<50ng/ml）的患者，9成以上患者能够继续维持妊娠7天以上；而对于检测结果为阳性（浓度≥50ng/ml）的患者，仅有3成以内在7天到10天内发生分娩。因此，对于宫颈分泌物胎儿连接纤维蛋白检测来说，大量研究表明，其阴性结果对于短期内不发生早产更具预测价值。也有研究提出，其预测结果对于早期妊娠（24-29 周）的预测能力比晚期妊娠强，短期预测（7-14 天）的预测能力更强。因此，在临床中，对胎儿连接纤维蛋白阴性妊娠妇女可减少不必要的干预措施。而胎儿连接纤
4、胰岛素样生长因子结合蛋白-1(insulin-like growth factor bindingprotein-1，简称igfbp-1)主要存在羊水中，是孕期羊水中的一种标志性蛋白质。当发生胎膜破裂时，羊水从胎膜的破口中漏到宫颈阴道中，其中含有的igfbp-1成为胎膜早破诊断的标志。目前检测胎膜早破准确性最高的方法为检测是否出现胰岛素样生长因子结合蛋白-1，准确率可达90％，gfbp-1≥ 25ng/ml判定为阳性，<25ng/ml判定为阴性。
5、胰岛素样生长因子结合蛋白-1和胎儿纤维连接蛋白这两种物质都在子宫发生收缩、胎盘和蜕膜发生剥离时释放至孕妇阴道的物质，当孕妇阴道中上述两种物质出现异常升高，可预测早产早破的发生。胶体金检测胰岛素样生长因子结合蛋白-1和胎儿纤维连接蛋白在医学诊断中具有重要价值，但仍存在灵敏度、特异性低的问题；胶体金法试剂盒的稳定性和重复性也有待提高。
技术实现思路
1、为了解决上述问题，本专利技术提供了一种胰岛素样生长因子结合蛋白-1和胎儿纤维连接蛋白双联检测体系，所述的胰岛素样生长因子结合蛋白-1和胎儿纤维连接蛋白双联检测体系用于检测阴道分泌物中的胰岛素样生长因子结合蛋白-1和胎儿纤维连接蛋白，该方法具有特异性强、重复性强、准确度高，具有较好的长期稳定性。
2、一方面，本专利技术提供了一种胰岛素样生长因子结合蛋白-1和胎儿纤维连接蛋白双联检测体系，该检测体系包括样品垫、免疫胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水纸；
3、所述的样品垫经处理液a处理，所述的处理液a的配方可以是：10-20mm pbs缓冲液，2%-5%m/v peg6000，1%-2%m/v tween-20，1%-2%m/v枸橼酸钠，2%-4%m/v海藻糖，3%-5%m/v bsa，0.3%-0.5%m/v pc-950，ph为7-8；
4、所述的免疫胶体金垫经处理液b处理，所述的处理液b的配方可以是：5-10mm pbs缓冲液，0.1%-0.3%m/v peg6000，0.1%0.5%m/v tween-20，1%-3%m/v kcl，2%-5%m/v海藻糖，0.5%-1.5%m/v甘露醇，1%-2%m/v bsa，0.1%-0.4%m/v pc-950，ph为7-7.8。
5、一些实施例中，所述的处理液a的配方可以是：20mm pbs缓冲液，2%m/v peg6000，1%m/v tween-20，2%m/v枸橼酸钠，4%m/v海藻糖，3%m/v bsa，0.3%m/v pc-950，ph为8；
6、所述的处理液b的配方可以是：5mm pbs缓冲液，0.1%m/v peg6000，0.5%m/vtween-20，1%m/v kcl，2%m/v海藻糖，1.5%m/v甘露醇，1%m/v bsa，0.1%m/v pc-950，ph为7。
7、另一些实施例中，所述的处理液a的配方可以是：10mm pbs缓冲液，5%m/vpeg6000，2%m/v tween-20，1%m/v枸橼酸钠，2%m/v海藻糖，5%m/v bsa，0.5%m/v pc-950，ph为7；
8、所述的处理液b的配方可以是：10mm pbs缓冲液，0.3%m/v peg6000，0.1%m/vtween-20，3%m/v kcl，5%m/v海藻糖，0.5%m/v甘露醇，2%m/v bsa，0.4%m/v pc-950，ph为7.8。
9、具体的，所述的样品垫和免疫胶体金垫的材质可以是：玻璃纤维素膜、聚酯膜或无纺布。
10、优选地，所述的样品垫和免疫胶体金垫的材质可以是玻璃纤维素膜。
11、又一方面，本专利技术提供了一种制备前述胰岛素样生长因子结合蛋白-1和胎儿纤维连接蛋白双联检测体系的方法，所述的方法包括以下步骤：
12、s1、样品垫的制备：将玻璃纤维素膜浸入处前述的理液a中浸泡，烘干备用；
13、s2、免疫胶体金垫的制备：将玻璃纤维素膜先浸入前述的处理液b中浸泡，烘干后，喷涂金标抗体混合溶液，再次烘干后备用；
14、s3、硝酸纤维素膜的制备：在硝酸纤维素膜包被检测线和质控线；
15、s4、试剂条组装：按样品垫-免疫胶体金垫-硝酸纤维素膜-吸水纸的顺序，依次组装；
16、具体地，步骤s1所述的处理液a中浸泡中的浸泡时间为8-15min；步骤s2所述的处理液b中浸泡时间为5-10min。
17、优选地，步骤s1所述的处理液a中浸泡中的浸泡时间为10min；步骤s2所述的处理液b中浸泡时间为7min。
18、具体地，所述的步骤s1和步骤s2的烘干温度可以是35-45℃。
19、优选地，所述的步骤s1和步骤s2的烘干温度可以是40℃。
20、具体地，步骤s2所述的金标抗体混合溶液包括胰岛素样生长因子结合蛋白-1抗体1的金标抗体溶液和胎儿纤维连接蛋白抗体a的金标抗体溶液。
21、进一步具体地，所述的胰岛素样生长因子结合蛋白-1抗体1的金标抗体溶液的制备方法为：
22、（1）向加热沸腾的haucl4水溶液中加入柠檬酸钠，加热搅拌，降温后得胶体金溶液；
23、（2）向（1）中加k2co3溶液，混本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种胰岛素样生长因子结合蛋白-1和胎儿纤维连接蛋白双联检测体系，其特征在于，包括样品垫、免疫胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水纸；
2.根据权利要求1所述胰岛素样生长因子结合蛋白-1和胎儿纤维连接蛋白双联检测体系，其特征在于，所述的样品垫和免疫胶体金垫的材质为玻璃纤维素膜、聚酯膜或无纺布。
3.一种制备权利要求1所述的胰岛素样生长因子结合蛋白-1和胎儿纤维连接蛋白双联检测体系的方法，其特征在于，所述的方法包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤S2所述的金标抗体混合溶液包括胰岛素样生长因子结合蛋白-1抗体1的金标抗体溶液和胎儿纤维连接蛋白抗体a的金标抗体溶液。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤S3所述的T1检测线包被胰岛素样生长因子结合蛋白-1抗体2；所述的T2检测线包被胎儿纤维连接蛋白抗体b；所述的质控线包被IgG抗体。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的IgG抗体为羊抗鼠IgG。
7.权利要求1-2任一项所述的胰岛素样生长因子结合蛋白-1和胎儿纤维连接蛋白双
8.一种胰岛素样生长因子结合蛋白-1和胎儿纤维连接蛋白双联检测的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括权利要求1-2任一项所述的胰岛素样生长因子结合蛋白-1和胎儿纤维连接蛋白双联检测体系。
9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，还包括样品保存试剂。
10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述的样品为宫颈分泌物或阴道分泌物。
...【技术特征摘要】
1.一种胰岛素样生长因子结合蛋白-1和胎儿纤维连接蛋白双联检测体系，其特征在于，包括样品垫、免疫胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水纸；
2.根据权利要求1所述胰岛素样生长因子结合蛋白-1和胎儿纤维连接蛋白双联检测体系，其特征在于，所述的样品垫和免疫胶体金垫的材质为玻璃纤维素膜、聚酯膜或无纺布。
3.一种制备权利要求1所述的胰岛素样生长因子结合蛋白-1和胎儿纤维连接蛋白双联检测体系的方法，其特征在于，所述的方法包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤s2所述的金标抗体混合溶液包括胰岛素样生长因子结合蛋白-1抗体1的金标抗体溶液和胎儿纤维连接蛋白抗体a的金标抗体溶液。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤s3所述的t1检测线包被胰岛素样生长因子结合蛋白-1抗体2；所...
【专利技术属性】
技术研发人员：毕景锐，蔡东玉，胡晓凤，
申请(专利权)人：广州朗坤生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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