【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及支持博卡病毒感染的细胞模型鉴定及其应用。
技术介绍
1、人博卡病毒(human bocavirus，hbov)是一种常见的呼吸道病原体，感染引起发烧、咳嗽等呼吸道相关症状以及急性中耳炎、肺炎等，当前没有特异性药物或疫苗治疗或预防。hbov属于细小病毒科博卡细小病毒属，是一种无包膜的二十面体病毒，其大小约26nm，含有长度约5.5kb的线性单链dna[1]。细小病毒通常依赖受体介导的内吞作用进入细胞，该过程涉及病毒颗粒与细胞表面的特定受体结合，进而内化进入宿主细胞[2]。2012年，qiu等通过反向遗传学成功构建了hbov1感染性克隆，并通过转染体系证明了hek293t细胞支持博卡病毒复制，但可能由于缺少特定受体表达，hek293t细胞并不支持病毒感染进入宿主细胞[3]；文献报道caco-2细胞虽然允许hbov1感染进入，却无法产生具备感染性的子代病毒颗粒，作为hbov1感染细胞模型具有局限性[4]；此外，hbov1虽然在分化良好或极化的人气道上皮(human airway epithelial,hae)细胞中通过气液界面(air–liquid interface,ali)培养，能够分离病毒[5,6,7]，但因其培养材料难以获得以及培养方式耗时昂贵，并未得到广泛使用。因此，当前仍缺少合适的病毒细胞培养模型，导致当前hbov相关研究停留在临床样本的分析与检测，极大阻碍了hbov抗病毒药物与疫苗设计的发展。
技术实现思路
1、本专利技术通过筛选36株细胞对hb
2、本专利技术提供一株支持hbov1完整生命周期的非洲绿猴上皮细胞——ma104细胞模型以及抗博卡病毒药物筛选的应用，其包括步骤：
3、1、利用纯化的人博卡病毒感染29株人源细胞以及7株非人源细胞，检测不同细胞对hbov1感染的敏感性。
4、2、在ma104细胞中对hbov1入侵、复制、组装等病毒特性进行详细评估，证实ma104支持hbov1完整生命周期。
5、3、选择广谱抗病毒药物以及已报道对同科病毒b19具有抑制作用的药物，在ma104细胞中评估小分子药物抗病毒效果。
6、具体来说，本专利技术提供以下技术方案：
7、一方面，本专利技术提供ma104细胞在构建支持博卡病毒感染的细胞模型中的应用。
8、在一些实施方案中，所述细胞模型支持博卡病毒的完整生命周期，包括病毒进入、复制、组装和释放。
9、在一些实施方案中，所述博卡病毒感染ma104细胞，能够检测到大小约为26nm左右的球形病毒颗粒。
10、另一方面，本专利技术提供ma104细胞在博卡病毒进入、复制、组装、释放研究中的应用。
11、另一方面，本专利技术提供ma104细胞在抗博卡病毒药物筛选以及疫苗评价中的应用。
12、另一专利技术，本专利技术提供抗博卡病毒药物筛选的方法，所述方法包括培养ma104细胞并感染博卡病毒进行药物筛选的步骤。
13、在一些实施方案中，所述方法包括收取胞内dna，检测病毒拷贝，计算待筛选药物对病毒的抑制率，从而筛选抗博卡病毒药物的步骤。
14、在一些实施方案中，所述方法还包括用含不同剂量药物的培养基对所述ma104细胞进行培养，计算胞内dna拷贝数，从而检测所述药物是否呈剂量依赖地抑制所述博卡病毒的步骤。
15、另一方面，本专利技术提供通过如上所述的方法筛选的药物在制备抗博卡病毒的药物组合物中的用途。
16、另一方面，本专利技术提供cidofovir(西多福韦)在制备抗博卡病毒的药物中的应用。
17、在一些实施方案中，所述博卡病毒为人博卡病毒。
18、在一些实施方案中，所述人博卡病毒选自hbov1、hbov2、hbov3和hbov4。
19、定义
20、人博卡病毒：人博卡病毒属于细小病毒科、博卡病毒属成员，是一种直径约26nm、无包膜的球形病毒颗粒。，博卡病毒是基因组长度约5.5kb的单负链dna(ssdna)病毒，其基因组包括三个开放阅读框(orf1、orf2和orf3)，表达三种结构蛋白(vp1、vp2和vp3)和六种非结构蛋白(ns1、ns1-70、ns2、ns3、ns4和np1)。结构蛋白vp1、vp2和vp3以1:1:10的比例构成病毒衣壳。病毒衣壳表面携带宿主的决定因素，并参与许多过程，包括宿主嗜性、细胞识别、致病性、组装和免疫反应。非结构蛋白ns1和np1对病毒dna复制至关重要，且在博卡病毒的不同分型之间保守性较高，通常被用作人博卡病毒检测的靶标。人博卡病毒分为hbov可分为hbov1、hbov2、hbov3和hbov4四型。其中，hbov1在呼吸道疾病患者中的检出率在0％-44％之间。hbov1感染主要引起呼吸道感染相关症状，而hbov2-4型则主要引起腹泻等症状。vp2作为病毒衣壳的主要构成成分，参与调控病毒多个过程包括，病毒感染趋向性、受体识别、组装以及免疫反应等。尽管hbov1-4型感染引起的症状不尽相同，通过对1-4型结构蛋白vp2的结构解析，发现hbov1与hbov2型在vr-iii区域有所不同，该区域在受体识别时发挥重要作用，这也解释了hbov1-4型感染趋向性的差别；但是，它们拥有相同的n端vp重排、残基水平，半胱氨酸、组氨酸以及vp2表面一些特定位置的修饰。此外，vp2序列也相对比较保守。
21、np1：np1为博卡病毒属所特有，序列高度保守。主要在病毒基因组复制和rna转录后修饰与加工中扮演重要角色。
22、ns1：非结构蛋白。博卡病毒感染细胞时，其最先被转录和翻译，病毒基因组的复制和表达需要ns1蛋白的调控。
23、病毒结合与内化：病毒是一种在活细胞内寄生并以复制方式增殖的非细胞型生物。不同病毒侵入细胞的方式不同，但大都需要通过结合至细胞表面特定的受体蛋白或脂质结构来实现细胞内化，从而启动入侵程序和感染宿主细胞。
24、感染性克隆：感染性克隆的构建技术属于反向遗传技术，是将病毒的全部基因组以及必须的反应元件顺次构建入载体，制成感染性转录本或者说感染性克隆，导入细胞后可拯救出具有感染性的病毒颗粒。感染性克隆所获得的病毒颗粒和野生株一样在复制周期中也会发生突变和重组，与其亲本病毒一样具有感染性，但是在宿主体内的演变不一定与其亲本一致，变异的方向可能不同。
25、病毒的天然感染：病毒的天然感染过程包括病毒进入、复制、组装、释放。病毒在进入易感细胞后，病毒基因组开始转录翻译生成新的病毒衣壳蛋白。这些蛋白进一步组装并将新的病毒基因组包装起来形成完整的病毒颗粒并释放到宿主细胞外。
26、ma104：本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.MA104细胞在构建博卡病毒感染细胞模型中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述细胞模型支持博卡病毒的完整生命周期，包括病毒进入、复制、组装和释放。
3.MA104细胞在博卡病毒进入、复制、组装和/或释放机制研究中的应用。
4.MA104细胞在抗博卡病毒药物筛选以及疫苗评价中的应用。
5.抗博卡病毒药物筛选的方法，其特征在于，所述方法包括培养MA104细胞并感染博卡病毒进行药物筛选的步骤。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述方法包括收取胞内DNA，检测病毒拷贝，计算待筛选药物对病毒的抑制率，从而筛选抗博卡病毒药物的步骤。
7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于，所述方法还包括使不同剂量的候选药物与MA104接触，计算胞内DNA拷贝数，从而检测所述药物是否呈剂量依赖地抑制所述博卡病毒的步骤。
8.通过根据权利要求5-7中任一项所述的方法筛选的药物在制备抗博卡病毒的药物组合物中的应用。
9.Cidofovir(西多福韦)在制备抗博卡病毒的药物中的应用
10.根据权利要求1-4、8-9中任一项所述的应用或根据权利要求5-7中任一项所述的方法，其特征在于，所述博卡病毒为人博卡病毒，优选地，所述人博卡病毒选自HBoV1、HBoV2、HBoV3和HBoV4。
...【技术特征摘要】
1.ma104细胞在构建博卡病毒感染细胞模型中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述细胞模型支持博卡病毒的完整生命周期，包括病毒进入、复制、组装和释放。
3.ma104细胞在博卡病毒进入、复制、组装和/或释放机制研究中的应用。
4.ma104细胞在抗博卡病毒药物筛选以及疫苗评价中的应用。
5.抗博卡病毒药物筛选的方法，其特征在于，所述方法包括培养ma104细胞并感染博卡病毒进行药物筛选的步骤。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述方法包括收取胞内dna，检测病毒拷贝，计算待筛选药物对病毒的抑制率，从而筛选抗博卡病...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈新文，唐婕琳，杨琪，陈思杰，
申请(专利权)人：广州国家实验室，
类型：发明
国别省市：
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